兒童急性淋巴細(xì)胞白血病免疫分型特點(diǎn)分析

盧 榕，陳志奇

(廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院，福建 廈門 361003)

兒童急性淋巴細(xì)胞白血病免疫分型特點(diǎn)分析

盧 榕，陳志奇

(廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院，福建 廈門 361003)

目的：對(duì)45例兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)的各抗原表達(dá)規(guī)律進(jìn)行總結(jié)分析。方法：采用流式細(xì)胞術(shù)直接或間接免疫熒光法檢測45例兒童ALL的免疫表型。結(jié)果：45例兒童ALL中，B-ALL的患兒明顯比T-ALL的患兒多，比率分別為88.8%與11.1%。 B-ALL中CD19與CD22表達(dá)率分別為100%、93.3%，敏感性最高。有51.1%的患兒為伴有髓系相關(guān)抗原表達(dá)的ALL(My+-ALL)，主要表達(dá)的髓系抗原分別為CD13(20/45)、CD15(8/45)和CD33(6/45)。結(jié)論：免疫分型是診斷ALL的重要手段，能夠協(xié)同形態(tài)學(xué)為臨床確定診斷、合理治療、判斷預(yù)后提供重要依據(jù)。

淋巴細(xì)胞白血??；免疫分型；兒童

兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(acute leukemia，ALL)是起源于B系或T系淋巴祖細(xì)胞的惡性克隆性疾病，高居兒童腫瘤發(fā)病率榜首。FAB方案是以細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征和組化染色為基礎(chǔ)的簡便方法，由于FAB分類法不能顯示細(xì)胞來源、分化階段及預(yù)后情況，隨著科學(xué)技術(shù)進(jìn)一步的發(fā)展，WHO在此基礎(chǔ)上提出了更為全面的MICM分型方案[1]，其中的免疫學(xué)即免疫分型。由于白血病細(xì)胞阻滯于分化發(fā)育的某個(gè)階段，根據(jù)其來源和分化階段不同，白血病細(xì)胞表面或胞漿內(nèi)的抗原標(biāo)志也不盡相同。采用已知的單克隆抗體來檢測這些標(biāo)志，進(jìn)行免疫分型，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)可將白血病診斷的正確率顯著提高。由于某些標(biāo)志與臨床特征、疾病危險(xiǎn)分層、治療及進(jìn)展等相關(guān)，免疫分型可以為臨床正確診斷白血病，選擇適宜的治療方案并有效評(píng)估預(yù)后提供依據(jù)[2]?，F(xiàn)對(duì)廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院45例兒童ALL患兒免疫分型結(jié)果進(jìn)行分析，并對(duì)各抗原表達(dá)規(guī)律、分布情況進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年10月～2015年12月廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的住院患兒45例，皆為ALL初發(fā)兒童，男25例，女20例，年齡10個(gè)月～16歲。均按照兒童急性淋巴細(xì)胞白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)明確診斷且資料完整。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要儀器 Beckmam-coulter FC500 MPL流式細(xì)胞儀。

1.2.2 主要試劑 采用四色直接標(biāo)記的熒光抗體，選擇單抗如下，T細(xì)胞系抗體：CD2、CD3、CD5、CD7；B細(xì)胞系抗體：CD10、CD19、CD20、CD22、CD79a；髓細(xì)胞系抗體：CD13、CD14、CD33、CD117、CD56、CD15；非特異性早期標(biāo)志：CD34、HLA-DR。上述試劑均及各自陰性對(duì)照均購于Beckmam-coulter公司。

1.3 免疫分型的判斷標(biāo)準(zhǔn)

采用歐洲白血病免疫學(xué)分型協(xié)作組(EGIL)提倡的抗原積分系統(tǒng)[3]。

2 結(jié)果

45例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒中，單純型19例(42.2%),以B淋巴細(xì)胞表型為主，有15例；T淋巴細(xì)胞表型較少，僅有4例。變異型26例(57.8%)，以My+-B- ALL(B-ALL伴髓系抗原表達(dá))為主，有21例；My+-T- ALL(T-ALL伴髓系抗原表達(dá))有3例；T淋巴細(xì)胞表型/B淋巴細(xì)胞表型(T/B)2例。各型強(qiáng)表達(dá)抗原分布見表1。

表1 45例兒童急性淋巴白血病患者的免疫分型

3 討論

兒童惡性腫瘤發(fā)病率最高的就是急性淋巴細(xì)胞白血病，隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，特異性靶向治療及干細(xì)胞移植等技術(shù)的出現(xiàn),其緩解率不斷攀升，可達(dá)90%以上，但仍有約30%的患兒由于復(fù)發(fā)而治療失敗。由于T-ALL的臨床、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)特點(diǎn)以及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)路徑異常均與B-ALL有所區(qū)別,有許多學(xué)者認(rèn)為T-ALL免疫表型患兒預(yù)后較B-ALL患兒差，T-ALL是就是高危急性淋巴細(xì)胞白血病[4]，再加上特異性靶向藥的興起，精準(zhǔn)醫(yī)療的需要，ALL免疫分型至關(guān)重要。

本研究中, B-ALL主要陽性表達(dá)分別為：CD19(38/38)、CD22(35/38)、CD10(32/38)、CD20(25/38)、CD79a(19/38)、HLA-DR(33/38)。敏感性最高的為CD19，其表達(dá)率為100%，明顯高于其它B系抗原，對(duì)B系相關(guān)性白血病的診斷具有重要作用，也可為特異性靶向治療提供靶點(diǎn)。其次是CD22，表達(dá)率為92.1%，這是近年來靶向治療研究的新熱點(diǎn)。CD20的表達(dá)率也較高，由于利妥昔單克隆抗體是針對(duì)CD20的特異性靶向藥，CD20+的B-ALL采用利妥昔單克隆抗體聯(lián)合化療效果好[5]。CD3和CD7對(duì)T-ALL的診斷特異性和敏感性均較高，可用于T-ALL與和B- ALL的鑒別診斷。本研究中，T-ALL的CD2、CD3、CD5、CD7表達(dá)率達(dá)100%,但CD2、CD5、CD7在B-ALL可見交叉表達(dá)，因此CD3對(duì)T-ALL的診斷更具特異性。有研究表示CD3+T-ALL的CR率明顯比CD3-T-ALL低，提示CD3的表達(dá)影響兒童T-ALL的預(yù)后，與首次化療完全緩解有關(guān)[6]，因此，CD3也是一種預(yù)后不好的標(biāo)志。

國內(nèi)外研究ALL髓系抗原表達(dá)的文獻(xiàn)較多，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為表達(dá)髓系抗原陽性的ALL(My+-ALL)的白血病細(xì)胞同時(shí)來源于淋巴及髓系祖細(xì)胞,或者是多能淋巴造血前體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化結(jié)果 。本研究中23例ALL伴有髓系相關(guān)抗原表達(dá)，其中表達(dá)率最高的為CD13(20/45)，其次為：CD15(8/45)、CD33(6/45)，有51.1%(23/45)的ALL患者伴有髓系相關(guān)抗原表達(dá)(My+-ALL)，略高于佟海俠等[7]的研究，其結(jié)果顯示42.5%的兒童ALL表達(dá)髓系相關(guān)抗原，明顯高于文獻(xiàn)報(bào)道的兒童ALL髓系相關(guān)抗原陽性率不會(huì)超過24%[8],但是國內(nèi)近年來也有文獻(xiàn)報(bào)道超過50%[9],更有甚者如邢超等[10]的研究中兒童ALL的CD13表達(dá)率高達(dá)87.6%，明顯高于國內(nèi)其他文獻(xiàn)的結(jié)果。國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的兒童ALL表達(dá)髓系相關(guān)抗原陽性率的差異較大，可能與檢測方法、陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)，也可能與樣本數(shù)量、地域有關(guān)。國內(nèi)外關(guān)于兒童ALL表達(dá)髓系相關(guān)抗原對(duì)預(yù)后是否有影響尚無統(tǒng)一結(jié)論。

CD13不僅表達(dá)于髓系祖系,也可見于各階段粒細(xì)胞上，CD33主要分布在髓系血細(xì)胞的早期階段。CD13、CD33常在ALL中有不同程度表達(dá)，本研究中CD13與CD33在ALL中表達(dá)率分別為44.4%(20/45)與13.3%(6/45),因此CD13與CD33在判斷白血病是否混合有髓系來源時(shí)具有很高的診斷價(jià)值。

近年來，相關(guān)研究表明CD34抗原選擇性地表達(dá)于造血干(祖)細(xì)胞的表面，是目前公認(rèn)的，識(shí)別早期造血干(祖)細(xì)胞的最早的抗原,可以作為監(jiān)測原始細(xì)胞的一個(gè)很好的標(biāo)志[11]。在本研究中，CD34在ALL中的表達(dá)率為73.3%(33/45)。據(jù)報(bào)道，ALL標(biāo)本中，CD34表達(dá)的白血病細(xì)胞比CD34不表達(dá)的白血病細(xì)胞更不易凋亡；在T-ALL中, CD34表達(dá)的白血病細(xì)胞顯示出更明顯的增殖活性[12]。CD34在T-ALL的高表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)，CD34+的T-ALL完全緩解率低于CD34-的 T-ALL 患者。有研究認(rèn)為CD34抗原表達(dá)是兒童ALL的獨(dú)立高危因素，臨床特征上主要表現(xiàn)為肝、脾、淋巴結(jié)腫大等髓外浸潤[13]。

當(dāng)ALL伴有髓系抗原表達(dá)時(shí)，可能在細(xì)胞形態(tài)及組化染色上發(fā)生一定的改變，特別是混合型急性白血病，給實(shí)驗(yàn)室骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)工作人員造成很大的困擾。在這些細(xì)胞形態(tài)及組化染色模棱兩可的白血病診斷中，免疫分型的作用顯得尤為為重要，尤其是診斷混合型急性白血病(T淋巴細(xì)胞表型/髓系表型、B淋巴細(xì)胞表型/髓系表型、T淋巴細(xì)胞表型/B淋巴細(xì)胞表型、T淋巴細(xì)胞表型/B淋巴細(xì)胞表型/髓系表型)時(shí)。

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)具有成本低，時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，能夠確診多數(shù) ALL，易于在各層次醫(yī)院開展。但是傳統(tǒng)的FBA分型只能在細(xì)胞水平對(duì)白血病進(jìn)行分類，而細(xì)胞的形態(tài)千變?nèi)f化，對(duì)工作人員要求較高，對(duì)于混合型急性白血病等形態(tài)不典型者判斷困難，有一定局限性。免疫分型是通過檢測白血病細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的抗原標(biāo)志,客觀地對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的來源進(jìn)行分析鑒別,對(duì)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)是有力的補(bǔ)充,不僅有助于臨床確診，其分型更為合理地制定治療方案以及判斷預(yù)后提供有力依據(jù)。

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本文編輯：周文超

盧 榕,女,主管技師,從事血液與骨髓檢驗(yàn)工作

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1671-0126(2016)05-0034-03