樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性分析

劉曉鳳， MmanywaMarim Said， 趙 慶， 羅先江， 廖軍藝，葛康杰， 石帥帥， 雀古拉·巴布提江， 艾連中， 夏永軍

上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院，上海食品微生物工程技術(shù)研究中心，上海 200093

樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性分析

劉曉鳳， MmanywaMarim Said， 趙 慶， 羅先江， 廖軍藝，葛康杰， 石帥帥， 雀古拉·巴布提江， 艾連中， 夏永軍*

上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院，上海食品微生物工程技術(shù)研究中心，上海 200093

本文對(duì)樟芝谷物固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性能及活性成分進(jìn)行了研究。在所選谷物中，樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的乙醇提取物總抗氧化性最好，較未發(fā)酵青稞提高了4.02倍。通過無水乙醇50 ℃水浴振蕩提取80 min，其總抗氧化性達(dá)到了769.60 U/g。對(duì)其抗氧化性能分析發(fā)現(xiàn)，樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵乙醇提取物為6 mg/L時(shí)，對(duì)DPPH自由基、羥基自由基以及超氧陰離子的去除率分別為91.9%、51.2%、61.3%，對(duì)鐵離子的螯合能力為79.5%。相對(duì)于未發(fā)酵谷物，大米、小米、玉米以及青稞的樟芝發(fā)酵產(chǎn)物中總酚含量均有顯著的提升，其中青稞乙醇提取和水提取物中總酚含量分別提高了2.36倍和4.23倍。通過HPLC分析可知，樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物含有豐富的活性化合物，包括馬來酸衍生物(Antrodin)以及泛醌類衍生物(Antroquinonol)，且各組分含量較為均衡；而樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體乙醇提取物中主要活性成分為馬來酸衍生物，不含有泛醌類化合物。

樟芝； 固態(tài)發(fā)酵； 抗氧化； 總酚； 青稞

樟芝(Antrodiacamphorata)，又稱為牛樟芝、紅樟菇等，原產(chǎn)于臺(tái)灣地區(qū)的珍稀藥用真菌，早期臺(tái)灣原住民多用來治療飲酒所致的肝臟疾病以及食物中毒、過敏、腸胃不適等問題[1]。研究表明，樟芝可以作為潛在新藥的研發(fā)來源，含有多種生理活性成分，如活性多糖、三萜類化合物、固醇類化合物、苯環(huán)類化合物、多酚類化合物等，無論是樟芝子實(shí)體還是菌絲體產(chǎn)物，都具有非常好的保肝、抗癌等生理活性，許多學(xué)者的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)[2-6]。

機(jī)體過度氧化是許多健康問題的主要引發(fā)原因，適當(dāng)?shù)囊种企w內(nèi)自由基的形成可以有效地緩解多種疾病。樟芝的抗氧化活性備受關(guān)注，許多學(xué)者對(duì)其液態(tài)發(fā)酵菌體和發(fā)酵液的抗氧化性能進(jìn)行了研究。Song[7]等人研究顯示，樟芝液態(tài)發(fā)酵發(fā)酵液過濾組分能強(qiáng)烈地抑制脂質(zhì)體過氧化，但是有機(jī)溶劑萃取組分抗氧化能力較弱。Hseu[8]等人研究發(fā)現(xiàn)樟芝菌體水提物可以有效地抑制由AAPH引發(fā)的紅細(xì)胞氧化性溶血和脂質(zhì)體/蛋白的過氧化，并且可以阻止紅細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽和ATP的損耗。

雖然樟芝菌絲體發(fā)酵產(chǎn)物中不含有麥角甾烷類三萜化合物，但是培養(yǎng)方式的改變同時(shí)也帶來不同的合成代謝途徑，使得樟芝發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)生新的活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)同樣具有良好的生理活性。目前關(guān)于樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化研究較少，本文對(duì)比了樟芝不同谷物固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的總抗氧化性能及總酚含量，分析了不同提取條件對(duì)總抗氧化性的影響，并對(duì)其自由基清除能力進(jìn)行了研究，為開拓樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的活性功能以及保健產(chǎn)品開發(fā)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 菌株

樟芝S-29來源于實(shí)驗(yàn)室，保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號(hào)為CGMCC 9590。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

樟芝A.camphorataS-29菌株接種于PDA斜面，28 ℃避光培養(yǎng)9 d，于4 ℃保藏。

孢子懸浮液制備:取茄型瓶斜面，利用含有Tween 80(0.1% v/v)的無菌水25 mL洗下孢子，鏡檢孢子數(shù)達(dá)到1×108個(gè)/mL。

種子培養(yǎng)基:葡萄糖20 g/L，大豆蛋白胨4 g/L，檸檬酸0.5 g/L，MgSO40.5 g/L，KH2PO40.5 g/L，pH 5.0。28 ℃，110 r/min培養(yǎng)4 d。

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基(1 L錐形瓶):谷物原料100 g，大豆蛋白胨0.4 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，初始含水量70%(m/v)，初始pH 5.0。固態(tài)發(fā)酵接種量為30%(v/m)，28 ℃培養(yǎng)20 d。實(shí)驗(yàn)選取大米、小米、玉米、青稞、黑米等谷物進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。

液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖40 g/L，大豆蛋白胨6 g/L，MgSO40.5 g/L，KH2PO40.5 g/L，pH 5.0。28 ℃，110 r/min培養(yǎng)8 d。

所有培養(yǎng)基均在115 ℃滅菌20 min。

1.3 樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性能分析

1.3.1 樟芝谷物發(fā)酵產(chǎn)物總酚含量的比較

將樟芝不同谷物發(fā)酵物粉碎，利用100目篩網(wǎng)過篩，得到發(fā)酵粉末。選用乙醇和水作為提取溶劑，分別稱取1 g發(fā)酵谷物粉末，放入20 mL提取溶劑中，40 ℃振蕩浸提1 h，測(cè)定提取液總酚含量，并以未發(fā)酵谷物提取物作為對(duì)照。

1.3.2 樟芝不同谷物發(fā)酵物抗氧化性比較

將樟芝不同谷物發(fā)酵物粉碎，利用100目篩網(wǎng)過篩，得到發(fā)酵粉末。選用乙醇和水作為提取溶劑，分別稱取1 g發(fā)酵谷物粉末，放入20 mL提取溶劑中，40 ℃振蕩浸提1 h，測(cè)定提取液總抗氧化性，并以未發(fā)酵谷物提取物作為對(duì)照。

1.3.3 不同提取溶劑萃取青稞發(fā)酵產(chǎn)物

將樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行粉碎，利用100目篩網(wǎng)過篩，得到發(fā)酵粉末。實(shí)驗(yàn)選取正己烷、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、乙醇作為提取溶劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。稱取1 g發(fā)酵粉末，分別放入20 mL提取溶劑中，室溫振蕩浸提1 h，測(cè)定總抗氧化性，并以未發(fā)酵谷物提取物作為對(duì)照。1.3.4 乙醇濃度對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響

將樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行粉碎，利用100目篩網(wǎng)過篩，得到發(fā)酵粉末。實(shí)驗(yàn)選取乙醇濃度分別為60%、70%、80%、90%、100%，稱取1 g發(fā)酵粉末，分別放入20 mL提取溶劑中，室溫振蕩浸提1 h，測(cè)定總抗氧化性。

1.3.5 乙醇萃取溫度對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響

將樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行粉碎，利用100目篩網(wǎng)過篩，得到發(fā)酵粉末。選取無水乙醇作為提取溶劑，稱取1 g谷物粉末，放入20 mL乙醇中，設(shè)定提取溫度為20 ℃～60 ℃，振蕩浸提1 h，測(cè)定總抗氧化性。

1.3.6 乙醇萃取時(shí)間對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響

將樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行粉碎，利用100目篩網(wǎng)過篩，得到發(fā)酵粉末。選取無水乙醇作為提取溶劑，稱取1 g谷物粉末，放入20 mL乙醇中，設(shè)定提取時(shí)間為60 min～120 min，測(cè)定總抗氧化性。

1.4 分析方法

1.4.1 總抗氧化性分析

樟芝發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性(T-AOC)分析采用南京建成生物科技有限公司試劑盒。

1.4.2 總酚含量的測(cè)定

樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物總酚含量采用福林-酚法測(cè)定[9]。

1.4.3 樟芝固態(tài)發(fā)酵乙醇萃取物的制備

將10 g樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物放置于容器中，按固液比1∶20加入無水乙醇，50 ℃水浴振蕩提取80 min，抽濾得到乙醇提取液。重復(fù)提取兩次，合并提取液，旋蒸濃縮至干，放置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.4 樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體乙醇萃取物的制備

將10 g干燥后的樟芝液態(tài)發(fā)酵菌體粉碎后放置于容器中，按固液比1∶20加入無水乙醇，50 ℃水浴振蕩提取80 min，抽濾得到乙醇提取液。重復(fù)提取兩次，合并提取液，旋蒸濃縮至干，放置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.5 DPPH清除率[10]

分別取樟芝谷物發(fā)酵產(chǎn)物乙醇萃取物2 mg/mL和6 mg/mL各2 mL，加入1 mL DPPH溶液(0.2 mmol/L，以無水乙醇溶液溶解)，混合均勻，然后在室溫下遮光反應(yīng)30 min后，然后在轉(zhuǎn)速6 000 r/min下離心10 min，取上層清液，最后在波長(zhǎng)為517 nm處測(cè)定樣品的吸光度?？瞻捉M樣品以等體積的無水乙醇溶液代替0.2 mmol/L DPPH的無水乙醇溶液，對(duì)照組樣品以等體積相應(yīng)溶劑代替谷物萃取液，并做3次平行。

1.4.6 清除HO-羥基能力[11]

在10 mL具塞試管中依次加入1 mL硫酸亞鐵溶液(5 mmol/L)，1 mL水楊酸-乙醇溶液(5 mmol/L)，1 mL過氧化氫溶液(3 mmol/L)混合均勻，然后自上述體系中加入樟芝谷物發(fā)酵產(chǎn)物乙醇萃取物2 mg/mL、6 mg/mL各2 mL，用雙蒸水補(bǔ)齊至刻度，在37 ℃的恒溫水浴中反應(yīng)15 min，然后再轉(zhuǎn)速6 000 r/min離心10 min，以雙蒸水做參比，在波長(zhǎng)510 nm下測(cè)定吸光度，吸光值數(shù)據(jù)平行測(cè)定3次。

1.4.7 超氧陰離子自由基清除率[12]

取0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH8.2)4.5 mL，置于25 ℃水浴中預(yù)熱20 min，分別加入樟芝谷物發(fā)酵產(chǎn)物乙醇萃取物2 mg/mL、6 mg/mL 各2 mL和0.1 mL 25 mmol/L鄰苯三酚溶液(以10 mmol/L鹽酸配制，調(diào)零管取用10 mmol/L鹽酸代替鄰苯三酚的鹽酸溶液)，混勻后于25 ℃水浴中反應(yīng)5 min，加入1 mL 8 mol/L鹽酸終止反應(yīng)，325 nm處測(cè)定吸光度?？瞻讓?duì)照組以雙蒸水代替樣品液。

1.4.8 亞鐵離子螯合能力[13]

分別樟芝谷物發(fā)酵產(chǎn)物乙醇萃取物2 mg/mL和6 mg/mL各2 mL與0.1 mL抗壞血酸溶液(10 g/L)，0.1 mL硫酸亞鐵溶液(4 g/L)和1 mL氫氧化鈉溶液(0.2 mol/L)混合，在37 ℃水浴中孵育20 min然后加入0.2 mL三氯乙酸(10%)，經(jīng)離心10 min得上層清液，加入0.5 mL鄰菲羅啉(1 g/L)溶液，反應(yīng)10 min后，在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。(以雙蒸水作為空白對(duì)照)調(diào)零用雙蒸水調(diào)零。

1.4.9 HPLC分析方法

樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物HPLC分析條件如下：色譜柱，Sepax HP C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流動(dòng)相A：水/TFA=100/0.5，流動(dòng)相B：乙腈；洗脫梯度如下：0 min～4 min，流動(dòng)相B 35%～57%；4 min～10 min，流動(dòng)相B 57%～70%；10 min～15 min，流動(dòng)相B 70%～90%；15 min～18 min，流動(dòng)相B 90%～100%；18 min～28 min，流動(dòng)相B 100%～35%。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(Mean+SD)表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物總酚含量分析

天然多酚化合物由于含有多羥基基團(tuán)，具有良好的抗氧化活性。如圖1所示，樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中含有豐富的多酚類化合物。經(jīng)過樟芝發(fā)酵，大米、小米、玉米以及青稞的乙醇提取液總酚含量均有顯著的提升，其中青稞發(fā)酵產(chǎn)物總酚含量最高，達(dá)到了5.82 mg/g，較未發(fā)酵青稞提高了2.36倍。在水提物中，樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的總酚含量依次為小米>青稞>玉米>大米，其中小米與青稞的總酚含量分別為8.61 mg/g、8.26 mg/g。然而，在大米、小米與玉米的未發(fā)酵谷物幾乎沒有檢測(cè)到多酚類化合物。有趣的是，經(jīng)過樟芝發(fā)酵，無論是乙醇提取液還是水提液中，黑米中的總酚含量有明顯的下降，為所選谷物中總酚含量最低的樣品，其中乙醇提取總酚含量為1.96 mg/g，較未發(fā)酵黑米降低了43%。這可能是樟芝發(fā)酵過程中會(huì)對(duì)黑米中的花青素進(jìn)行利用降解，從而導(dǎo)致總酚含量有所降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知樟芝發(fā)酵谷物可以顯著提高谷物中總酚類化合物的含量。

A：乙醇提取；B：水提取圖1 樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物總酚含量分析

2.2 樟芝不同谷物發(fā)酵抗氧化性能分析

樟芝在實(shí)驗(yàn)所選谷物上均生長(zhǎng)良好，其中青稞、大米生長(zhǎng)較快，小米生長(zhǎng)較慢。如圖2所示，樟芝不同谷物發(fā)酵抗氧化性有較大差異。在所選谷物中青稞發(fā)酵產(chǎn)物乙醇提取物總抗氧化活性最高，達(dá)到了772.07 U/g，比Vc參照組總抗氧化值高出了56.50%，相當(dāng)于1.69 mmol/L的Vc；黑米發(fā)酵產(chǎn)物其次，為762.20 U/g；大米和小米發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性較低，均在300 U/g以下(圖2B)。如圖1A所示，熱水提取的樟芝谷物固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性較乙醇提取物低，其中最高的為青稞發(fā)酵產(chǎn)物，僅有426.11 U/g；但是與其他谷物不同的是，小米發(fā)酵的水提物總抗氧化性高于乙醇提取物，兩者相差達(dá)到1.78倍。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取青稞作為固態(tài)發(fā)酵原料。

A：水提取；B：乙醇提取圖2 樟芝不同谷物固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性分析

2.3 不同有機(jī)溶劑萃取抗氧化性能分析

不同溶劑的極性不同，因此所提取的化合物種類有一定差異，本實(shí)驗(yàn)選取了不同的有機(jī)溶劑對(duì)樟芝青稞發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性能進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。結(jié)果顯示乙醇提取液的總抗氧性最好，達(dá)到了757.27 U/g，丙酮提取液總抗氧化性其次，僅有357.67 U/g。乙醇作為提取劑，能夠誘導(dǎo)非極性化合物產(chǎn)生一定的偶極矩，令其產(chǎn)生一定的極性，從而增加溶解度，同時(shí)對(duì)青稞發(fā)酵產(chǎn)物的穿透力強(qiáng)，成分提取比較全面且使用安全，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選用乙醇作為提取溶劑。

圖3 不同提取溶劑對(duì)樟芝青稞發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性的影響

2.4 乙醇濃度對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響

不同濃度乙醇溶液提取樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵物的抗氧化活性結(jié)果如圖4所示。當(dāng)乙醇濃度較低時(shí)(60%～80%)，乙醇提取液的總抗氧化性變化幅度較小，且處于較低水平；當(dāng)乙醇濃度進(jìn)一步提高(80%～100%)，乙醇提取液的總抗氧化性迅速增加，在100%乙醇提取時(shí)達(dá)到最高。

圖4 乙醇濃度對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響

2.5 提取溫度及提取時(shí)間對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響

圖5顯示了提取溫度和時(shí)間對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性影響。提取溫度及時(shí)間會(huì)影響活性成分在提取溶劑中的擴(kuò)散作用以及穩(wěn)定性。如圖5A所示，溫度對(duì)乙醇提取液總抗氧化性有顯著影響。在40 ℃～60 ℃之間，總抗氧化性沒有顯著差異，其中50 ℃時(shí)總抗氧化值達(dá)到730.17 U/g，說明在實(shí)驗(yàn)選擇溫度范圍內(nèi)，乙醇提取物的溫度穩(wěn)定性較好；當(dāng)提取溫度為20 ℃時(shí)，提取液的總抗氧化性迅速下降，僅有140.16 U/g，降低了80.74%。如圖5B所示，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，樟芝青稞發(fā)酵產(chǎn)物乙醇提取液的總抗氧化性逐漸提高，當(dāng)提取時(shí)間為80 min時(shí)達(dá)到最大，高達(dá)769.60 U/g，隨著溫度繼續(xù)上升，總抗氧化性稍有下降。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇提取溫度為50 ℃、提取時(shí)間為80 min。

A：提取溫度；B：提取時(shí)間圖5 提取溫度及提取時(shí)間對(duì)樟芝青稞發(fā)酵產(chǎn)物總抗氧化性的影響

2.6 樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性能評(píng)價(jià)

自由基等會(huì)造成機(jī)體組織過氧化、核酸與蛋白質(zhì)解聚斷裂，對(duì)機(jī)體健康有著極大的損害。對(duì)自由基的清除效果是反應(yīng)抗氧化能力的重要指標(biāo)。如圖6A所示，樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物具有較好的清除自由基能力。當(dāng)濃度為乙醇提取物濃度為6 mg/L時(shí)，DPPH自由基清除效率達(dá)到了91.9%，通過標(biāo)曲換算相當(dāng)于4.48 mmol/L的Vc；羥基自由基和超氧陰離子的清除率也分別達(dá)到了51.2%和63.3%。對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物鐵離子螯合能力研究發(fā)現(xiàn)，隨著乙醇提取物濃度提高，螯合能力逐漸提高，當(dāng)6 mg/L時(shí)達(dá)到了79.5%。樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體乙醇提取物也具有較好的抗氧化性，但自由基清除能力較固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物低(圖6B)。

A：固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物；B液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物圖6 樟芝菌絲體發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性能對(duì)比

2.7 樟芝發(fā)酵產(chǎn)物HPLC分析

樟芝主要有三種人工培養(yǎng)方式：牛樟樹椴木栽培法、固態(tài)發(fā)酵法、深層液態(tài)發(fā)酵法，第一種得到的是子實(shí)體，后兩種得到的是菌絲體或其混合物。目前，樟芝菌絲體培養(yǎng)是有效的大規(guī)模人工培養(yǎng)方式。如圖7所示，樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵乙醇提取物中含有豐富的活性化合物，包括馬來酸衍生物(Antrodin A、C)以及泛醌類衍生物(Antroquinonol、Antroquinonol B)，而樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體乙醇提取物中主要活性成分為馬來酸衍生物(Antrodin A、C)，不含有泛醌類化合物[14]。

3 結(jié)論

本文對(duì)樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物相關(guān)成分進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)比評(píng)價(jià)其抗氧化性能。結(jié)果顯示，通過樟芝固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)物中的總酚含量以及清除自由基等抗氧化性能均有顯著的提高。在實(shí)驗(yàn)所選谷物中，樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性能最好，其乙醇提取和水提取物中總酚含量較未發(fā)酵谷物分別提高了2.36倍和4.23倍，總抗氧化能力分別提高了2.19倍和4.02倍。樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的自由基清除能力以及鐵離子螯合能力均好于液態(tài)發(fā)酵菌體提取物，而且從活性成分分析可知，樟芝青稞固態(tài)發(fā)酵乙醇提取物中含有豐富的活性化合物，且各組分含量較為均衡；而樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體乙醇提取物中活性成分較為單一。由此可知，樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物在抗氧化方面具有較好的潛力，需要進(jìn)一步對(duì)其抗氧化活性成分進(jìn)行鑒定，并且研究其對(duì)細(xì)胞組織氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用。

A：液態(tài)發(fā)酵；B：固態(tài)發(fā)酵1：Antroquinonol B; 2：Antrodin C; 3：Antrodin A; 4：Antroquinonol圖7 樟芝發(fā)酵產(chǎn)品HPLC分析圖

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Antioxidant of Antrodia camphorata by solid state fermentation

LIU Xiao-feng, MmanywaMarim Said, ZHAO Qing, LUO Xian-jiang, LIAO Jun-yi, GE Kang-jie, SHI Shuai-shuai, Xugla Bamutjan, AI Lian-zhong, XIA Yong-jun

School of Medical Instrument and Food Engineering, University of Shanghai for Science and Technology, Shanghai Engineering Research Center of Food Microbiology, Shanghai, 200093

The antioxidant and bioactive compounds ofAntrodiacamphorataby solid state fermentation (SSF) were investigated. Results showed that the ethanol extract of fermented highland barley had the highest antioxidant activity with 4.02 times than that of the unfermented highland barley. The antioxidant activity could reach up to 769.60 U/g under the extracting conditions: ethanol 100%, temperature 50℃, extracting time 80 min. When concentration of ethanol extract was 6 mg/g, free radical scavenging activity for DPPH radical, hydroxyl free radicals, superoxide anion were 91.9%, 51.2%, 61.3% respectively; and the chelating effects of ethanol extract on ferrous ions was 79.5%. The total phenolic contents of fermented grains, such as rice, millet, corn and highland barley were increased significantly than those of unfermented grains. There were 2.36, 4.23 times increasing for the fermented highland barley extracted by ethanol and water, respectively. In SSF,Antrodiacamphoratacould synthesize more bioactive compounds than in liquid state fermentation (LSF), including antrodin and antroquinonol. However, there was no antroquinonol produced in LSF.

Antrodiacamphorata; solid state fermentation; antioxidant activity; total phenolic; highland barley

10.3969/j.issn.1001-6678.2016.06.006

上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(15ZR1428900)；上海市大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201510252146)；滬江基金研究基地專項(xiàng)(D15012)。

劉曉鳳(1991～)，女，碩士，食品微生物資源開發(fā)及利用。E-mail：18354286623@163.com。

*通信作者：夏永軍(1981～)，男，講師，博士，食品生物技術(shù)。E-mail：dreamup@126.com。