酒制山茱萸的炮制工藝研究

胡榮

（山西藥科職業(yè)學院，山西太原030031）

酒制山茱萸的炮制工藝研究

胡榮

（山西藥科職業(yè)學院，山西太原030031）

為了優(yōu)選酒制山茱萸的炮制工藝，采用單因素考察法，對炮制工藝中的加酒量、悶潤時間、蒸制時間3個因素進行優(yōu)選，以馬錢苷、熊果酸、齊墩果酸的含量為考察指標，建立RP-HPLC-ELSD測定方法。結果表明，最佳炮制工藝為黃酒用量25%、悶潤時間1 h、蒸制時間3 h。炮制工藝合理可行，經(jīng)方法學考察，RP-HPLC-ELSD法準確、重復性好，適用于山茱萸飲片的質量控制。

酒制；山茱萸；炮制工藝

中藥山茱萸是植物山茱萸（Comus officinalisSieb.et Zucc）的干燥成熟果肉。山茱萸中含有多種化學成分，研究表明，其主要有效成分為馬錢苷、熊果酸、齊墩果酸[1-6]。山茱萸是臨床常用藥物，常用炮制方法為酒制[7-12]。但酒制工藝的不同，會導致有效成分的含量差異較大，影響療效，因此，酒制山茱萸炮制工藝需要進一步研究[13-18]。

本研究通過單因素試驗研究山茱萸的酒制工藝，建立RP-HPLC-ELSD法，比較不同酒制工藝對山茱萸中馬錢苷、熊果酸、齊墩果酸含量的影響，以優(yōu)化飲片酒制工藝，旨在建立更佳山茱萸飲片的質量控制方法。

1 材料和方法

1.1 材料及儀器試劑

山茱萸藥材購自浙江臨安，經(jīng)山西藥科職業(yè)學院裴慧蓉教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸ComusofficinalisSieb.et Zucc的成熟果肉。

Waters2420型蒸發(fā)光散射檢測器（美國）；Waters1525型高效液相色譜儀（美國）；電子分析天平（Satorius BS124S，0.1 mg，德國；METTLER TOLEDO AB135-S，0.01 mg）；電熱恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司）；微孔濾膜（希波式，0.45 μm）。

熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸對照品（批號分別為110742－200313，111640－200503，110709－200304）購自中國藥品生物制品檢定所；水為純凈水；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，高純氮氣。

1.2 試驗方法

1.2.1 含量測定

1.2.1.1 液相色譜條件和系統(tǒng)適應性試驗色譜條件：色譜柱為Lichrospher C18柱（德國），流動相為甲醇-0.04%醋酸溶液（A）-水-0.04%醋酸溶液（B），梯度洗脫的程序為0 min（38%A）→11 min（38%A）→11 min（90%A）→45 min（90%A）→46 min（38%A），流速1.0 mL/min，柱溫27℃。理論塔板數(shù)按馬錢苷峰計算，應不低于3 000。

ELSD參數(shù)：漂移管溫度90℃；霧化氣體N2壓力172 375 p；光電倍增管電壓70 V。

1.2.1.2 對照品及供試品溶液的制備分別精密稱取熊果酸、馬錢苷（在真空干燥器中干燥24 h）和齊墩果酸對照品10.21，10.05，10.19 mg，用甲醇定容于10 mL容量瓶中，之后用甲醇稀釋100倍作為對照品溶液。

將干燥至恒質量的山茱萸樣品粉碎成細粉過0.177 mm篩，精密稱取0.5 g左右，倒入50 mL具塞錐形瓶中，加入15 mL分析純甲醇，稱質量，超聲提取30 min，取出，用分析純甲醇補足原質量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.1.3 線性關系考察取對照品溶液，依次進樣5，10，15，20 μL，按1.2.1.1色譜條件測定熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸峰面積。以進樣量X為自變量，峰面積A為因變量，得線性方程。

1.2.1.4 穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液，一天之內(nèi)每隔3 h進一針樣，連續(xù)進5針，測定3種成分的峰面積，計算RSD。同一個樣品溶液4℃冷藏，每天進樣10 μL，連續(xù)5 d測定3種成分的峰面積，計算RSD。

1.2.1.5 精密度試驗精確吸取對照品溶液A 3，7，12 μL和一份樣品溶液10 μL，分別進樣3次，測定熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸的峰面積，計算RSD。

1.2.2 單因素考察試驗精密稱取山茱萸9份，每份約10 g，按單因素考察試驗選取的因素水平進行炮制，將炮制后的飲片置70℃烘箱中干燥至恒質量，粉碎成細粉，過0.177 mm篩。精密稱取待測樣品約5 g，按1.2.1.2供試品溶液的制備方法制備并進樣10 μL，記錄峰面積，計算馬錢苷、齊墩果酸、熊果酸的含量。

2 結果與分析

2.1 液相色譜條件確定

按照1.2.1.1的色譜條件分析對照品溶液和樣品溶液，得色譜圖（圖1-A，B）。從圖1-A可以看出，馬錢苷和齊墩果酸、熊果酸的色譜峰相距甚遠，而且后二者的峰也達到基線分離，故對三者的含量測定不會互相干擾。從圖1-B可以看出，3種成分的出峰不受其他成分影響，故該色譜條件可用于同時測定山茱萸中馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量。

2.2 線性關系

經(jīng)測定，馬錢苷、齊墩果酸、熊果酸的線性方程分別為：馬錢苷A＝15 281 684.456X＋877 852.280，R＝0.999 9，線性范圍為0.150 9～2.013 9 μg；齊墩果酸A＝25 709 818.899X－3 298 461.601，R＝0.999 9，線性范圍為0.204 8～1.334 1 μg；熊果酸A＝26 313 989.101X－3 595 768.602，R＝0.999 9，線性范圍為0.202 8～1.329 1 μg。

2.3 穩(wěn)定性試驗

馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸一天內(nèi)的相對標準偏差（RSD）值分別為0.12%，0.53%，0.74%，日間的RSD值分別為0.17%，0.76%，0.82%。試驗結果表明，樣品溶液在5 d內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 精密度試驗

試驗結果表明，當對照品進樣量為3 μL時，3種成分的RSD值分別為0.57%，0.79%，0.56%；當進樣量為7 μL時，3種成分的RSD值分別為0.31%，0.70%，0.73%，在進樣量為12 μL時，3種成分的RSD值分別為0.54%，0.95%，0.18%。當樣品進樣量為10 μL時，3種成分的RSD值分別為0.62%，0.45%，0.89%。RSD值均低于1%，表明儀器及進樣精密度良好。

2.5 單因素考察試驗

2.5.1 黃酒量的考察從表1可以看出，黃酒量為20%，25%時，所測得的齊墩果酸和熊果酸的含量有顯著性差異，而黃酒量為25%，30%所測得的3種成分的含量均無顯著性差異。從節(jié)約成本的角度考慮，故選擇黃酒量為25%。

表1 不同黃酒量測得的馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量（n＝3）mg/g

2.5.2 悶潤時間的考察從表2可以看出，悶潤時間為0.5，1 h所測得的3種成分的含量有顯著性差異，而悶潤時間為1，1.5 h所測得的3種成分的含量均無顯著性差異。從時間成本的角度考慮，故選擇悶潤時間為1 h。

表2 不同悶潤時間所測得的馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量（n＝3）mg/g

2.5.3 蒸制時間的考察從表3可以看出，蒸制時間為2，3 h所測得的3種成分的含量有顯著性差異，而蒸制時間為3，4 h所測得的3種成分的含量均無顯著性差異。從時間成本的角度考慮，故選擇蒸制時間為3 h。

表3 不同蒸制時間所測得的馬錢苷、齊墩果酸和和熊果酸的含量（n＝3）mg/g

3 結論與討論

本研究通過RP-HPLC-ELSD法同時測定山茱萸藥材中的馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量來優(yōu)選山茱萸的酒制工藝為首次報道。馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸均為山茱萸的有效成分，同時測定3種成分的含量，能夠更加全面地反映不同炮制工藝對飲片質量的影響。方法學考察結果顯示，RP-HPLCELSD法線性關系良好，精密度和穩(wěn)定性較高，而且簡便、快捷，故該方法適用于山茱萸飲片的質量控制。

馬錢苷屬于環(huán)烯醚萜苷，齊墩果酸和熊果酸屬于有機酸，二者分子極性差異很大，故要同時測定難度較大。預試驗經(jīng)過比較甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿4種溶劑對3種成分的提取效果，結果顯示，甲醇對3種成分提取效果均較好，故以甲醇作為提取溶劑。本試驗中為了避免分析時間過長而采用梯度洗脫。熊果酸和齊墩果酸屬于同分異構體，色譜行為相似，為了達到較好的分離效果，本試驗創(chuàng)新性地在流動相水和甲醇中同時加入少量醋酸溶液，既可以達到分離的目的，又可以避免因梯度洗脫而造成流動相pH值波動。由于CH3COOH在250 nm以下有末端吸收，所以，如果用紫外檢測器，檢測波長必須在250 nm以上，測定結果才不會受流動相影響。而熊果酸、齊墩果酸、馬錢苷在250 nm以上無紫外吸收，故不能用紫外檢測器。

本研究選用另一種通用檢測器蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）來檢測，基于它的測定原理，ELSD幾乎不受洗脫溶劑的影響，故在梯度洗脫全程，色譜基線穩(wěn)定。

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Study on the Processing Technology of Wine of Comus officinalis

HU Rong
（Shanxi Pharmaceutical College，Taiyuan 030031，China）

To optimize processing technology of wine of Comus officinalis,the paper using the single factor investigation method to determine the dosage of wine,stuffy in run time,steamed time in processing technology,taking the content of glycosides,ursolic acid and oleanolic acid as examining index,established RP-HPLC-ELSD determination method.The results showed that the best processing technology was wine consumption 25%,boring time of1 h,steaming time 3 h.The processing technology was reasonable,the methodology investigation,the RP-HPLC-ELSD method was accurate and reproducible,suitable to the quality control of cut crude drug of Comus officinalis.

wine processing;fructus corni;processing technology

R283

A

1002-2481（2016）01-0077-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.01.22

2015-09-15

胡榮（1982-），女，山西大同人，助教，主要從事中藥材教學及質檢研究工作。