種植與野生走馬胎的化學(xué)成分差異分析*

龍杰超，馮 軍，劉布鳴，何開家，陳明生

(廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530022)

種植與野生走馬胎的化學(xué)成分差異分析*

龍杰超，馮 軍，劉布鳴**，何開家，陳明生

(廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530022)

【目的】為給種植走馬胎入藥提供科學(xué)依據(jù)，研究種植走馬胎與野生走馬胎的化學(xué)成分差異?！痉椒ā坎捎帽由V法對比種植與野生走馬胎的色譜特征，并用分光光度法對比測定其多糖的含量。【結(jié)果】野生與種植走馬胎的薄層色譜特征和多糖含量基本一致。【結(jié)論】種植走馬胎與野生走馬胎的化學(xué)成分無明顯差異，可代替野生走馬胎入藥。

走馬胎 薄層色譜 分光光度法 多糖

0 引言

【研究意義】走馬胎(Ardisia gigantifolia Stapf)為紫金?？谱辖鹋僦参锎笕~紫金牛的干燥根及根莖[1]，主要分布廣西、江西、廣東等地。走馬胎祛風(fēng)濕、壯筋骨、活血祛瘀，為民間常用的跌打傷科用藥。隨著走馬胎的開發(fā)利用，野生走馬胎資源日益減少。開展人工種植、擴(kuò)大藥材資源對走馬胎及其制劑的可持續(xù)發(fā)展具有現(xiàn)實(shí)意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】現(xiàn)有的研究表明，走馬胎含有皂苷、黃酮、揮發(fā)油等多種成分[2-5]，具有顯著的抗惡性腫瘤、抗炎、抗氧化等生物活性[6-12]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前為止，尚未見野生走馬胎和種植走馬胎的化學(xué)成分對比研究的報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】參考文獻(xiàn)[13]，對比研究野生走馬胎與種植走馬胎的化學(xué)成分，為其入藥提供依據(jù)。在不同展開系統(tǒng)下對野生和種植走馬胎不同部位進(jìn)行薄層色譜分析，并采用紫外分光光度法測定野生和種植走馬胎中多糖的含量。

1 材料與方法

1.1 材料

島津UV2550紫外可見風(fēng)光光度計(jì)和高速多功能粉碎機(jī)(上海冰都電器有限公司)，電子天平(梅特勒XS-205 瑞士梅特勒-托利多公司)，HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)，KQ-5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，ZF-90D暗箱式紫外分析儀(上海光豪分析儀器有限公司)。

野生走馬胎采自廣西樂業(yè)縣，種植走馬胎采自廣西樂業(yè)縣甘田鎮(zhèn)種植基地。經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院何開家主任藥師鑒定兩者都為紫金?？谱辖鹋僦参锎笕~紫金牛的干燥全株；D-無水葡萄糖對照品(批號：110833-201205)由中國食品藥品檢定研究院提供，水為超純水，其他試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 TLC鑒別

1.2.1.1 供試品溶液的制備

將干燥的種植走馬胎及野生走馬胎的根莖、莖、葉部位分離并粉碎過40目篩，分別稱取2 g置于具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，靜置浸泡30 min，超聲提取1 h；0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。

1.2.1.2 供試品溶液的展開

在同一塊G-硅膠板上，取1.2.1.1節(jié)制備的供試品點(diǎn)樣，分別以環(huán)己烷-丙酮(2∶1)、石油醚-乙酸乙酯(4∶1)、正己烷-乙酸乙酯(3∶1)為展開劑，預(yù)飽和10 min，展開后取出晾干，再分別以10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃的烘箱中烘5 min，置紫外燈(365 nm)下檢視。

1.2.2 多糖含量測定

1.2.2.1 對照品溶液配制

取D-無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含D-無水葡萄糖0.5 mg的溶液。

1.2.2.2 供試品溶液配制

取走馬胎根莖粉末(40目)約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加5倍量80%乙醇浸泡1 h，回流提取2次，每次1 h，棄去濾液，濾渣用15倍水回流提取1 h，完全轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，加水至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。

1.2.2.3 測定波長的選擇

參照文獻(xiàn)[14]，取供試品溶液及對照品溶液各0.5 mL，加蒸餾水1.5 mL，搖勻，立即加入6%的苯酚溶液1 mL，搖勻，再加濃硫酸5 mL，于40℃水浴中保溫20 min，取出，置冰浴中保持15 min，以相應(yīng)溶劑為空白，在400～600 nm范圍進(jìn)行光譜掃描。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層色譜鑒別

將野生走馬胎與種植走馬胎的根莖、莖、葉的供試品溶液點(diǎn)于同一薄層板上，分別在不同展開系統(tǒng)下展開。圖1結(jié)果顯示,種植與野生走馬胎對應(yīng)部位的薄層色譜特征基本一致。

(a)環(huán)己烷-丙酮(2∶1);(b)石油醚-乙酸乙酯(4∶1);(c)正己烷-乙酸乙酯(3∶1)；1：種植根莖;2：種植莖;3：種植葉;4：野生根莖;5：野生莖;6：野生葉

(a)Cyclohexane-acetone(2∶1);(b)Petroleum ether-ethyl acetate(4∶1);(c)n-hexane-ethyl acetate(3∶1)；

1：Cultivated rhizome;2：Cultivated stem;3：Cultivated leaf;4：Wild rhizome;5：Wild stem;6：Wild leaf

圖1 野生與種植走馬胎的TLC圖譜

Fig.1 TLC of wild and cultivated Ardisia gigantifolia Stapf

2.2 多糖含量測定

2.2.1 檢測波長的選擇

將進(jìn)行顯色反應(yīng)后的供試品溶液及葡萄糖對照品溶液在400～600 nm范圍進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果兩種溶液在491 nm處均有最大吸收(圖2)，故選擇491 nm作為含量測定的檢測波長。

A：對照品Standard；B：供試品Sample

圖2 對照品及供試品光譜

Fig.2 Spectrogram of the standard and sample

2.2.2 多糖含量

參照文獻(xiàn)方法[14]，對比測定種植走馬胎與野生走馬胎根莖中多糖含量，結(jié)果分別為15.02 mg/g、15.88 mg/g。

3 結(jié)論

采用薄層色譜法對比種植與野生走馬胎的色譜特征，并用分光光度法對比其多糖含量。為了全面反應(yīng)種植走馬胎與野生走馬胎在化學(xué)成分上的差異，將其根莖、莖和葉分開對比分析，但由于其藥用部位是根莖，故只選擇對比根莖部位的多糖含量；雖然走馬胎中含有多種成分[2-5]，但因藥材中含量低或缺少對應(yīng)的化學(xué)對照品，故本文未在薄層色譜中引入相應(yīng)的對照品進(jìn)行對比鑒別。薄層色譜和分光光度測定結(jié)果表明，種植走馬胎與野生走馬胎對應(yīng)部位的薄層色譜特征及多糖含量均無明顯差別，為種植走馬胎代替野生走馬胎入藥提供了科學(xué)依據(jù)。

[1] 廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):第一卷[S].南寧:廣西科學(xué)技術(shù)出版社,2008. Guangxi Food and Drug Administration.Quality Standard of Guangxi Zhuang Medicine:Vol.1[S].Nanning:Guangxi Science and Technology Press,2008.

[2] 盧文杰,王雪芬,陳家源,等.大葉紫金?；瘜W(xué)成分的研究[J].華西藥學(xué)雜志,1990,5(3):136-138. LU W J,WANG X F,CHEN J Y,et al.Studies on the chemical constituents of Ardisia gigantifolia Stapf[J].West China Journal of Pharmaceutical Sciences,1990,5(3):136-138.

[3] 封聚強(qiáng),黃志雄,穆麗華,等.走馬胎化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2011,36(24):3463-3466. FENG J Q,HUANG Z X,MU L H,et al.Study on chemical constituents of rhizome of Ardisia gigantifolia[J].China Journal of Chinese Materia Medica,2011,36(24):3463-3466.

[4] 李群芳,婁方明,段興麗,等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定走馬胎揮發(fā)油成分[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(11):2883-2884. LI Q F,LOU F M,DUAN X L,et al.Determination of volatile oil in Ardisia gigantifolia by GC-MS[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research,2009,20(11):2883-2884.

[5] 婁方明,李群芳,張倩茹,等.微波輔助水蒸氣蒸餾走馬胎揮發(fā)油的研究[J].中藥材,2010,33(5):815-819. LOU F M,LI Q F,ZHANG Q R,et al.Study on extraction of volatile oil in Ardisia gigantifolia by microwave assisted steam distillation[J].Journal of Chinese Medicinal Materials,2010,33(5):815-819.

[6] 穆麗華,趙海霞,龔強(qiáng)強(qiáng),等.走馬胎中的三萜皂苷類成分及其體外抗腫瘤活性研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(1):1-6. MU L H,ZHAO H X,GONG Q Q,et al.Triterpenoid saponins and the antitumor activity from the rhizome of Ardisia gigantifolia Stapf[J].Pharmaceutical Journal of Chinese People’s Liberation Army,2011,27(1):1-6.

[7] 陳超,孫艷,董憲喆,等.走馬胎中化合物AG4對人鼻咽癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響[J].中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測,2015,12(1):12-15. CHEN C,SUN Y,DONG X Z,et al.Inhibition of compound AG4 from Ardisia gigantifolia Stapf on xenograft tumor growth of human nasopharyngeal carcinoma in nude mice[J].Chinese Journal of Drug Application and Monitoring,2015,12(1):12-15.

[8] 楊竹,黃敬輝,王乃利,等.走馬胎中新的巖白菜素衍生物的提取分離及體外抗氧化活性測定[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,25(1):30-34. YANG Z,HUANG J H,WANG N L,et al.New bergenin derivatives and the antioxidant activity from Ardisia gigantifolia Stapf[J].Journal of Shenyang Pharmaceutical University,2008,25(1):30-34.

(Continueonpage293)(Continuefrompage277)

[9] 鄭小麗,董憲喆,穆麗華,等.走馬胎中皂苷成分AG4對MCF-7腫瘤細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2013,29(5):674-679. ZHENG X L,DONG X Z,MU L H,et al.Antiproliferation activity of triterpenoid saponins AG4 from Ardisia gigantifolia Stapf on MCF-7 cells[J].Chinese Pharmacological Bulletin,2013,29(5):674-679.

[10] 谷永杰,穆麗華,董憲喆,等.走馬胎中三萜皂苷成分H1對6株腫瘤細(xì)胞增殖及對A549肺癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(10):130-133. GU Y J,MU L H,DONG X Z,et al.Effect of triterpenoid saponins H1 from Ardisia gigantifolia on proliferation of six different tumor cell lines and apoptosis and cell cycle of A549 tumor[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2014,20(10):130-133.

[11] 沈詩軍,周定剛,黎德兵.走馬胎提取液體內(nèi)抗血栓作用研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(9):2224-2226. SHEN S J,ZHOU D G,LI D B.Studies on the anti-thrombosis effects of Ardisia gigantifolia Stapf extract in vivo[J].Lishizhen Medicine and Material Medica Research,2008,19(9):2224-2226.

[12] 唐亞平.中藥走馬胎治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床觀察[J].四川中醫(yī),2007,25(1):54-55. TANG Y P.Clinical observation on treatment of rheumatoid arthritis by Ardisia gigantifolia Stapf[J].Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine,2007,25(1):54-55.

[13] 陳赤,何開家,劉布鳴,等.野生與野生撫育貓爪草藥材的分析比較研究[J].廣西科學(xué),2008,15(1):70-74. CHEN C,HE K J,LIU B M,et al.The study on the comparison between wild and cultivatedRadixranunculusternatus[J].Guangxi Sciences,2008,15(1):70-74.

[14] 戴敏,周凌云.走馬胎多糖含量測定及其提取工藝初步研究[J].中國藥業(yè),2014,23(19):47-49. DAI M,ZHOU L Y.Content determination of polysaccharide inArdisiagigantifoliaStapf and preliminary study on its extraction process[J].China Pharmaceuticals,2014,23(19):47-49.

(責(zé)任編輯：尹 闖)

Variance Analysis of Chemical Constituents in the Cultivated and WildArdisiagigantifoliaStapf

LONG Jiechao，F(xiàn)ENG Jun，LIU Buming，HE Kaijia，CHEN Mingsheng

(Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Standards,Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning,Guangxi,530022,China)

【Objective】To study the compositional differences in the wild and cultivated Ardisia gigantifolia Stapf,and provide scientific basis for the cultivated Ardisia gigantifolia Stapf when used as traditional medicine.【Methods】The TLC was used to contrast the chromatographic features of the wild and cultivated Ardisia gigantifolia Stapf.And the spectrophotometry was used to contrast the content of polysaccharide in the wild and cultivated Ardisia gigantifolia Stapf.【Results】The chromatographic features and the content of polysaccharide in the wild and cultivated Ardisia gigantifolia Stapf were similar.【Conclusion】The chemical constituents in the cultivated and wild Ardisia gigantifolia Stapf had no obvious differences and they could substitute for each other when used as traditional medicine.

Ardisia gigantifolia Stapf，TLC，spectrophotometry，polysaccharide

http://www.cnki.net/kcms/detail/45.1075.N.20161201.0849.002.html

2016-08-15

龍杰超(1960-)，男，主管藥師，主要從事中藥資源研究與開發(fā)。

*廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)項(xiàng)目(重大專項(xiàng)計(jì)劃，桂科重1355001-5-14)資助。

Q949.773.1

A

1002-7378(2016)04-0275-03

網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間:2016-12-01 【DOI】10.13657/j.cnki.gxkxyxb.20161201.001

**通信作者：劉布鳴(1956-)，男，研究員，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥、天然藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究,E-mail:liubuming@aliyun.com。