藿香正氣水中中藥成分對大鼠體內(nèi)乙醇代謝的影響

曾思火，歐俊興，谷涓華，楊凱潤，王蕊，李志，李樹華，張瑞林

（1.昆明醫(yī)科大學法醫(yī)學院，云南昆明 650500；2.云南省公安廳刑偵總隊，云南昆明 650228；3.昆明市公安局交警支隊，云南昆明 650031）

藿香正氣水中中藥成分對大鼠體內(nèi)乙醇代謝的影響

曾思火1，歐俊興2，谷涓華1，楊凱潤1，王蕊1，李志3，李樹華1，張瑞林1

（1.昆明醫(yī)科大學法醫(yī)學院，云南昆明 650500；2.云南省公安廳刑偵總隊，云南昆明 650228；3.昆明市公安局交警支隊，云南昆明 650031）

目的研究服用藿香正氣水后，大鼠體內(nèi)乙醇含量及藥代動力學參數(shù)的變化。方法將大鼠隨機分為3組，分別按3.0mL/kg劑量灌胃白酒、低濃度中藥酒和高濃度中藥酒，于給藥前（0min）和給藥后5min、10min、15min、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h斷尾采血，用頂空-氣相色譜法測定大鼠血液中的乙醇含量，用DAS 2.0軟件計算乙醇的藥代動力學參數(shù)，SPSS 17.0軟件對藥代動力學參數(shù)進行分析。結(jié)果高濃度中藥酒組與白酒組最大血藥濃度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其他藥代動力學參數(shù)在三組間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論藿香正氣水中中藥成分對大鼠體內(nèi)乙醇代謝和消除無明顯影響。本研究對涉及飲用藿香正氣水導致的交通案（事）件的定性判定和處理以及藥物間的相互作用研究具有參考意義。

法醫(yī)毒理學；藥代動力學；氣相色譜法；乙醇；藿香正氣水

藿香正氣水具有解表化濕、理氣和中的作用，常被作為非處方藥廣泛用于治療外感風寒、內(nèi)傷濕滯或夏傷暑濕所致的感冒。藿香正氣水除含有藿香、紫蘇、大腹皮、茯苓、白芷、陳皮、厚樸、半夏等十余味中藥成分外，還含有40%～50%的乙醇溶劑。由于藥物與食物、飲料、中草藥以及其他藥物間相互作用現(xiàn)象普遍[1-2]，加之藿香正氣水的應用日益廣泛，不良反應的報道逐漸增多[3-4]。如當藿香正氣水與頭孢菌素類、硝基咪唑類和喹諾酮類抗菌藥同時使用時，這些藥物會抑制乙醛脫氫酶的活性，影響乙醇代謝產(chǎn)物乙醛氧化為乙酸，致使乙醛在體內(nèi)蓄積，出現(xiàn)視物模糊、面色潮紅、頭暈、急性肝損害等乙醛中毒癥狀，俗稱雙硫侖樣反應[5-7]。此外，藿香正氣水中含有的中藥成分是否會對乙醇的體內(nèi)代謝產(chǎn)生影響，使乙醇體內(nèi)代謝消除速度發(fā)生改變，是法醫(yī)學實踐中出現(xiàn)的新問題。因此，研究藿香正氣水中中藥成分對大鼠體內(nèi)乙醇代謝的影響，具有法醫(yī)學價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

健康雄性SD大鼠18只，體質(zhì)量（280±20）g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。大鼠以每籠6只群養(yǎng)，自由攝食飲水，室溫20～24℃，濕度40%～60%。適應性喂養(yǎng)1周后進行實驗。

1.1.2 儀器條件

7890 A頂空-氣相色譜儀（美國Agilent公司），雙柱（DB-ALC1和DB-ALC2石英毛細管柱），雙檢測器（FID）。頂空及氣相色譜的分析條件按照GA/T 1073—2013標準[8]設定。

1.1.3 試劑藥品

“東方”牌藿香正氣水（10 mL/支，含乙醇40%～50%，云南騰沖縣東方紅制藥公司），52度紅星二鍋頭酒（北京紅星股份有限公司），乙醇標準溶液（美國Cerilliant公司），叔丁醇（色譜純，美國SIGMA公司）。1.2方法

1.2.1 灌胃液的制備

給藥依據(jù)：以成人（按體質(zhì)量50kg計算）每次服用藿香正氣水（10mL）中溶質(zhì)含量的15倍作為高濃度組大鼠的給藥量，5倍作為低濃度組大鼠的給藥量[9]。

白酒：52度紅星二鍋頭。低濃度中藥酒：取藿香正氣水8.3mL，常溫下?lián)]干，殘渣用紅星二鍋頭定容至25.0mL。高濃度中藥酒：取藿香正氣水10.0mL，常溫下?lián)]干，殘渣用紅星二鍋頭定容至10.0mL。

1.2.2 實驗分組

將18只大鼠隨機分為3組，即白酒組、低濃度中藥酒組和高濃度中藥酒組，每組6只。3組動物分別按3.0 mL/kg劑量灌胃白酒、低濃度中藥酒和高濃度中藥酒，并于給藥前（0 min）和給藥后5 min、10 min、15 min、30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、8 h斷尾采血0.2mL，肝素抗凝，-20℃保存。

1.2.3 樣品檢測

依據(jù)GA/T 1073—2013標準[8]，對大鼠血液中的乙醇進行定性定量分析。定量標準曲線線性范圍：0.1～4.0mg/mL，線性回歸方程：y=1.0818x+0.0221（r= 0.9996）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用DAS 2.0軟件，以二室模型處理分析乙醇的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，計算藥代動力學參數(shù)。采用SPSS 17.0軟件對藥代動力學參數(shù)進行單因素方差分析，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血液中乙醇含量及血藥濃度-時間曲線

本研究檢測了白酒組、低濃度中藥酒組和高濃度中藥酒組大鼠不同時間點血液中乙醇的含量，描繪血藥濃度-時間曲線（圖1）。

2.2 大鼠血液中乙醇的藥代動力學參數(shù)及統(tǒng)計分析

采用DAS 2.0軟件，以二室模型計算主要藥代動力學參數(shù)（表1）。結(jié)果顯示，三組間最大血藥濃度（Cmax）比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩兩比較，高濃度中藥酒組Cmax高于白酒組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其余各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。三組間的藥峰時間（peak time，Tmax）、半衰期（half-life，T1/2）、血藥濃度-時間曲線下面積（area under the blood concentration-time curve，AUC）、一階矩曲線下面積（area under the first order moment curve，AUMC）、消除速率常數(shù)（elimination rate constant，Kel）、清除率（clearance rate，CL）和平均駐留時間（average residence time，MRTPO）差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠血液中乙醇的藥代動力學參數(shù)（n=6，±s）

表1 各組大鼠血液中乙醇的藥代動力學參數(shù)（n=6，±s）

注：1）與白酒組比較，P＜0.05

2.3 案例應用

某年10月，楊某（女，35歲，體質(zhì)量50 kg）因涉嫌酒駕，交警對其進行呼氣式乙醇測試，結(jié)果顯示為1.48mg/mL。20min后抽取楊某的靜脈血進行GC法檢測，檢測結(jié)果為1.46mg/mL。交警依據(jù)楊某血液中乙醇含量和相關(guān)法規(guī)，以危險駕駛罪定罪處罰楊某。當事人不服，認為其血液中乙醇來源于她當天服用的藿香正氣水（3次，共9支），并非飲酒所致。依據(jù)Widmark公式和乙醇的理論消除率[10]，結(jié)合當事人陳述的服藥時間和服藥量，推算當事人血液中的乙醇含量：至抽血時，當事人服用的藿香正氣水中的乙醇分布在其血液中的最高含量（0.53 mg/mL）遠遠低于實際檢測結(jié)果。此時，當事人又堅持認為藿香正氣水中的中藥成分會影響乙醇的代謝，致使其血液中乙醇質(zhì)量濃度與推算質(zhì)量濃度出現(xiàn)差異。綜合本研究結(jié)果和案情分析認為，藿香正氣水中中藥成分對楊某體內(nèi)乙醇的代謝和消除不會產(chǎn)生明顯的影響，當事人的質(zhì)疑不成立。

3 討論

乙醇在機體內(nèi)的代謝受到乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）、乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）和細胞色素P4502E1酶（cytochrome P4502E1 enzyme，CYP2E1）的影響；體內(nèi)乙醇主要被ADH代謝為乙醛，乙醛被ALDH代謝為乙酸；過量乙醇可誘導哺乳動物肝CYP2E1的活性，啟動微粒體乙醇氧化途徑，產(chǎn)生大量乙醛和氧自由基，造成組織細胞損害。ADH、ALDH和CYP2E1具有高度遺傳多態(tài)性，其中ADH1、ALDH2和CYP2E1B（c1/c2）對乙醇代謝發(fā)揮著關(guān)鍵作用[11-13]。趙雪珂等[14]研究表明，長期過量飲酒能降低大鼠肝組織中ADH1和ALDH2的活性，從而延緩乙醇的代謝消除。陳大健等[15]研究認為，乙醇能顯著抑制鯽魚CYP2E1的活性。中草藥對乙醇的代謝也會產(chǎn)生影響，如葛根、三七、甘草等中藥的水提物會抑制ADH的活性，而白豆蔻等中草藥的水提物則會增加ADH的活性[16]。Bedada等[17-19]研究認為，中草藥丹參中的成分丹參酮會抑制人體肝組織中CYP2E1的活性。前期研究表明，云南黃草烏能夠誘導大鼠肝組織中CYP2E1的活性；草烏中的烏頭堿能降低大鼠對乙醇的總吸收量，延緩乙醇消除[20]。

本研究結(jié)果顯示，高濃度中藥酒組Cmax高于白酒組，而低濃度中藥酒組Cmax與其他兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），Cmax是衡量藥物吸收情況的重要指標，由此認為藿香正氣水中的中藥濃度增大時，可能對大鼠體內(nèi)乙醇的吸收具有促進作用；而三組間Tmax、T1/2、AUC、AUMC、Kel、CL和MRTPO差異均無統(tǒng)計學意義。綜合分析認為，藿香正氣水中中藥成分對大鼠體內(nèi)乙醇的代謝和消除無明顯影響。但藿香正氣水中的單一中藥成分（藿香、紫蘇、大腹皮、茯苓、白芷等）是否影響乙醇的吸收、代謝和消除仍未明確。

此外，ADH1、ALDH2和CYP2E1在人和大鼠肝中表達的個體差異較小[21-22]，但是藿香正氣水中中藥成分對人體內(nèi)乙醇的吸收、代謝和消除影響是否與大鼠相同，藿香正氣水中中藥成分對人體ADH、ALDH2和CYP2E1的影響機制等還有待進一步研究。盡管如此，本研究結(jié)果可為藿香正氣水相關(guān)的酒后或醉酒駕車案（事）件的定性提供實驗數(shù)據(jù)支持，可依據(jù)服用藿香正氣水的劑量、時間、Widmark公式和乙醇的理論消除率對案（事）件當事人血液中乙醇含量進行推算。

[1]Mora F，Molina JD，Zubillaga E，et al.CYP450 and its implications in the clinical use of antipsychotic drugs[J/OL].Clin Exp Pharmacol，2015，5（3）：176.[2016-02-02].http://dx.doi.org/10.4172/2161-1459. 1000176.

[2]Kato M，Chiba K，Ito T，et al.Prediction of interindividualvariabilityinpharmacokineticsfor CYP3A4 substrates in humans[J].Drug Metab Pharmacokinet，2010，25（4）：367-378.

[3]楊慧明.藿香正氣水的不良反應[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2010，4（1）：110-111.

[4]劉紹俊，楊清麗.藿香正氣水致不良反應/不良事件80例研究分析[J].當代醫(yī)學，2014，20（7）：133-134.

[5]高謙，卜艷麗，李成建.藿香正氣水合用所致雙硫侖樣反應文獻概述[J].中國藥物濫用防治雜志，2014，20（6）：364.

[6]李延華.藿香正氣水與頭孢菌素類藥物合用引起雙硫侖樣反應1例[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2013，7（16）：164.

[7]游向東，張靜歌.使用藿香正氣水和左氧氟沙星出現(xiàn)雙硫侖樣反應1例[J].醫(yī)學理論與實踐，2015，28（2）：153.

[8]全國刑事技術(shù)標準化技術(shù)委員會毒物分析技術(shù)委員會.生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗方法：GA/T 1073—2013[S].北京：中國標準出版社，2013.

[9]袁伯俊，廖明陽，李波.藥物毒理學實驗方法與技術(shù)[M].北京：化學工業(yè)出版社，2007：403-412.

[10]卓先義，卜俊，向平，等.血中酒精濃度的回推算研究[J].中國法醫(yī)學雜志，2010，25（5）：345-347.

[11]李莉，李成濤，趙書民，等.乙醇、乙醛慢代謝與酒后駕車肇事[J].中國司法鑒定，2010，（1）：30-32.

[12]熊卉，王薇，葉懿，等.ALDH2基因多態(tài)性與乙醇代謝及外周乙醛積蓄程度的關(guān)系[J].法醫(yī)學雜志，2014，30（1）：31-35.

[13]冷愛民，王德強，袁偉建.漢族人群酒精性肝病ALDH2和CYP2E1基因多態(tài)性研究[J].重慶醫(yī)科大學學報，2008，33（9）：1108-1110.

[14]趙雪珂，程明亮，張權(quán)，等.飲酒對大鼠肝臟乙醇脫氫酶1和乙醛脫氫酶2表達的影響[J].中華內(nèi)科雜志，2013，52（10）：855-857.

[15]陳大健，楊海峰，覃少華，等.乙醇對鯽魚CYP2E1活性的影響[J].西北農(nóng)林科技大學學報（自然科學版），2007，35（8）：82-86.

[16]蘆潔，李文哲，倪亞明.中藥水提取物對乙醇脫氫酶活性影響的初步研究[J].同濟大學學報（醫(yī)學版），2002，23（1）：23-24，30.

[17]Bedada SK，Neerati P.Resveratrol pretreatment affects CYP2E1 activity of chlorzoxazone in healthy human volunteers[J].Phytother Res，2016，30（3）：463-468.

[18]Wang X，Cheung CM，Lee WY，et al.Major tanshinones ofDanshen（Salviamiltiorrhiza）exhibit different modes of inhibition on human CYP1A2，CYP2C9，CYP2E1 and CYP3A4 activities in vitro[J]. Phytomedicine，2010，17（11）：868-875.

[19]Prescott LF.Paracetamol，alcohol and the liver[J]. Br J Clin Pharmacol，2000，49（4）：291-301.

[20]李明杰，張瑞林，方平，等.乙醇和烏頭堿在大鼠體內(nèi)代謝的相互影響[J].昆明醫(yī)科大學學報，2014，35（2B）：5-7.

[21]趙雪珂，程明亮，張權(quán)，等.短期飲用某醬香型白酒對大鼠乙醇代謝的影響[J].廣東醫(yī)學，2013，34（24）：3695-3700.

[22]韓露，陳真.CYP2E1在酒精性肝病中的作用[J].安徽醫(yī)藥，2014，18（6）：997-1001.

Effect of the Chinese Herbal Medicinal Ingredients in Huoxiang Zhengqi Liquid on Alcohol Metabolism in Rats

ZENG Si-huo1,OU Jun-xing2,GU Juan-hua1,YANG Kai-run1,WANG Rui1,LI Zhi3,LI Shu-hua1,ZHANG Rui-lin1
（1.School of Forensic Medicine,Kunming Medical University,Kunming 650500,China;2.Criminal Investigation Corps,Public Security Department of Yunnan Province,Kunming 650228,China;3.Traffic Police Branch,Kunming Public Security Bureau,Kunming 650031,China）

ObjectiveTo study the changes of alcohol content and pharmacokinetic parameter in rats after taking Huoxiang Zhengqi liquid.MethodsThe rats were randomly divided into three groups and given with white alcohol at the dose of 3.0 mL/kg,low-dose and high-dose Chinese medicine liquor,respectively.The blood was collected before administration and 5min,10min,15min,30min,1h,2h,3h,4h, 5 h,6 h and 8 h after administration by cutting rats’tails.The concentrations of alcohol in blood were detected by headspace-gas chromatography method.The main pharmacokinetic parameters were calculated by DAS 2.0,and then analyzed by SPSS 17.0.ResultsThe difference of maximum blood concentrations between high-dose Chinese medicine alcohol group and white alcohol group was statistically significant（P＜0.05）.There was no significant difference in other pharmacokinetic parameters among three groups（P＞0.05）.ConclusionThe Chinese herbal medicinal ingredients in the Huoxiang Zhengqi liquid has no effect on the metabolism and elimination of ethanol in rats.The research provides useful reference for the qualitative assessment and processing of traffic accident cases involved in Huoxiang Zhengqi liquid and the studies related to drug-interaction.

forensic toxicology;pharmacokinetics;chromatography,gas;ethanol;Huoxiang Zhengqi liquid

DF795.1

A

10.3969/j.issn.1004-5619.2016.06.007

1004-5619（2016）06-0424-04

2016-03-17）

（本文編輯：嚴慧）

云南省應用基礎(chǔ)研究資助項目（2013FB118）；云南省教育廳研究基金資助項目（2014Y161）

曾思火（1989—），男，碩士研究生，主要從事法醫(yī)毒物分析研究；E-mail：972203482＠qq.com

李樹華，女，高級實驗師，主要從事法醫(yī)毒理學和毒物分析工作；E-mail：2530428326＠qq.com

通信作者：張瑞林，男，博士，主要從事法醫(yī)毒物分析工作；E-mail：267181534＠qq.com