柞蠶敗血病致病菌賽氏桿菌對(duì)柞蠶幼蟲及成蟲感染試驗(yàn)

赫英姿 劉孝良 于庭洪 賈 姝 趙 翀 左玲玲 宋 策

(遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所,遼寧鳳凰蠶藥專業(yè)技術(shù)創(chuàng)新平臺(tái),遼寧省野蠶研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧鳳城 118100)

柞蠶敗血病致病菌賽氏桿菌對(duì)柞蠶幼蟲及成蟲感染試驗(yàn)

赫英姿 劉孝良 于庭洪 賈 姝 趙 翀 左玲玲 宋 策*

(遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所,遼寧鳳凰蠶藥專業(yè)技術(shù)創(chuàng)新平臺(tái),遼寧省野蠶研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧鳳城 118100)

柞蠶敗血病在室內(nèi)養(yǎng)蠶試驗(yàn)中時(shí)常發(fā)生,尤其是賽氏桿菌感染致死蠶(蛾)呈現(xiàn)鮮艷的玫瑰紅色而容易辨別。通過試驗(yàn)表明：賽氏桿菌在柞蠶幼蟲之間主要是通過體表抓傷傳染，在蛾體也是以體壁創(chuàng)傷的方式感病較重。

柞蠶幼蟲 柞蠶蛾 經(jīng)口添食 經(jīng)皮注射 感染 賽氏桿菌

在柞蠶室內(nèi)試驗(yàn)中，常常由于飼養(yǎng)環(huán)境密閉，蠶群密度較大而大量發(fā)生柞蠶敗血病，成為影響試驗(yàn)結(jié)果的一大因素。柞蠶幼蟲和成蟲原發(fā)性敗血病(細(xì)菌直接從蠶的體壁傷口侵入血淋巴內(nèi)而引起發(fā)病)和繼發(fā)性敗血病(敗血病菌在蠶消食管內(nèi)繁殖，是否發(fā)病由蠶發(fā)育狀況決定)[1]的發(fā)病率究竟怎樣目前還未見報(bào)道。下面僅以賽氏桿菌感染為例作一研究。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)柞蠶成蟲：本所二化一放課題組抗大品種母蛾。

試驗(yàn)蠶: 本課題組抗大x9906雜交種卵所孵化幼蟲。

賽氏桿菌病原菌為本課題組保存。

1.2 方法

1.2.1 賽氏桿菌菌懸液制備

培養(yǎng)基配方:氯化鈉0.5%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，瓊脂2%，pH7～7.2。 每支試管加注5 mL培養(yǎng)基，擺成斜面，接菌備用。取若干支菌管，刮下斜面菌落，每管加無菌水10 mL，收集到三角瓶中震蕩備用。

1.2.2 對(duì)柞蠶幼蟲感染試驗(yàn)

春柞蠶種卵消毒，收蟻，飼養(yǎng)至二眠起即三齡蠶。

1)經(jīng)口添食。每瓶1頭蠶，共30頭蠶。另設(shè)清水對(duì)照。選取大小均勻的30片葉片，用棉球蘸取制備好的賽氏桿菌的菌液涂布葉片，以葉片涂滿為度，陰干。另取新鮮葉片用作對(duì)照。試蠶饑餓半天后統(tǒng)一飼喂。24 h后除沙，換新鮮葉片。

2)經(jīng)皮注射。取30頭三齡柞蠶，每養(yǎng)蟲瓶1頭，用微量進(jìn)樣器每頭注射5微升上述菌液，另有30頭注射無菌水作為對(duì)照。

1.2.3 對(duì)柞蠶成蟲的感染試驗(yàn)

1)空氣噴灑菌液。取30頭二化一放抗大品種母蛾，每養(yǎng)蟲瓶裝入1頭，然后裝入一個(gè)紙箱,用小噴壺在箱內(nèi)噴灑菌液，然后蓋上紙箱口。設(shè)噴清水對(duì)照。

2)蛾體注射菌液。取30頭母蛾，每蛾用微量進(jìn)樣器注射5微升上述菌液，另取30頭注射無菌水作為對(duì)照。室溫23～30℃。

2 結(jié)果

2.1 幼蟲感染結(jié)果

幼蟲經(jīng)口添食賽氏桿菌，5天后，有3頭蠶發(fā)生敗血病，體色微紅，至第十天另有3頭發(fā)病，清水對(duì)照始終沒有發(fā)病。結(jié)果見表1。

幼蟲經(jīng)皮注射賽氏桿菌，次日，處理和對(duì)照各有兩頭死蠶，至第三日處理死蠶體色變成粉紅色，對(duì)照死蠶體色不變。第三天處理區(qū)80%蠶死亡且體色發(fā)紅，為賽氏桿菌感染所致，對(duì)照沒有發(fā)病。結(jié)果見表2。

表1 賽氏桿菌對(duì)柞蠶三齡幼蟲經(jīng)口添食感染情況

表2 賽氏桿菌對(duì)柞蠶三齡幼蟲經(jīng)皮注射感染情況

2.2 成蟲感染結(jié)果

成蟲噴灑賽氏桿菌，5天后蛾大部分死亡，蛾肚干涸，顏色不變或?yàn)楹谏?。?duì)照蛾死亡，蛾肚干涸，顏色不變。結(jié)果見表3。

成蟲經(jīng)皮注射賽氏桿菌5微升，5天后均發(fā)病，蛾肚環(huán)節(jié)露出粉紅色，掰開蛾肚呈現(xiàn)粉紅色脂肪。對(duì)照蛾大部分死亡，但蛾肚為黑色或不變色。結(jié)果見表4(說明：柞蠶成蟲的自然壽命是7 d左右)。

表3 賽氏桿菌噴灑蛾體感染情況

表4 賽氏桿菌注射蛾體感染情況

3 結(jié)論

3.1 通常發(fā)生在柞蠶幼蟲和成蟲期的柞蠶敗血病，以細(xì)菌經(jīng)體壁傷口侵入而引起的原發(fā)性感染發(fā)病為重。以賽氏桿菌為例，三齡幼蟲經(jīng)口添食，10天的發(fā)病率為20%；經(jīng)皮注射，3天的發(fā)病率達(dá)到80%。成蟲空氣噴灑菌液，至一周左右死亡，處理區(qū)與對(duì)照死亡癥狀相同，解剖后沒有出現(xiàn)特有的粉紅色脂肪，為自然死亡；經(jīng)皮注射，5天后處理區(qū)全部發(fā)病，蛾肚呈現(xiàn)粉紅色，為賽氏桿菌致死，對(duì)照死亡蛾體不變色或?yàn)楹谏?/p>

3.2 柞蠶在飼養(yǎng)過程中要經(jīng)過3至4次的移蠶，在裝筐時(shí)密度大，蠶很容易抓傷，這時(shí)如果空氣中或蠶具上攜帶有敗血病致病菌，就很容易感染敗血病。尤其是室內(nèi)養(yǎng)蠶試驗(yàn)，蠶群密度大，蠶體抓傷后很容易感染敗血病菌，從而給試驗(yàn)結(jié)果帶來影響。而經(jīng)口感染敗血病的幾率不大[2]。

3.3 柞蠶制種工作中由于抓蛾不及時(shí)導(dǎo)致蛾體相互抓傷，傷口若感染敗血病菌，發(fā)病率高達(dá)100%。

3.4 由于柞蠶幼蟲、成蟲原發(fā)性感染賽氏桿菌病原菌的發(fā)病率均較高(80%以上)，因此考察賽氏桿菌的穩(wěn)定性及理化滅菌方法成為了我們的工作目標(biāo)之一[3]。

[1] 李樹英,秦利.柞蠶病理學(xué)[M].沈陽:遼寧科學(xué)技術(shù)出版社,2015:124-127.

[2] 秦利.中國柞蠶學(xué)[M].北京:中國科學(xué)文化出版社,2003:559-561.

[3] 宿桂梅,赫英姿,劉孝良,等.幾種常見物理滅菌方法對(duì)柞蠶鏈球菌的滅活作用[J].蠶業(yè)科學(xué),2015,41(2):387-390.

Experiment on Infection of Serratia marcescens Bizio Tussah Septicemia Pathogeny for Tussah’s Larva and Adult Worm

HE Yingzi，LIU Xiaoliang，YU Tinghong，JIA Shu，ZHAO Chong，ZUO Lingling，SONG Ce*

(Liaoning Institute of Sericultural Sciences，Liaoning Phoenix Professional and Technical Innovation Platform for Tussah Silkworm Medicine，Key Lab on Wild silkworm Research of Liaoning Province,118100, Fengcheng, Liaoning, China)

Tussah septicemia often occurs in indoor test, especially caused by Serratia marcescens Bizio infection which is easily identified because of the rosy color of dead worms (moths). The test indicated that Serratia marcescens Bizio affected larva by body surface scratch and adult by serious body wall trauma.

tussah larva; tussah adult; per os feeding; percutaneous injection; affect; Serratia marcescens Bizio

* 資助項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-22)；遼寧省科技廳項(xiàng)目(2012201024-6-1)

赫英姿(1973—)，女，大學(xué)本科，副研究員。

宋策(1966—)，男，碩士，研究員。E-mail:songce@163.com