河南南陽(yáng)信陽(yáng)地區(qū)部分規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的血清學(xué)調(diào)查

潘 文 ， 喬 磊 ， 邵 葳 ， 李 潔 ， 蘇小齊 ， 于 雷 ， 黃書林

(1.中牧實(shí)業(yè)股份有限公司 ， 北京豐臺(tái)100070 ； 2.農(nóng)業(yè)部獸用生物制品與化學(xué)藥品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ， 北京海淀100095)

河南南陽(yáng)信陽(yáng)地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的血清學(xué)調(diào)查

潘 文1，2， 喬 磊1， 邵 葳1，2， 李 潔1， 蘇小齊1， 于 雷1，2， 黃書林1，2

(1.中牧實(shí)業(yè)股份有限公司 ， 北京豐臺(tái)100070 ； 2.農(nóng)業(yè)部獸用生物制品與化學(xué)藥品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ， 北京海淀100095)

偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的一種急性傳染病，國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為二類傳染病。豬是偽狂犬病病毒的最主要宿主，豬感染PRV后的臨床癥狀隨著年齡不同差異很大。新生仔豬及15日齡以內(nèi)的仔豬表現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀，死亡率達(dá)100%。育肥豬常呈隱性感染，成年豬感染后多耐過，但長(zhǎng)期排毒，妊娠母豬表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等。

目前，國(guó)內(nèi)外普遍采用豬偽狂犬病病毒gE基因缺失活疫苗對(duì)該病進(jìn)行免疫預(yù)防，配套使用PRV gE抗體ELISA診斷試劑盒對(duì)PRV野毒抗體進(jìn)行檢測(cè)，能有效檢測(cè)豬群中PRV野毒感染情況。自2011年豬偽狂犬病(PR)疫情率先在華北暴發(fā)以來，目前呈持續(xù)蔓延態(tài)勢(shì)[1-2]。為了解近期河南南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)部分規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染情況，本文采用美國(guó)IDEXX公司豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)使用了PRV Bartha-k61株gE基因缺失活疫苗的23個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查，共采集733份血清進(jìn)行了PRV-gE抗體檢測(cè)，該調(diào)查對(duì)河南南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)的偽狂犬病的防控措施提供了有效理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清 2015年6月采自河南南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)共23家規(guī)?；i場(chǎng)，共計(jì)733份血液樣品，采血后自然凝固，分離血清，置4 ℃冰箱保存。

1.2 診斷試劑盒 豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司。

1.3 檢測(cè)方法與結(jié)果判定 血清樣品的檢測(cè)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，計(jì)算S/N比值，S=樣品孔OD650nm值，N=陰性對(duì)照孔平均OD650nm值。若S/N≤0.6，樣品判定為gE抗體陽(yáng)性；0.60.7判為gE抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 河南南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)參加此次PRV gE抗體檢測(cè)的豬場(chǎng)共計(jì)23家，300頭以上豬場(chǎng)7家，100～300頭豬場(chǎng)16家，樣品共計(jì)733份。無偽狂犬野毒感染的豬群共計(jì)5家，分別是F豬場(chǎng)、H豬場(chǎng)、K豬場(chǎng)、N豬場(chǎng)、W豬場(chǎng)，占南陽(yáng)、信陽(yáng)兩地區(qū)的21.7%，偽狂犬野毒呈現(xiàn)陽(yáng)性的豬場(chǎng)18家，占整個(gè)南陽(yáng)、信陽(yáng)兩地區(qū)78.3%，血清樣品抗體陽(yáng)性率為44.2%。見表1。

2.1.1 南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)PRV gE陰性豬場(chǎng)的抗體分析 5家豬場(chǎng)偽狂犬野毒檢測(cè)S/N平均值大于 0.9，離散度均小于25%，結(jié)果判定陰性，說明豬場(chǎng)生物安全防控工作執(zhí)行到位。建議上述5家豬場(chǎng)繼續(xù)使用現(xiàn)有疫苗，同時(shí)，重點(diǎn)關(guān)注后備母豬引種注意事項(xiàng)，在引種前對(duì)每頭母豬進(jìn)行偽狂犬野毒抗體檢測(cè)，引種后做好隔離、馴化、免疫等工作，以防偽狂犬野毒隨母豬帶入豬場(chǎng)。

2.1.2 南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)PRV gE陽(yáng)性豬場(chǎng)抗體分析

3家豬場(chǎng)偽狂犬野毒檢測(cè)S/N平均值小于0.6，結(jié)果判定陽(yáng)性。陽(yáng)性率均在20%以下，建議上述3家豬場(chǎng)重點(diǎn)關(guān)注豬群的偽狂犬抗體變化及健康情況，以進(jìn)一步評(píng)判當(dāng)前使用的偽狂犬疫苗對(duì)偽狂犬野毒是否具備良好的交叉免疫保護(hù)作用。

15家豬場(chǎng)偽狂犬野毒檢測(cè)S/N平均值小于 0.6，結(jié)果判定陽(yáng)性，但離散度在60%以上，且陽(yáng)性率均在20%以上，說明上述豬場(chǎng)當(dāng)前所使用偽狂犬疫苗對(duì)偽狂犬野毒交叉免疫保護(hù)性較差，建議及時(shí)科學(xué)的更換疫苗廠家、調(diào)整免疫程序，同時(shí)有計(jì)劃的做好豬群偽狂犬野毒抗體檢測(cè)。

表1 河南南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)23個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)PRV gE抗體情況

注：A～G豬場(chǎng)為300頭以上豬場(chǎng)；H～W豬場(chǎng)為100～300頭豬場(chǎng)

2.2 河南南陽(yáng)、信陽(yáng)地區(qū)部分典型豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果分析

2.2.1 A豬場(chǎng)(300頭以上)PRV gE抗體檢測(cè)情況

A豬場(chǎng)當(dāng)前使用國(guó)內(nèi)α公司偽狂犬K61毒株疫苗，豬群偽狂犬抗體檢測(cè)結(jié)果大部分呈陰性，但在育肥后期陽(yáng)性率突然猛增達(dá)到75%(見中插彩版圖1)，這有可能是由于現(xiàn)有免疫程序存在漏洞，偽狂犬野毒入侵，導(dǎo)致所使用的疫苗不能提供免疫交叉保護(hù)，建議該場(chǎng)增加對(duì)育肥豬偽狂犬的免疫次數(shù)，并進(jìn)一步做好偽狂犬野毒的抗體檢測(cè)工作，同時(shí)做好生物安全等綜合防控措施。

2.2.2 F豬場(chǎng)(300頭以上)PRV gE抗體檢測(cè)情況

F豬場(chǎng)當(dāng)前所使用的國(guó)內(nèi)β公司偽狂犬K61毒株，各階段豬群偽狂犬野毒均呈現(xiàn)陰性。說明F豬場(chǎng)免疫程序科學(xué)合理，現(xiàn)有疫苗能夠?qū)慰袢岸酒鸬浇徊婷庖弑Ｗo(hù)性的作用，另外，通過抗體檢測(cè)結(jié)果可以看出，仔豬能通過母源抗體保護(hù)的方式免受偽狂犬野毒的侵襲(見中插彩版圖2)。追溯該廠的免疫程序，該場(chǎng)嚴(yán)格執(zhí)行公母豬每年4次免疫，小豬30日齡免疫1次，60～70日齡再免疫1次的免疫程序。建議繼續(xù)保留疫苗廠家、使用現(xiàn)有免疫程序，同時(shí)，加強(qiáng)豬群偽狂犬野毒的抗體檢測(cè)并做好生物安全等綜合防控措施。

2.2.3 R豬場(chǎng)(100～300頭)PRV gE抗體檢測(cè)情況及分析 R豬場(chǎng)當(dāng)前所使用的國(guó)內(nèi)γ公司偽狂犬K61毒株疫苗，母豬群免疫該公司疫苗后其偽狂犬野毒抗體陽(yáng)性仍在50%以上，達(dá)不到通過母源抗體保護(hù)仔豬免受偽狂犬野毒侵襲的目的。另外，在育肥后期其偽狂犬陽(yáng)性率快速上升，說明該場(chǎng)育肥豬在育肥后期偽狂犬野毒擴(kuò)散現(xiàn)象嚴(yán)重(見中插彩版圖2)。建議及時(shí)調(diào)整現(xiàn)有免疫程序或更換疫苗廠家、制定科學(xué)有效的免疫程序同時(shí)，做好生物安全等綜合防控措施。

2.2.4 U豬場(chǎng)(100～300頭)PRVg-I抗體檢測(cè)情況 U豬場(chǎng)屬于偽狂犬野毒陽(yáng)性不穩(wěn)定場(chǎng)，現(xiàn)使用的進(jìn)口δ公司偽狂犬K61毒株，可能由于母豬群每年偽狂犬的免疫次數(shù)偏少，導(dǎo)致保育豬不能得到良好的母源抗體抵御偽狂犬野毒的入侵；但從該場(chǎng)育肥豬育肥后期陽(yáng)性率的變化可以看出，進(jìn)口偽狂犬K61毒株確實(shí)在對(duì)偽狂犬野毒發(fā)揮著良好的交叉免疫保護(hù)作用。因此，建議該場(chǎng)繼續(xù)使用該疫苗，母豬群每年免疫3次，在產(chǎn)前4周跟胎免疫，保育育肥豬免疫程序不再做調(diào)整。

3 討論

通過此次對(duì)河南南陽(yáng)、信陽(yáng)兩地區(qū)偽狂犬野毒抗體的檢測(cè)與分析，了解了河南南陽(yáng)、信陽(yáng)兩地區(qū)偽狂犬野毒的流行情況。當(dāng)前河南南陽(yáng)、信陽(yáng)兩地區(qū)78.3%豬場(chǎng)均存在偽狂犬野毒情況，這與2014年中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)楊漢春教授對(duì)全國(guó)23個(gè)地區(qū)266個(gè)豬場(chǎng)15 029份血清偽狂犬gE抗體監(jiān)測(cè)，數(shù)據(jù)顯示gE抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)為80.08%的數(shù)據(jù)[3]相當(dāng)，說明河南南陽(yáng)、信陽(yáng)兩地區(qū)2015年偽狂犬野毒防控形勢(shì)仍十分嚴(yán)峻。

目前所使用的偽狂犬K61毒株，對(duì)偽狂犬野毒確實(shí)能夠在一定程度上起到交叉免疫保護(hù)作用，但偽狂犬K61毒株所發(fā)揮交叉免疫保護(hù)作用的好壞主要取決于各批次疫苗間抗原含量的穩(wěn)定性、母豬群的免疫次數(shù)、育肥豬的免疫程序等幾個(gè)要素，其中注重育肥豬免疫的豬場(chǎng)野毒交叉感染率較低。梅里亞公司豬事業(yè)部技術(shù)經(jīng)理袁沖在《豬偽狂犬病流行勢(shì)態(tài)、發(fā)病原因分析及預(yù)防措施》一文中也提到的“在大多數(shù)豬場(chǎng)中，肥育豬是免疫的薄弱環(huán)節(jié)。仔豬免疫的程序的不合理，免疫劑量不足，均可造成感染，使肥育期豬群不足以抵御強(qiáng)毒攻擊而感染，臨床出現(xiàn)咳嗽并大量排毒，同時(shí)血清gE抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)，大量強(qiáng)毒的擴(kuò)散，使母豬群處于病毒高壓下，當(dāng)病毒高壓突破母豬抗力，則出現(xiàn)流產(chǎn)，繼而仔豬發(fā)病死亡[4]。”

另外母豬群較高的PRV野毒陽(yáng)性率也是整個(gè)豬場(chǎng)持續(xù)陽(yáng)性的根本原因，由于母豬飼養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一旦感染PRV野毒，可長(zhǎng)期帶毒排毒，引起持續(xù)性感染[5]。制定合理的免疫程序，能夠有效的降低感染的發(fā)生，母豬群每年普免3次，然后于產(chǎn)前4周進(jìn)行跟胎免疫(上產(chǎn)床后2～3 d采血進(jìn)行抗體檢測(cè))，保育育肥豬的免疫程序需要根據(jù)母豬群的抗體情況、母源抗體的消長(zhǎng)情況進(jìn)行制定。同時(shí)，還應(yīng)加強(qiáng)對(duì)后備母豬引種工作的監(jiān)管，加強(qiáng)豬群偽狂犬野毒的抗體檢測(cè)、豬群通風(fēng)、日常消毒、清除場(chǎng)內(nèi)犬貓等寵物。

[1] 胡睿銘，湯細(xì)彪，劉峰.2011-2013年豬偽狂犬病在我國(guó)部分地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查與分析[C].第十四屆全國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)主要疫病監(jiān)控與凈化專題研討會(huì)論文集，武漢：2014：83-88.

[2] 彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn).豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35(1)：1-4.

[3] 楊漢春.2014年豬病流行情況與2015年流行趨勢(shì)及防控對(duì)策[J].豬業(yè)科學(xué)，2015(2)：38-40.

[4] 袁沖.豬偽狂犬病流行勢(shì)態(tài)發(fā)病原因分析及預(yù)防措施[J].國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽)，2015(5)：33-37.

[5] 常洪濤，劉慧敏，郭占達(dá).河南省及周邊省份豬群中大面積感染豬偽狂犬病毒的病因分析[J].病毒學(xué)報(bào)，2014(4)：441-449.

2015-09-28

潘文(1985-)，女，碩士，主要從事動(dòng)物疫苗研發(fā)工作，E-mail：Pstone1985@163.com

黃書林，E-mail：Hslcau@163.com

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0529-6005(2016)11-0055-02