藿芪灌注液治療奶牛卵巢靜止和持久黃體的臨床試驗

閆寶琪，王東升，張世棟，董書偉，苗小樓，那立冬，朱新榮，韓吉清，王雪酈，嚴作廷*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅蘭州 730050；2.甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心，甘肅紅古 730080；3.甘肅省秦王川奶牛試驗場，甘肅永登 730000；4.蘭州市城關(guān)區(qū)奶牛場，甘肅蘭州 730030)

藿芪灌注液治療奶牛卵巢靜止和持久黃體的臨床試驗

閆寶琪1，王東升1，張世棟1，董書偉1，苗小樓1，那立冬1，朱新榮2，韓吉清3，王雪酈4，嚴作廷1*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅蘭州 730050；2.甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心，甘肅紅古 730080；3.甘肅省秦王川奶牛試驗場，甘肅永登 730000；4.蘭州市城關(guān)區(qū)奶牛場，甘肅蘭州 730030)

將確診為患持久黃體和卵巢靜止的病牛各40頭，隨機分為4組，分別為藿芪灌注液高、中(推薦劑量)、低劑量治療組和促孕灌注液對照治療組，每組10頭。試驗組每頭牛分別按每次150 mL、100 mL和50 mL的劑量子宮灌服，隔日1次，4次為1個療程。對照藥物治療組為促孕灌注液，每次100 mL，隔日1次，4次為1個療程。結(jié)果顯示，用藿芪灌注液治療奶牛持久黃體的高、中、低劑量組的治愈率分別是80%、70%和50%，總有效率分別是90%、90%和60%。對照組治愈率80%，總有效率90%。高劑量組、中劑量組和對照組的治愈率和總有效率均顯著高于低劑量組(P<0.05)，高劑量組與中劑量組之間無顯著性差異(P>0.05)，藿芪灌注液高、中劑量組與對照藥物組之間無顯著差異(P>0.05)。用藿芪灌注液治療奶牛卵巢靜止高、中、低劑量組的治愈率分別是90%、80%和60%，總有效率分別是100%、100%和70%；對照組治愈率80%，總有效率90%，高劑量組、中劑量組和對照組的治愈率和總有效率均顯著高于低劑量組(P<0.05)，高劑量組與中劑量組之間無顯著性差異(P>0.05)，高、中劑量組與對照組之間無顯著差異(P>0.05)。

奶牛；持久黃體；卵巢靜止；療效

近年來，隨著奶牛數(shù)量的增長，單產(chǎn)逐年增加，集約化程度不斷提高，奶牛產(chǎn)后 60 d～80 d不發(fā)情以及產(chǎn)后120 d以上屢配不孕的現(xiàn)象增多，導(dǎo)致絕大多數(shù)牛場產(chǎn)犢間隔難以達到理想標(biāo)準(zhǔn)，造成嚴重經(jīng)濟損失。引起奶牛不孕的主要原因有遺傳、管理、營養(yǎng)、疾病和環(huán)境因素，而在疾病性不孕中多數(shù)為子宮疾病和卵巢性疾病[1-4]。奶牛發(fā)生卵巢疾病常引起奶牛的產(chǎn)犢數(shù)減少，產(chǎn)犢間隔延長，屢配不孕，發(fā)情周期延長、紊亂或長期不發(fā)情，致使奶牛不能正常配種受胎，產(chǎn)奶量下降甚至不產(chǎn)奶，飼養(yǎng)管理及配種費用增加，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。據(jù)統(tǒng)計，在我國約有20%～40%的高產(chǎn)奶牛存在繁殖障礙，僅次于乳房炎，成為影響我國奶業(yè)發(fā)展的第二大疾病[5-6]。近年，對奶牛卵巢疾病性不孕癥的療法主要有藥物療法、激光療法、穴位埋線療法、電針療法和電磁波療法等，其中以藥物療法應(yīng)用最為廣泛，藥物療法以激素療法為主。這些激素大多是蛋白質(zhì)或多肽類激素，臨床上往往因診斷手段的限制，不易確診，致使激素使用不當(dāng)，療效不理想，還會造成奶牛激素調(diào)節(jié)紊亂或過敏反應(yīng)，激素在奶中殘留，可危害人類的健康[7]。中藥具有副作用少和藥物殘留少的特點，現(xiàn)代研究證明，中獸藥對卵巢性不孕癥有較好的治療效果。根據(jù)中獸醫(yī)學(xué)辨證論治的原則和奶牛卵巢靜止和持久黃體的病理特點，以補肝益腎，壯陽催情為治法，研制出了中獸藥藿芪灌注液，考察其臨床效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗藥物 藿芪灌注液由北京中農(nóng)勁騰生物技術(shù)有限公司提供的中試產(chǎn)品，批號20121002;對照藥物：促孕灌注液，北京中農(nóng)勁騰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號20120803。

1.1.2 試驗用動物 試驗?zāi)膛碜栽诟拭C省荷斯坦奶牛繁育中心、蘭州市城關(guān)奶牛場和蘭州市秦王川奶牛場自然發(fā)病牛，符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的患卵巢靜止和持久黃體的病牛80頭，其中卵巢靜止病牛40頭，持久黃體病牛40頭。收治的80頭患卵巢靜止和持久黃體的奶牛，經(jīng)臨床檢查，心跳、呼吸基本正常，營養(yǎng)狀況中等。在卵巢靜止的40頭奶牛中，年齡為3歲～8歲；頭胎經(jīng)產(chǎn)奶牛5頭，2胎～4胎經(jīng)產(chǎn)奶牛18頭；5胎以上經(jīng)產(chǎn)奶牛17頭。在持久黃體奶牛中，年齡為3歲～10歲；頭胎經(jīng)產(chǎn)奶牛2頭，2胎～4胎經(jīng)產(chǎn)奶牛20頭；5胎以上經(jīng)產(chǎn)奶牛18頭。

1.2 方法

1.2.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1.1 卵巢靜止病例的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn) 奶牛長時間不發(fā)情或產(chǎn)后3個月以上未發(fā)情。直腸檢查卵巢大小和質(zhì)地正常，表面光滑，卵巢上沒有黃體也沒有卵泡；當(dāng)發(fā)生卵巢萎縮或硬化時，卵巢體積縮小，表面光滑、堅實。間隔7 d～10 d，連續(xù)3次直腸檢查卵巢一直無變化[8]。

1.2.1.2 卵巢靜止病例納入標(biāo)準(zhǔn) 奶牛曾經(jīng)有過正常的妊娠、分娩史，并且符合奶牛卵巢靜止的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.1.3 卵巢靜止病例的排除標(biāo)準(zhǔn) 凡是奶?；加衅渌膊?，或者曾用激素治療的病牛均應(yīng)排除在試驗之外。

1.2.1.4 持久黃體的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn) 母牛發(fā)情周期停止循環(huán)，長時間不發(fā)情。直腸檢查，一側(cè)或兩側(cè)卵巢增大，卵巢表面上有突出的黃體，質(zhì)地較卵巢實質(zhì)硬。間隔7 d，連續(xù)3次直腸檢查，在卵巢的同一部位觸摸到的黃體大小、形狀及硬度均無變化[8]。

1.2.1.5 持久黃體病例納入標(biāo)準(zhǔn) 奶牛曾經(jīng)有過正常的妊娠、分娩史,并且符合奶牛持久黃體的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.1.6 持久黃體病例的排除標(biāo)準(zhǔn) 凡是奶牛并發(fā)其他疾病，或者曾用激素治療的病牛均應(yīng)排除在試驗之外。

1.2.2 動物分組 將臨床確診為患卵巢靜止病牛共計40頭，隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組和對照組，每組10頭。將患持久黃體病牛40頭，隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組和對照組，每組10頭。

1.2.3 給藥方法 用1 mL/L新潔爾滅溶液浸泡消毒輸精槍，并將患牛外陰部清洗消毒，以直腸把握法用輸精槍將藥液送入子宮內(nèi)。其中高、中、低劑量組每次每頭牛子宮灌注藿芪灌注液的劑量分別為150、100、50 mL，對照組每次每頭牛子宮灌注促孕灌注液30 mL，隔日1次，4次為一個療程。

1.2.4 療效評定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.4.1 卵巢靜止的療效判定標(biāo)準(zhǔn) ①治愈：治療期間或治療后14 d內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情，出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)，卵泡發(fā)育正常，可以配種。②顯效:治療期間或治療后14 d內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情，卵巢的性狀有了改善(大小、質(zhì)地)，但卵泡發(fā)育不良，不宜輸精。③有效：治療后14 d仍然未發(fā)情，但卵巢的性狀有了改善(大小、質(zhì)地)。④無效:治療后14 d仍然未發(fā)情，卵巢也沒有變化。

1.2.4.2 持久黃體的療效判定標(biāo)準(zhǔn) ①治愈:治療期間或治療后14 d內(nèi)恢復(fù)發(fā)情，直腸檢查卵巢上黃體消失，卵泡發(fā)育正常，可以配種。②顯效:治療期間或治療后14 d內(nèi)恢復(fù)發(fā)情，直腸檢查黃體消失，但卵泡發(fā)育不良，不宜輸精。③有效：治療后14 d仍然未發(fā)情，但直腸檢查卵巢的黃體消失、或變小、或減少。④無效:治療后14 d仍然未發(fā)情，直腸檢查黃體也沒變化。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 使用SPSS 17.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，組間數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 藿芪灌注液對奶牛持久黃體臨床治療效果

不同劑量藿芪灌注液治療奶牛持久黃體的效果見表1。結(jié)果高劑量組和中劑量組治愈率分別為80%和70%，總有效率都為90%，而低劑量組治愈率為50%，總有效率達60%；對照組治愈率達80%，總有效率達90%。高劑量組、中劑量組和對照組的治愈率和總有效率均顯著高于低劑量組(P<0.05)。

表1 不同劑量藿芪灌注液治療奶牛持久黃體的效果

Table 1 The effect of different doses of Huoqi perfusion liquid in the treatment of cow persistent corpus luteum

組別Groups病例數(shù)/頭Casenumber治愈Cure顯效Excellent有效Valid無效Invalid頭數(shù)Number治愈率/%Curerate頭數(shù)Number顯效率/%Explicitefficiency頭數(shù)Number有效率/%Curerate頭數(shù)Number無效率/%Inefficiency總有效率/%Totaleffectiverate高劑量組High10880a1100011090a中劑量組Middle10770a11011011090a低劑量組Low10550b1011044060b對照組Control10880a0011011090a

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note:In the same column,data with different letters indicate significant difference(P<0.05).

2.2 藿芪灌注液對奶牛卵巢靜止臨床治療效果

不同劑量藿芪灌注液治療奶牛卵巢靜止的效果見表2。結(jié)果高劑量組和中劑量組治愈率分別為90%和80%，總有效率都為100%，而低劑量組治愈率達60%，總有效率達70%；對照組治愈率達80%，總有效率達90%。高劑量組、中劑量組和對照組的治愈率和總有效率均顯著高于低劑量組(P<0.05)?？梢?，藿芪灌注液治療奶牛卵巢靜止和持久黃體，高劑量組和中劑量組治愈率和總有效率都顯著高于低劑量組(P<0.05)，但與對照組無顯著差異(P>0.05)。雖然高劑量組治愈率略高于中劑量組，而有效率相同，考慮到治療成本，臨床用藥應(yīng)以中劑量為好。

表2 不同劑量藿芪灌注液治療奶牛卵巢靜止的效果

Table 2 The effect of different doses of Huoqi perfusion liquid in the treatment of cow ovarian quiescence

組別Group病例數(shù)/頭Casenumber治愈Cure顯效Excellent有效Valid無效Invalid頭數(shù)Number治愈率/%Curerate頭數(shù)Number顯效率/%Explicitefficiency頭數(shù)Number有效率/%Curerate頭數(shù)Number無效率/%Inefficiency總有效率/%Totaleffectiverate高劑量組High10990a0011000100a中劑量組Middle10880a11011000100a低劑量組Low10660b1100033070b對照組Control10880a0011011090a

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note:In the same column,data with different letters indicate significant difference(P<0.05).

3 討論

中獸醫(yī)學(xué)認為卵巢疾病性不孕，大多屬氣滯血瘀或腎氣虛，腎陽虛癥。卵巢靜止和卵巢萎縮多為腎陽不足、氣血雙虛引起，持久黃體、卵巢囊腫多為沖任不調(diào)之氣血瘀滯所致。因此，選擇了具有壯陽補腎、興奮性機能的陽起石、淫羊藿、菟絲子，補血調(diào)經(jīng)、活血祛瘀的當(dāng)歸、益母草等，還選用了補氣、扶正的黃芪，以扶正固本，從而達到陰平陽秘，進而調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌機能，促進卵巢機能恢復(fù)，提高受胎率。本試驗結(jié)果表明藿芪灌注液高劑量組和中劑量組對持久黃體有良好的療效其臨床治愈率分別為80%和70%，總有效率均為90%。高劑量組和中劑量組對卵巢靜止的治愈率分別為90%和80%，總有效率均為100%。

現(xiàn)代研究表明，淫羊藿的有效成分具有擬雌激素樣作用，可以上調(diào)激素受體的表達，增加基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的表達，減少睪丸損傷，有補腎的作用。淫羊藿能增強下丘腦-垂體-性腺軸及腎上腺皮質(zhì)軸、胸腺軸等內(nèi)分泌系統(tǒng)的分泌功能[9-10]。陽起石常在臨床中用來治療男性陽痿遺精，女性宮冷不孕，其壯陽作用可能與其富含微量元素有關(guān)[11]。菟絲子具有雌激素樣作用，水提物給小鼠灌服，可促進陰道上皮細胞角化，使子宮重量增加，菟絲子的黃酮類提取物可使成年大鼠腺垂體、卵巢、子宮重量增加，具有壯陽作用，故為君藥[12]。黃芪對體液免疫、細胞免疫均有促進作用，而且具有類似激素樣作用。當(dāng)歸為婦科要藥，具有補血活血、潤腸通便的作用，當(dāng)歸水煎劑能興奮未孕小鼠離體子宮，作用與H1受體有關(guān)而與M受體、α受體及前列腺素合成酶無關(guān)[13]。益母草多種制劑對多種動物在體子宮均有直接興奮作用，可使子宮收縮頻率、幅度及張力增加。益母草水提取物、水煎醇提物、醇提物均能增加大鼠離體子宮的張力、強度、頻率和子宮活動力。益母草還能引起小鼠陰道上皮增生、角化，使成年去卵巢小鼠的子宮內(nèi)膜出現(xiàn)不同程度的增生[14]。我們研究發(fā)現(xiàn)該藥能顯著促進小鼠子宮發(fā)育，并增強雌激素水平及其受體基因表達，而對孕激素水平及其受體基因表達無顯著影響[15]。因此，藿芪灌注液可能是:①通過對下丘腦-垂體-性腺軸的作用，提高垂體對黃體生成釋放激素的反應(yīng)性及卵巢黃體生成素的反應(yīng)性，促進發(fā)情。②通過改善子宮-卵巢的局部微循環(huán)，降低局部的炎癥反應(yīng)。③雌激素樣的作用，促進子宮內(nèi)膜組織增生和陰道角化上皮細胞生成，促進卵巢功能恢復(fù)。

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Clinical Trials on Huoqi Perfusate Treatment of Cow Inactive Ovary and Persistent Corpus Luteum

YAN Bao-qi1，WANG Dong-sheng1，ZHANG Shi-dong1，DONG Shu-wei1， MIAO Xiao-lou1，NA Li-dong1,2，ZHU Xin-rong2，HAN Ji-qing3，WANG Xue-li4，YAN Zuo-ting1

(1.LanzhouInstituteofAnimalHusbandryandPharmaceuticalSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou，Gansu,730050，China；2.GansuHolsteinCowBreedingCenter，Honggu,Gansu,730080，China；3.CowTestFieldinQinWangchuanofGansuProvince，Yongdeng，Gansu,730000，China；4.ChengguanCowFarm，Lanzhou,Gansu,73030，China)

Forty sick cows with persistent corpus luteum and ovarian quiescence were divided into four groups, and respectively treated with high, medium (recommended dose), low dose of Huoqi perfusate, and control group treated with promote pregnancy perfusion fluid (n = 10). The cow uteri in experimental groups were perfused with 150 mL, 100 mL and 50 mL, one times every two days, four times for 1 course, and in control treatment group with promoting pregnancy perfusion fluid, 100mL each time, one times every two days, four times for 1 course. The results showed that the cure rates of cow persistent corpus luteum with high, medium and low dose Huoqi perfusion liquid respectively was 80%, 70% and 50%. The total effective rates were 90%, 90% and 60%. In the control group, the cure rate was 80%, and the total effective rate was 90%. The cure rates and total effective rates of high, medium dose groups and control group were significantly higher than that of low dose groups (P<0.05), and there were no significant difference between high dose and middle dose group (P>0.05), also high and medium dose group with Huoqi perfusion fluid and drug control group were no significant difference (P>0.05). When high, middle, low dose Huoqi perfusion liquids were used go treat dairy cows with ovarian rest, the cure rates respectively were 90%, 80% and 60%, and the total efficiency rates were 100%, 100% and 70%. In the control group, the cure rate was 80%, the total efficiency rate was 90%. The cure rates and total effective rates of high, medium dose groups and control group were significantly higher than that of low dose group (P<0.05), and there were no significant difference between high dose and middle dose group (P>0.05), also high and medium dose group with Huoqi perfusion fluid and drug control group were no significant difference (P>0.05).

cow; persistent corpus luteum; ovarian rest; therapeutic effect

2016-04-20

“十二五”國家科技支撐計劃重點課題(2012BAD12B03)；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項目；中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金項目(1610322015003)

閆寶琪(1991-)，女，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)臨床工作。 *通訊作者

S853.51

B

1007-5038(2016)12-0122-04