甲狀腺乳頭狀癌中CA19-9、CA15-3和CA125的表達及意義

侯衛(wèi)東，王俊宏△，張志宇，李進，劉艷曉，丁紅霞，禹遠遠，田勇，劉艷峰

甲狀腺乳頭狀癌中CA19-9、CA15-3和CA125的表達及意義

侯衛(wèi)東1，王俊宏1△，張志宇1，李進1，劉艷曉1，丁紅霞1，禹遠遠1，田勇1，劉艷峰2

目的 探討糖類抗原19-9（CA19-9）、糖類抗原15-3（CA15-3）和糖類抗原125（CA125）在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）中的表達及臨床意義。方法采用免疫組化MaxVision兩步法檢測80例PTC和80例甲狀腺良性病變（BTL，包括34例結節(jié)性甲狀腺腫、26例橋本甲狀腺炎和20例濾泡性腺瘤）患者中CA19-9、CA15-3和CA125的表達狀況，分析其表達與PTC患者臨床病理特征的關系。結果80例PTC中CA19-9、CA15-3、CA125陽性表達率分別為85.0%、100.0%、43.8%，與BTL相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。CA19-9、CA15-3、CA125的表達與患者年齡、性別、瘤結節(jié)數(shù)目、直徑、淋巴結轉移及TNM分期無關（P＞0.05）。CA19-9、CA15-3、CA125診斷PTC的靈敏度分別為85.0%、100.0%、43.8%，特異度分別為91.3%、36.3%、91.3%。結論CA19-9、CA153、CA125的表達有助于PTC和BTL的鑒別診斷。

甲狀腺腫瘤；癌，乳頭狀；免疫組織化學；診斷，鑒別；敏感性與特異性；CA-19-9抗原；CA-15-3抗原；CA-125抗原

上世紀80年代，人們利用雜交瘤技術及單克隆抗體識別系統(tǒng)獲得了能識別腫瘤特異性的大分子的糖類抗原（carbohydrate antigen,CA）。CA是腫瘤細胞的相關抗原，常用的CA系列有：CA19-9（胰腺、腸癌相關抗原）、CA15-3（乳腺癌相關抗原）、CA125（卵巢癌相關抗原），這些腫瘤特異性大分子在腫瘤組織中的含量高于正常組織，與腫瘤的組織發(fā)生、細胞分化、細胞功能有關。檢測這些指標有助于腫瘤的診斷分類、預后判斷以及療效監(jiān)測。臨床病理檢查主要用于確定轉移癌原發(fā)部位。隨著免疫組織化學技術在病理診斷中的廣泛應用，研究人員發(fā)現(xiàn)一些蛋白標志物特異度較低，給臨床病理診斷帶來很多困惑。國外有文獻報道CA19-9在甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）中的表達率達50%～70%［1-2］；近40%的PTC可表達CA125［3］。國內尚鮮見CA19-9、CA15-3、CA125在PTC中表達情況的報道。最常見的甲狀腺良性病變（benign thyroid lesions，BTL）包括結節(jié)性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎，其組織形態(tài)有時亦可呈乳頭狀或假乳頭狀增生，以致與PTC不易鑒別。鑒于此，本研究對常用腫瘤標志物CA19-9、CA15-3和CA125在PTC和BTL的表達情況進行分析，探討該3種抗原的表達在PTC和BTL診斷及鑒別診斷中的應用價值和局限性。

1 對象與方法

1.1 研究對象收集2013年1月—2015年12月中國人民解放軍第152醫(yī)院病理科甲狀腺手術存檔標本160例，其中PTC 80例，男32例，女48例，年齡22～71歲，平均（45.42± 11.15）歲，年齡≤45歲者53例，＞45歲者27例。PTC單個瘤結節(jié)52例，多個瘤結節(jié)28例；腫瘤最大直徑≤1 cm者54例，＞1 cm者26例。伴有中央?yún)^(qū)和（或）頸部淋巴結轉移24例，其余56例未見淋巴結轉移；術后病理分期為Ⅰ期34例、Ⅱ期24例、Ⅲ期18例、Ⅳ期4例（腫瘤分期參照UICC/AJCC第七版TNM分期）。另80例BTL患者中，結節(jié)性甲狀腺腫34例、橋本甲狀腺炎26例，濾泡性腺瘤20例，其中男25例，女55例，年齡20～72歲，平均（43.93±11.65）歲。

1.2 免疫組織化學法檢測CA19-9、CA15-3和CA125表達所有標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片，免疫組化采用MaxVision兩步法，所用抗體為CA19-9（TA888）、CA15-3（DF3）、CA125（TA347），均為即用型試劑，操作步驟按說明書進行（主要設備為德國Leica235切片機、德國Leica Bond-max全自動免疫組化染色機，所用試劑均購自福州邁新公司）。使用陽性對照片做陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照，對照片與研究標本在同一條件下進行染色。

1.3 結果判定CA19-9、CA15-3和CA125表達于細胞質和（或）胞膜。染色陽性為陽性部位呈淺黃色至棕褐色。綜合判斷高倍鏡下陽性細胞百分率評分和染色強度評分。按染色強度評分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽性細胞百分率評分：每例隨機取5個高倍鏡視野，計算陽性細胞的平均百分比，≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度得分和陽性細胞百分率得分相加，0～1分為陰性（－），2～3分為弱陽性（+），4～5分為中等陽性（++），6～7分為強陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計學方法應用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。分類數(shù)據(jù)采用率或百分數(shù)表示，并采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗進行比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。按照臨床流行病學診斷試驗研究評價計算方法，計算不同免疫標志物單獨診斷的靈敏度和特異度。

2 結果

2.1 CA19-9、CA15-3和CA125的表達80例PTC中CA19-9陽性率為85.0%，陽性定位于胞質及胞膜，胞質普遍著色較弱，細胞頂端的胞膜或腔緣著色顯著增強，多為中等至強陽性（圖1A）；在BTL中陽性率為8.8%，均為灶狀弱陽性；CA19-9在PTC與BTL中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。CA15-3在PTC中陽性率100.0%，陽性定位于胞質，細胞頂端胞質或腔緣染色增強，多為彌漫性中等至強陽性（圖1B）；在BTL中的陽性率為63.8%，以弱至中等陽性為主；CA15-3在PTC與BTL中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。CA125在PTC中陽性率為43.8%，陽性定位于細胞頂端胞膜或腔緣，著色呈線條狀，多為片狀中等陽性（圖1C）；在BTL中陽性率為8.8%，多為胞質弱陽性；CA125在PTC與BTL中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。以上結果及BTL分型見表1。

Tab.1 Expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 in PTC and BTL表1 CA19-9、CA15-3和CA125在PTC及BTL中的表達

2.2 CA19-9、CA15-3和CA125的表達與臨床病理參數(shù)的關系CA19-9和CA125的陽性率在不同年齡、性別、腫瘤直徑、瘤結節(jié)數(shù)目、淋巴結轉移及TNM分期組間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。CA15-3在不同臨床病理參數(shù)組間全部表達陽性（均為100%）。

Tab.2 Relationship between the expressions of CA19-9, CA15-3 and CA125 and the clinical pathological parameters of PTC表2 CA19-9、CA15-3和CA125的表達與PTC臨床病理參數(shù)的關系例（%）

2.3 CA19-9、CA15-3和CA125對PTC的診斷價值CA19-9、CA15-3和CA125在PTC中表達的靈敏度分別為85.0%（68/80）、100.0%（80/80）、43.8%（35/80），特異度分別為91.3%（73/80）、36.3%（29/ 80）、91.3%（73/80）。

3 討論

3.1 PTC中CA19-9表達的臨床意義CA19-9是Koprowski等［4］于1979年用人的結腸癌培養(yǎng)株（SW1116）為免疫原制備的單克隆抗體（NS19-9）所識別的一種抗原，類似單唾液酸Lewis血型抗原物質。CA19-9為細胞膜上的糖類蛋白，分子質量大于1 000 ku，是許多細胞的組成成分，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮、胃腸等處，在血清中以唾液黏蛋白形式存在，是存在于血液循環(huán)的消化道腫瘤相關抗原［5-6］。通常情況下CA19-9的合成量是極微量的，但在上述組織出現(xiàn)異常，尤其是惡性腫瘤時，其合成量通常明顯增加，造成血清中的CA19-9顯著增加。當手術徹底切除腫瘤后，其在血清中的含量亦會大幅下降，如再上升，則預示腫瘤復發(fā)。因此其臨床血檢CA19-9的意義在于輔助診斷、預后判斷以及療效監(jiān)測［5-6］。CA19-9在惡性腫瘤中表達廣泛，對消化道腫瘤的診斷具有較高價值，主要包括胰腺癌、膽管癌、胃癌和結直腸癌，其中以胰腺癌陽性率最高；此外在其他如乳腺癌、子宮內膜癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌等亦可表達［5,7］。臨床病理檢查中主要用于確定轉移癌原發(fā)灶部位，染色陽性常常被認為來源于胰腺或消化道。上世紀90年代初國外有文獻報道CA19-9在PTC中的表達率為50%～70.0%，而在BTL尤其是濾泡性腺瘤中的表達從0～50%不等［1-2］。國內尚鮮見CA19-9在PTC中研究的文獻報道。本研究顯示CA19-9在PTC中表達率為85.0%，多為中等以上強度著色；且CA19-9用于PTC與BTL鑒別診斷時具有較高靈敏度和特異度；而在BTL中陽性表達較弱或完全陰性，故其中等以上強度陽性表達對PTC有很好的提示意義。分析與文獻報道表達不一致的原因可能與早期文獻觀察例數(shù)較少以及當時免疫組化技術檢測靈敏度及特異度較低有關。PTC形態(tài)學診斷主要依據(jù)典型的細胞核特征及復雜的乳頭狀結構，而有時一些BTL亦可呈乳頭狀或假乳頭狀增生，當遇到細胞核的特征不典型時，鑒別診斷常會存在一定困難，此時應用CA19-9對PTC的確診具有重要參考意義。檢測血CA19-9是評價PTC術后復發(fā)、轉移或去分化的有效指標［8］，但本組資料未檢測到CA19-9與臨床特征及預后有關。

3.2 PTC中CA15-3表達的臨床意義CA15-3是細胞表面的一種糖類抗原，1984年Hilkens等［9］從人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM-6制成小鼠單克隆抗體（115-DB）；Kufe等［10］從肝轉移乳腺癌細胞膜制成單克隆抗體（DF-3），這些抗體均可識別出CA15-3，其對人類乳腺脂肪球膜抗原及乳腺癌細胞膜均具有特異性。CA15-3是黏糖蛋白1（mucin-1，MUC1）基因編碼的一種高糖基化、高分子量的跨膜糖蛋白，當細胞癌變時，細胞內糖基轉化酶被激活，其表面CA15-3表達增加。目前，以MUC1為靶點的免疫治療正成為癌癥治療新的研究方向，作為MUC1癌基因產物的可溶性成分，CA15-3水平升高可能是MUC1的代表性標志物［11］。此外，CA15-3還可表達于甲狀腺癌、肺癌、卵巢癌及胰腺癌等［12］。本研究顯示CA15-3（DF-3）在PTC中的表達明顯高于BTL，靈敏度高達100.0%，多為彌漫性中等以上強度表達，細胞頂端胞質或腔緣著色較強。其在BTL的表達率為63.8%，多為低至中等強度表達，但需注意的是BTL濾泡內的膠質著色亦較強，乍看甚至遮掩陰性的濾泡細胞。低特異度限制了CA15-3在PTC診斷中的應用，其單獨陽性不能確診PTC，但中等以上強度的陽性表達對PTC有較好的警示作用；而高靈敏度則使CA15-3在PTC鑒別診斷中有其獨特價值，即CA15-3陰性表達可以作為一項PTC的排除指標［1］。

3.3 PTC中CA125表達的臨床意義1981年美國科學家Bast等［13］以卵巢上皮癌細胞株（ovarian carcinoma antigen，OVCA433）為抗原制備了單克隆抗體OC125，OC125所識別的抗原稱為CA125，是上皮性卵巢癌尤其是漿液性腺癌的主要標志物。此后陸續(xù)發(fā)現(xiàn)其可表達于胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、子宮內膜癌、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、食管癌等［14］。另據(jù)報道近40%的PTC可表達CA125［1,3］，本研究顯示CA125在PTC中的陽性率為43.8%，與文獻報道相近。陽性特征是細胞頂端的胞膜或腔緣呈線條狀著色，多為中等強度表達，而在BTL中的陽性率僅為8.8%，多為灶狀弱表達，有時BTL濾泡內膠質亦可著色；本研究證實CA125在PTC與BTL中的表達率差異有統(tǒng)計學意義。由于其在PTC中的特異度高達91.3%，故CA125中等以上強度陽性表達對鑒別PTC具有較高的參考價值。

綜上所述，當遇見不典型病例或鑒別診斷有困難時，聯(lián)合檢測CA19-9、CA153和CA125對PTC的確診具有重要參考價值，有助提高正確診斷率。值得注意的是三者均不宜單獨用于PTC的鑒別診斷，尤其是在判斷頸部淋巴結轉移性腫瘤的原發(fā)部位時，要考慮到PTC的可能性，以免誤診為胰腺癌、乳腺癌或卵巢癌等轉移。

（圖1見插頁）

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（2016-06-14收稿 2016-09-26修回）

（本文編輯 李鵬）

Expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 and their significance in papillary thyroid carcinoma

HOU Weidong1,WANG Junhong1△,ZHANG Zhiyu1,LI Jin1,LIU Yanxiao1,DING Hongxia1,YU Yuanyuan1,TIAN Yong1, LIU Yanfeng2
1 Division of Endocrinology,Pingdingshan Municipal First People’s Hospital,Pingdingshan 467000,China; 2 Department of Pathology,People’s Liberation Army 152 Hospital△

ObjectiveTo investigate the expressions of carbohydrate antigen 19-9(CA19-9),carbohydrate antigen 15-3(CA15-3)and carbohydrate antigen 125(CA125)and their clinical significance in papillary thyroid carcinoma(PTC).MethodsThe expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 were detected by immunohistochemical MaxVision method in 80 cases of PTC and 80 cases of benign thyroid lesions(BTL),including 34 cases of nodular goiter,26 cases of Hashimoto's thyroiditis and 20 cases of follicular adenoma.The relationship between expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 and the clinical pathological characteristics were analyzed.ResultsThe expression rates of CA19-9,CA15-3 and CA125 in 80 cases of PTC were 85%,100%and 43.8%respectively,compared with BTL,the difference was statistically significant (P＜0.01).There was no significant correlation between expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 and age,gender, number and diameter of tumor nodules,lymph node metastasis,and TNM staging(P＞0.05).The sensitivity of CA19-9, CA15-3 and CA125 in the differential diagnosis of PTC and BTL were 85%,100%and 43.8%respectively,and the specificity were 91.3%,36.3%and 91.3%,respectively.ConclusionThe expressions of CA19-9,CA153 and CA125 are helpful for the differential diagnosis of PTC and BTL.

thyroid neoplasms;carcinoma,papillary;immunohistochemistry;diagnosis,differential;sensitivity and specificity;CA-19-9 antigen;CA-15-3 antigen;CA-125 antigen

R736.1

A

10.11958/20160511

1河南省平頂山市第一人民醫(yī)院內分泌代謝科（郵編467000）；2中國人民解放軍152醫(yī)院病理科

侯衛(wèi)東（1981），男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事內分泌代謝疾病的基礎與臨床研究

△通訊作者E-mail:hou_dm@126.com