人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒的構(gòu)建及質(zhì)量控制研究

鐘志惟，王 棟，殷香保，鄔林泉，黃長文，黃明文，周 凡

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽外科，南昌 330006)

人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒的構(gòu)建及質(zhì)量控制研究

目的 探討三氧化二砷(As2O3)納米新劑型的制備和質(zhì)量控制。 方法 以聚乙醇化聚乳酸(PEG-PLA)為載體材料，W/O/W型超聲乳化制備As2O3納米粒，同時偶聯(lián)具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，最終得到人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒。對其粒徑分布、Zata電位、載藥量和包封率進(jìn)行測定，通過透射電鏡(TEM)觀察其表觀形態(tài)，同時考察其體外釋藥和穩(wěn)定性。選擇24只肝癌裸鼠，隨機分為VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組及As2O3-PEG-PLA組，通過尾靜脈注射納米粒，高效液相色譜法測定As2O3在兩組裸鼠體內(nèi)的分布；免疫組化及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)表達(dá)量。結(jié)果 本實驗制得的As2O3納米制劑VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA粒徑為(141.9±13.2)nm，Zata電位為(10.2±1.1)mV;經(jīng)TEM觀察呈圓形或橢圓形顆，粒狀、大小較一致，分散性較好；載藥量為(5.51±1.83)%，包封率為(62.12±5.98)%。體外釋放發(fā)現(xiàn)其具有緩釋效果，半數(shù)釋放時間t1/2分別為10 h；初步穩(wěn)定性考察結(jié)果發(fā)現(xiàn)該制劑穩(wěn)定性良好。與As2O3-PEG-PLA組比較，VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組中腫瘤、肝組織的As2O3濃度較高，心、血液、腎組織的As2O3濃度較低(P<0.05)，且腫瘤組織中VEGFR-2陽性率及蛋白表達(dá)較低。結(jié)論 以PEG-PLA為載體材料制備得到As2O3納米制劑，且偶聯(lián)具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，最終得到粒徑分布均勻，包封率和載藥量高，穩(wěn)定性良好的納米制劑，且初步證實在肝癌裸鼠體內(nèi)具有良好的靶向作用。

砷劑；聚乙二醇類；聚乳酸；內(nèi)皮細(xì)胞生長因子

三氧化二砷(As2O3)是中藥砒霜的主要有效成分，長期以來被認(rèn)為是一種致癌物。20世紀(jì)70年代，我國學(xué)者首先將其用于急性早幼粒性白血病的治療，取得了顯著臨床療效[1]。大量研究證實，As2O3能夠抑制胃癌、肺癌、腸癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌多種實體瘤的生長，提示As2O3是一種廣譜抗腫瘤藥物，其抗肝癌作用更是受到人們的重視[2-4]。目前，國內(nèi)外臨床上應(yīng)用As2O3治療腫瘤的劑型主要是注射液，進(jìn)入體內(nèi)的As2O3由于血液循環(huán)的作用彌散至周圍組織，給正常組織帶來毒性和不良反應(yīng)的同時降低了腫瘤部位的有效藥物濃度。為了滿足臨床需要，需要將其制成高效低毒的納米新劑型。

近年來，納米技術(shù)越來越多地被應(yīng)用于抗腫瘤藥物的緩釋治療研究，取得了較好的效果[5]。納米粒狀態(tài)的腫瘤藥物體內(nèi)釋放機制為緩慢釋放，因此藥物峰谷濃度波動減小，藥物作用時間延長。近年來肝癌治療的新方向為抗血管生成治療，靈感來源于肝癌的富血管特性，腫瘤血管的生長有益于其生長。其中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)是肝癌血管生成中最重要的因子之一，其通過與其受體(VEGFR)結(jié)合后自身磷酸化后激活細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路實現(xiàn)其生物學(xué)效應(yīng)[6-7]，因此VEGFR-2可作為肝癌免疫靶向治療及抗血管生成治療的雙重靶點。本文采用聚乙醇化聚乳酸(PEG-PLA)為載體材料，同時偶聯(lián)具有肝靶向作用的VEGFR-2，制備As2O3納米粒，并對其質(zhì)量進(jìn)行了控制，以期提高As2O3的療效。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑 VCX800型超聲波細(xì)胞粉碎機(SONICS公司)，Allegra X-15R低溫高速離心機(Beckman公司)，Tec-10透射電子顯微鏡(Philips公司)，Mastersizer 3000(Malvern公司)，CO2培養(yǎng)箱(REVCO公司)，As2O3(Sigma公司)。本實驗室自制VEGFR-2-scFv(單鏈可變區(qū)片斷)；PEG-PLA(上海寶生)，兔抗VEGFR-2多克隆抗體(美國Abcam公司)，BCA試劑盒、兔抗GAPPDH單克隆抗體(碧云天生物技術(shù)有限公司)。人肝癌Bel 7402細(xì)胞株由南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院提供。

1.2 方法

1.2.1 制備As2O3-PEG-PLA納米粒 W/O/W型超聲乳化法制備As2O3-PEG-PLA納米粒。(1)制備W/O初乳液：超聲條件下將適量As2O3溶液加入到5 mL PEG-PLA二氯甲烷溶液中，后將少量Tween 80與Span 80混合乳化劑(5∶1)加入所得混合溶液中，超聲(100 W,5 min)下使之均一穩(wěn)定，獲得W/O初乳液。(2)As2O3-PEG-PLA納米粒制備：所得初乳液在超聲條件(100 W,10 min)下滴加到50 mL O-羧甲基殼聚糖(O-CMC)水溶液中，獲得W/O/W復(fù)乳液。所得復(fù)乳液室溫下電磁攪拌(300 r/min)4 h以上，使有機溶劑完全揮發(fā)。此時所得混懸液以2 000 r/min離心5 min，棄去上清液保留沉淀物，用蒸餾水離心洗滌沉淀3次，除去未包埋藥物，冷凍干燥所得沉淀，即As2O3-PEG-PLA納米粒。

1.2.2 人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒的制備 取As2O3隱形納米粒與抗VEGFR-2單鏈抗體(質(zhì)量比為3∶1)，將二者溶于SBF溶液(pH=7.4)，電磁攪拌下加入碳二亞胺(與單抗質(zhì)量比為2∶1)溶液，4 ℃下攪拌2 h后離心分離，所得內(nèi)容物經(jīng)超聲分散后采用去離子水洗滌3遍，經(jīng)冷凍干燥所得粉狀固體即As2O3-PEG-PLA納米粒與抗VEGFR-2單鏈抗體的偶聯(lián)物(抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒)?？筕EGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒純化過程采用Sephadex G-200層析柱進(jìn)行。

1.2.3 粒徑分布及Zata電位 取VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA粉末適量，加水稀釋，用激光粒度儀測定納米粒的平均粒徑及分布，同時用Zata電位測定儀測定其Zata電位。

1.2.4 透射電鏡(TEM)形態(tài)表征 用TEM觀察載藥納米粒的結(jié)構(gòu)。試樣制作：把冷凍干燥后VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粉末加入到燒杯中，加入去離子水超聲，然后將液體樣品滴到已載膜的銅網(wǎng)上。晾干后于TEM下觀察納米粒子的大小和形貌。

1.2.5 載藥量(DL)和包封率(ER)測定 砷含量測定采用氫化物原子熒光法。VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粉末微波消解后，酸性條件下加入硫脲-抗壞血酸和硼氫化鉀，還原砷為AsH3[7]。二氯甲烷中溶于一定量的VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒，后加入5 mL蒸餾水，充分混懸后靜置1 h?；旌?次分離收集的水相溶液，2 000 r/min離心5 min，取上清液測As2O3濃度。根據(jù)測試結(jié)果計算出納米粒中的As2O3水平按公式：DL=Ws/Wp×100% 和 ER=Ws/Wt×100%計算。Ws為納米粒中所含As2O3質(zhì)量，Wp為所測納米微粒質(zhì)量，Wt為制備相應(yīng)量納米微粒所需As2O3質(zhì)量。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：砷標(biāo)準(zhǔn)儲備液，精密稱取一定量的As2O3標(biāo)準(zhǔn)品，于容量瓶中，用適量氫氧化鉀溶液溶解，用稀硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至微酸性，最后用水定容。使用時，用水稀釋成系列砷標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入硫脲-抗壞血酸混合液和鹽酸，用水定容至刻度并搖勻。放置10 min進(jìn)樣，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.6 體外釋放 用動態(tài)透析法進(jìn)行釋藥試驗，用原子熒光分光光度法測量釋藥量。精密稱取適量VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒裝入透析袋內(nèi)，加入一定體積的PBS(0.1 mol/L,pH 7.4)形成混懸液，扎緊后置于確定體積的PBS(0.1 mol/L,pH 7.4)，置于(37.0±1.0)℃，80 r/min恒速攪拌，于設(shè)定的時間點取樣，同時補加同體積的PBS(0.1 mol/L,pH 7.4)。測定不同時間點所取樣品中As2O3濃度，計算得出累積釋藥百分?jǐn)?shù)，并作出釋放曲線圖。

1.2.7 初步穩(wěn)定性試驗 VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA膠體溶液不穩(wěn)定，放置過程中粒子容易聚集，且包載的As2O3也可能從納米粒中泄漏。選取低溫4 ℃和室溫25 ℃的條件下放置的VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA膠體溶液，分別于1、2、3 d取樣，計算載藥量和滲漏率(LR)。LR=(W定期-W初始)/W總×100%。W定期為定期(不同時間點)測得游離藥物量，W初始為試驗初始游離藥物量，W總為藥物總量。

1.2.8 肝癌裸鼠模型的建立[8]人肝癌Bel 7402細(xì)胞株培養(yǎng)于含20%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞用于模型的建立。細(xì)胞密度為1×107/mL，于無菌操作臺中將0.1 mL細(xì)胞懸液注射于4～6周齡的三級BALB/c雄性裸鼠右側(cè)肩胛部，飼養(yǎng)2周，肝癌裸鼠模型即可建立成功。

1.2.9 肝癌裸鼠模型分組及處理[8]荷人肝癌裸鼠模型24只分成2組，每組12只，分別經(jīng)尾靜脈注射抗As2O3-PEG-PLA納米粒、VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒。其中每組各6只給藥后0.5 h處死，取血液、心、肝、腎、腫瘤等組織，用于As2O3濃度的測定。另外每組各6只給藥后，在第21天處死，取腫瘤組織，免疫組化測定VEGF的表達(dá)。

1.2.10 高效液相色譜法(HPLC)檢測As2O3在兩組肝癌裸鼠組織中的分布實驗 給藥0.5 h后，裸鼠股靜脈取2 mL血，分離獲得血漿；處死裸鼠，取腫瘤、心、肝、腎等組織各2.0 g，研磨成勻漿；標(biāo)本加內(nèi)標(biāo)液20 μL，后加甲醛∶氯仿(4∶1)混合液5 mL，進(jìn)行HPLC分析，通過已測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計算獲得As2O3濃度。色譜條件為流動相為甲醇-磷酸二氫銨-冰乙酸(70.0∶30.0∶0.5)，流速1.0 mL/min[9]。

1.2.11 免疫組化檢測VEGFR-2在腫瘤組織中的表達(dá) 取腫瘤組織，PBS沖洗干凈后在10%甲醛溶液中過夜固定，石蠟包埋，切片，用免疫組化SP法檢測VEGF的表達(dá)。操作過程：對切片加抗原修復(fù)液進(jìn)行修復(fù)，室溫冷卻30 min后PBS沖洗2次，室溫孵育10 min后滴加1%濃度的一抗，4 ℃孵育、PBS沖洗2次，每次5 min；滴加二抗，37 ℃孵育30 min后PBS沖洗2次，每次5 min，DAB顯色后，流水沖洗，并經(jīng)過復(fù)染，脫水，透明，最后樹膠封片，于鏡下觀察。陰性對照選擇PBS溶液。

1.2.12 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測VEGFR-2在腫瘤組織中的表達(dá) 取肝組織，按比例加入RIPA(10 μg/mL)裂解液和蛋白酶抑制劑，超聲破碎制成組織勻漿，將破碎后的組織勻漿放置于冰中30 min，使組織徹底裂解，每隔10 min置于渦旋儀中震蕩30 s，40 min后，4 ℃ 10 000 r/min離心10 min，小心吸取上清，即可獲得總蛋白。采用BCA試劑盒檢測蛋白濃度。煮沸變性10 min，蛋白樣品放置于-20 ℃冰箱中待測。各取20 μL蛋白樣品上樣，跑12% SDS凝膠電泳，后濕法轉(zhuǎn)膜。含5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，一抗溶液孵育，4 ℃過夜；二抗溶液中室溫孵育1～2 h。在凝膠成像系統(tǒng)中曝光。

2 結(jié) 果

2.1 粒徑分布及Zata電位VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒徑為(141.9±13.2)nm，呈正態(tài)分布，見圖1。Zata電位為(10.2±1.1)mV。

圖1 VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒徑分布圖

2.2TEM觀察 本實驗制備的VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒TEM下為圓形或橢圓形顆，大小均一，分散性好。見圖2。

圖2 VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒TEM圖

2.3DL和ER測定 以熒光強度F為縱坐標(biāo)，藥物濃度C為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程F=100.76C+8.477 6(R2=0.999 7)。經(jīng)計算，VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒的DL為(5.51±1.83)%，ER為(62.12±5.98)%。見圖3。

圖3 As2O3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.4 體外釋放試驗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒中As2O3釋放緩慢，而游離As2O3在8h內(nèi)已完全釋放。As2O3和VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒的藥物半數(shù)釋放時間t1/2分別為120min和10h。見圖4。

圖4 VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒和As2O3體外釋放曲線圖

2.5 穩(wěn)定性試驗 觀察3d內(nèi)低溫和室溫納米粒膠體溶液的外觀形態(tài)未發(fā)生改變，無沉淀可見。隨著時間推移，低溫和室溫條件下，VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒DL均呈降低趨勢，LR不斷上升，且室溫條件下LR顯著高于低溫條件下。見表1。

表1 VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒DL和LR變化(%)

*:P<0.05，與低溫條件下LR相比。

2.6As2O3在兩組裸鼠體內(nèi)的分布VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組肝癌裸鼠腫瘤、肝組織中的As2O3的濃度顯著高于As2O3-PEG-PLA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組肝癌裸鼠血液、心、腎中的As2O3濃度顯著低于As2O3-PEG-PLA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.7VEGFR-2在腫瘤組織中的表達(dá)VEGFR-2在VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組中的陽性表達(dá)及蛋白表達(dá)顯著低于As2O3-PEG-PLA組(P<0.05)。見圖5。

表2 As2O3在兩組裸鼠體內(nèi)的分布

*:P<0.05，與As2O3-PEG-PLA組比較。

A：VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組；B：As2O3-PEG-PLA組。

圖5VEGFG-2在腫瘤組織中的表達(dá)

3 討 論

原發(fā)性肝癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，因其具有侵襲性強、生長速度快、治療后易復(fù)發(fā)、易導(dǎo)致肝功能衰竭等特點，預(yù)后很差，其病死率在全球居第三位[10]。我國是肝癌的高發(fā)地區(qū)之一，每年有10多萬人死于肝癌，占全球肝癌死亡人數(shù)的50%以上，在我國惡性腫瘤中居第二位。我國應(yīng)用砷作為抗腫瘤藥物歷史悠久，上世紀(jì)末As2O3注射液正式通過臨床審批，現(xiàn)被臨床廣泛應(yīng)用且效果顯著。As2O3抗肝癌作用從體內(nèi)、外實驗到臨床應(yīng)用晚期肝癌治療的試驗均取得令人鼓舞的效果，從而奠定了As2O3肝癌治療的基礎(chǔ)。目前應(yīng)用臨床上的As2O3注射液，給藥后血藥濃度升高快，生物利用度低，毒副反應(yīng)多，嚴(yán)重者造成腎功能損害，患者生活質(zhì)量顯著降低，因此迫切需要一種不良反應(yīng)少、毒副作用低的新型As2O3用于臨床肝癌治療。

納米技術(shù)進(jìn)行納米載藥可增強靶向性，降低毒副反應(yīng)，從而顯著提高藥物療效。本實驗使用的主要輔料為PEG-PLA類高分子材料進(jìn)行As2O3納米制劑的制備，它具有良好的生物相容性，在藥物遞送方面具有獨特的優(yōu)勢。有文獻(xiàn)稱PEG-PLA作為藥物載體可承載一些水溶性差，半衰期短，毒副作用大的藥物，具有有效提高藥物的生物利用度，減少藥物對全身毒副作用的優(yōu)點[11]。本實驗制得的As2O3納米制劑VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA粒徑為(141.9±13.2)nm，呈正態(tài)分布，Zata電位為(10.2±1.1)mV，經(jīng)TEM觀察呈圓形或橢圓形顆，粒狀、大小較一致，分散性較好，表明該劑型殺傷腫瘤細(xì)胞的重要途徑之一是通過透過有缺陷的腫瘤毛細(xì)血管壁使抗腫瘤藥物高濃度的積聚在腫瘤部位實現(xiàn)的。結(jié)果發(fā)現(xiàn)VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒的DL為(5.51±1.83)%，ER為(62.12±5.98)%。張樂等[12]以乳酸羥基乙酸共聚物為載體制備得到As2O3納米粒，平均粒徑為 178.2nm，ER為53.19%，DL為0.64%，低于本實驗結(jié)果。藥物體外釋放結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒體外具有緩釋效果，藥物半數(shù)釋放時間明顯延長，提示As2O3-PEG-PLA納米?？裳娱L對腫瘤的作用時間，同時As2O3-PEG-PLA可以顯著提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)As2O3濃度而降低正常組織中藥物作用濃度，因此說As2O3-PEG-PLA納米粒改變As2O3水溶性的同時改善其藥代動力學(xué)。初步穩(wěn)定性研究表明，As2O3-PEG-PLA納米粒在低溫4 ℃條件下，3d內(nèi)LR小于10%，表明其具有可靠地穩(wěn)定性。

VEGFR-2受體主要分布于腫瘤血管內(nèi)皮表面及腫瘤細(xì)胞表面，介導(dǎo)VEGF在腫瘤新生血管的形成，對腫瘤血管的生成至關(guān)重要[13-14]。研究表明，VEGFR-2在肝癌組織中的陽性表達(dá)率高達(dá)60%～70%，而正常組織中VEGFR-2呈陰性或僅為低度表達(dá)[15-16]。本研究中，由于增加了實驗室自制的具有肝靶向作用的靶頭VEGFR-2，并把有靶頭和沒有靶頭的納米粒通過尾靜脈注射到肝癌裸鼠，通過檢測發(fā)現(xiàn)VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組中腫瘤、肝組織中的As2O3濃度高于As2O3-PEG-PLA組，血液、心、腎組織中的As2O3濃度低于As2O3-PEG-PLA組，充分說明制作的VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA靶向作用顯著。VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組腫瘤組織中VEGF的陽性表達(dá)低于As2O3-PEG-PLA組，說明自制的靶頭VEGFR-2，可能具有顯著的抗血管作用，從而可能達(dá)到肝癌細(xì)胞毒性治療與抗血管生成治療相結(jié)合的雙重效果。

綜上所述，本文以PEG-PLA為載體材料制備得到As2O3納米制劑，且偶聯(lián)具有肝靶向作用的VEGFR-2，最終得到粒徑分布均勻，DL和ER高，穩(wěn)定性良好的納米制劑，且初步證實在肝癌裸鼠體內(nèi)具有良好的靶向作用，并可能同時起到抗血管生成作用，為其肝癌機制研究和治療提供了理論基礎(chǔ)。

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Preparation and quality control of human anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA nanoparticle*

ZhongZhiwei,WangDong,YinXiangbao△,WuLinquan,HuangChangwen,HuangMingwen,ZhouFan

(DepartmentofHepatobiliarySurgery,theSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang,Jiangxi330006,China)

Objective To explore the preparation and quality control of As2O3nanoparticle.Methods PEG-PLA was used as the vector material to prepare As2O3nanoparticle with ultrasonic emulsification method,and the VEGFR-2 was coupled to obtain VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA nanoparticle.The particle size distribution,Zata potential,loading efficiency(LE),encapsulation efficiency(EE),drug release in vitro and stability was determined,and morphological characteristics was observed by transmission electron microscope(TEM).Tweety-four hepatocellular carcinoma nude mices were randomly divided into VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA nanoparticles group and As2O3-PEG-PLA nanoparticles group,by tail vein injection of nanoparticles.High performance liquid chromatography was used to determine content of As2O3.After 21 d,six nude mices in each group were killed,and the immunohistochemistry and western blot method was used to detect the expression of VEGFR-2.Results The particle size of VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA was determined to be (141.9±13.2)nm,Zata potential was (10.2±1.1)mV.It was found to spherical or oval shape,with uniform size and dispersibility under TEM.LE and EE was (5.51±1.83)% and (62.12±5.98)%,respectively.Drug release in vitro showed that VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA exhibited controlled release effect,with half of the release time as 10 h.Besides,VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA showed a good stability in 3 days.Compared with As2O3-PEG-PLA nanoparticles group,the concentration of As2O3in tumor and liver tissue was high,the concentration of As2O3in blood,heart,kidney tissue was low,the expression of VEGFR-2 in tumor tissue was low in VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA nanoparticles group(P<0.05).Conclusion The prepared As2O3nanoparticle using PEG-PLA as vector and VEGFR-2 as target showed uniform size,high EE and LE,good stability.And it preliminarily proved that VEGFR-2 could be targeted in nude mice.

arsenicals;polyethylene glycols;polylactide;endothelial growth factors

? 著·

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.36.001

國家自然科學(xué)基金資助項目(81060187);江西省自然科學(xué)基金資助項目(2008GQY0050);江西省教育廳科技技術(shù)研究項目(GJJ11309)。 作者簡介：鐘志惟(1994-)，碩士，主要從事抗肝癌藥物納米的制備及其應(yīng)用研究。△

鐘志惟，王 棟，殷香保△，鄔林泉，黃長文，黃明文，周 凡

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽外科，南昌 330006)

R256.4

A

1671-8348(2016)36-5041-04

2016-07-09

2016-09-20)