常用消毒劑對(duì)不同材料表面克羅諾桿菌的影響

牛婕婷，潘瑞麗，周彥宏，婁彬彬，姜霞，趙思雨，費(fèi)鵬，滿(mǎn)朝新，姜毓君

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)a.食品學(xué)院乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.國(guó)家乳業(yè)工程技術(shù)研究中心，哈爾濱150030)

常用消毒劑對(duì)不同材料表面克羅諾桿菌的影響

牛婕婷a，潘瑞麗a，周彥宏a，婁彬彬a，姜霞a，趙思雨a，費(fèi)鵬a，滿(mǎn)朝新b，姜毓君ab

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)a.食品學(xué)院乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.國(guó)家乳業(yè)工程技術(shù)研究中心，哈爾濱150030)

以5株分離自嬰兒配方乳粉及其加工環(huán)境中的克羅諾桿菌為研究對(duì)象，研究常用消毒劑對(duì)不銹鋼、聚四氟乙烯和玻璃這3種材料表面克羅諾桿菌的影響。結(jié)果表明：當(dāng)3種消毒劑處于一定濃度時(shí)，不銹鋼表面殘存活菌數(shù)量明顯多于玻璃表面殘存活菌數(shù)量且存在顯著性差異。當(dāng)過(guò)氧乙酸和過(guò)氧化氫的質(zhì)量濃度為分別為3 g/L和35 g/L，二氧化氯為3 g/L時(shí)，在3種料上均未檢測(cè)出克羅諾桿菌。本研究為嬰兒配方乳粉生產(chǎn)及儲(chǔ)存過(guò)程中克羅諾桿菌的防控提供理論依據(jù)，有助于選擇合適材質(zhì)減少克羅諾桿菌對(duì)嬰兒配方乳粉污染的可能。

克羅諾桿菌；不銹鋼；聚四氟乙烯；玻璃；消毒劑

0 引言

克羅諾桿菌(Cronobacter)原名阪崎腸桿菌(Entero?bacter sakazakii)[1-2]，是嬰兒配方乳粉(powdered infant formula，PIF)中的A類(lèi)致病菌[3-5]，能夠通過(guò)污染PIF造成新生兒感染[6-8]，致死率高達(dá)40%～80%[9-11]。目前已有消毒劑對(duì)克羅諾桿菌菌懸液的抑菌效果的相關(guān)報(bào)道[12-13]，同時(shí)一些研究者發(fā)現(xiàn)克羅諾桿菌粘附在不同材料會(huì)導(dǎo)致殺菌效果的差異，但是關(guān)于不同材料對(duì)消毒劑抑菌效果影響的研究并不全面。本實(shí)驗(yàn)選取分離自加工環(huán)境和成品的5株克羅諾桿菌，選取乳粉加工環(huán)境中常見(jiàn)的三種接觸材料不銹鋼、玻璃、聚四氟乙烯[14]，以及常用消毒劑過(guò)氧乙酸、二氧化氯、過(guò)氧化氫，來(lái)研究不同材料表面對(duì)克羅諾桿菌消毒作用的影響，對(duì)于更好的控制和消除克羅諾桿菌的污染、指導(dǎo)嬰兒配方乳粉的生產(chǎn)具有重要的意義。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1菌株

本實(shí)驗(yàn)所用5株克羅諾桿菌分離自不同地區(qū)的嬰幼兒配方粉生產(chǎn)企業(yè)加工環(huán)境和嬰幼兒配方粉樣品。詳細(xì)信息如表1所示。

1.2表面試驗(yàn)材料

不銹鋼片(SUS 304，2 cm×2 cm)，玻璃片(2 cm× 2 cm)，聚四氟乙烯片(2 cm×2 cm)。

1.3儀器與設(shè)備

生物超凈工作臺(tái)，離心機(jī)，pH計(jì)，恒溫培養(yǎng)箱，滅菌鍋，超聲清洗儀，振蕩器，電子天平。

表1 實(shí)驗(yàn)用菌株及其來(lái)源

1.4主要試劑

胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)，胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)，甘油，DE中和培養(yǎng)基，吐溫-80，食品級(jí)過(guò)氧化氫消毒劑、食品級(jí)二氧化氯消毒劑、食品級(jí)過(guò)氧乙酸消毒劑，NaCl，KCl，Na2HPO4，KH2PO4，CaCO3。

1.5方法

1.5.1 克羅諾桿菌的菌懸液制備

取出-20℃甘油保存的含有克羅諾桿菌的凍存管，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的接種量接于TSB液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)12 h進(jìn)行活化，將活化后的菌株在TSA固體培養(yǎng)基上進(jìn)行三區(qū)劃線(xiàn)，37℃培養(yǎng)24 h后挑取單菌落，置于10 mL液體TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行純培養(yǎng)，在轉(zhuǎn)速為4 000 r/min，15 min離心得菌沉淀，將菌沉淀重懸于用PBS溶液中進(jìn)行洗滌兩次，最后用PBS溶液進(jìn)行稀釋?zhuān){(diào)整初始菌液濃度最終達(dá)到每片8.0（對(duì)數(shù)值）。

1.5.2 染菌材料的制備

材料的清洗和滅菌:將不銹鋼片和玻璃片用15%磷酸溶液超聲20 min,用蒸餾水洗凈，清洗后的不銹鋼和玻璃片，待干燥后，放入玻璃平皿中，然后將玻璃平皿放入烘箱170℃，3 h進(jìn)行干熱滅菌待用，將聚四氟乙烯片放入體積分?jǐn)?shù)為75%酒精中浸泡12 h待用。

材料表面接種：分別取100 μL菌懸液滴加到3種不同材料表面上，在生物安全柜中在室溫下，干燥2 h。

1.5.3 消毒劑的稀釋和中和劑的配置

（1）消毒劑的稀釋

將食品級(jí)過(guò)氧乙酸消毒劑(質(zhì)量濃度為160 g/L)使用滅菌的硬質(zhì)水（0.4 g，1 L蒸餾水）稀釋到質(zhì)量濃度分別為1，1.5，2，2.5，3 g/L。

將食品級(jí)二氧化氯消毒劑使用無(wú)菌的硬質(zhì)水稀釋到0.5，1，1.5，2，2.5，3 g/L。

將食品級(jí)過(guò)氧化氫消毒劑(質(zhì)量濃度350 g/L)使用滅菌的硬質(zhì)水稀釋成質(zhì)量濃度為10，15，20，25，30，35 g/L。

（2）中和劑的配置

取34 g DE中和培養(yǎng)基，5 g吐溫80溶解于1 L蒸餾水中[15]，分裝到50 mL的離心管中，121℃，15 min滅菌，待用。

1.5.4 消毒液對(duì)3種染菌材料的殺菌實(shí)驗(yàn)

取200 μL的不同稀釋濃度的消毒劑分別滴加到材料表面的接種點(diǎn)上的，完全覆蓋之前的干燥菌液，處理10 min，作用完馬上將處理的材料放入已滅菌的含有10 mL的DE中和肉湯培養(yǎng)基和3 g玻璃珠（直徑0.5 mm）50 mL的離心管中，立即終止作用，中和作用5 min后以最大轉(zhuǎn)速離心1 min進(jìn)行徹底洗脫。將洗脫液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)?00 μL的混合液均勻涂布于TSA固體培養(yǎng)基上，37℃倒置培養(yǎng)48 h，培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)是為了使未致死的細(xì)胞能完全恢復(fù)，最后觀察克羅諾桿菌的生長(zhǎng)情況，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果以每片的對(duì)數(shù)值表示，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。無(wú)菌硬質(zhì)水滴加到接種點(diǎn)，處理相同時(shí)間作為空白對(duì)照。

1.6統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS公司(SPSS inc.)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS v17.0將數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1過(guò)氧乙酸對(duì)不同材料表面克羅諾桿菌殺菌作用試驗(yàn)

通過(guò)梯度稀釋平板計(jì)數(shù)的方法，對(duì)5株克羅諾桿菌在不同材料表面用過(guò)氧乙酸消毒劑處理后的情況進(jìn)行差異性分析，結(jié)果如表1所示。5株菌當(dāng)用過(guò)氧乙酸質(zhì)量濃度為3 g/L處理后時(shí)，均未檢測(cè)出克羅諾桿菌?？肆_諾桿菌ES3在過(guò)氧乙酸質(zhì)量濃度為1 g/L和2.5 g/L時(shí)，在不銹鋼片，聚四氟乙烯片，玻璃片三種材料表面上沒(méi)有呈現(xiàn)出明顯的差異；而當(dāng)過(guò)氧乙酸質(zhì)量濃度為1.5 g/L和2 g/L時(shí)，在不銹鋼片和玻璃片上存在明顯差異(P<0.05)?？肆_諾桿菌ES35在過(guò)氧乙酸質(zhì)量濃度為1，1.5，2 g/L時(shí)，在不銹鋼片上和聚四氟乙烯片上未出現(xiàn)明顯差異，而這兩種材料均與玻璃片之間呈現(xiàn)出明顯差異（P<0.05），在過(guò)氧乙酸質(zhì)量濃度達(dá)到2.5 g/L時(shí)，不銹鋼片和聚四氟乙烯片出現(xiàn)了顯著性差異（P<0.05），而聚四氟乙烯與玻璃片卻未出現(xiàn)明顯差異?？肆_諾桿菌ES45和ES46質(zhì)量濃度均在1，1.5，2，2.5 g/L時(shí)，在不銹鋼和玻璃片上存在顯著性差異。ES52在質(zhì)量濃度為1.5 g/L和2 g/L時(shí)，在不銹鋼和玻璃片上存在顯著性差異。因此可以判定，5株菌當(dāng)用過(guò)氧乙酸處于中間質(zhì)量濃度1.5 g/L和2 g/L處理后，在不銹鋼片上和玻璃片上均存在顯著性的差異（P< 0.05），不銹鋼片上的菌存活量較玻璃片上存活的菌多。

表1 過(guò)氧乙酸對(duì)不同材料表面克羅諾桿菌殺菌作用

表2 二氧化氯對(duì)不同材料表面克羅諾桿菌殺菌作用

2.2二氧化氯對(duì)克羅諾桿菌殺菌作用

5株克羅諾桿菌在不同材料表面進(jìn)行二氧化氯消毒劑的處理試驗(yàn)的差異性分析結(jié)果如表2所示。5株菌在二氧化氯濃度為3 g/L處理時(shí)，在3種材料上均未檢測(cè)出有菌。5株菌在二氧化氯濃度為1.5 g/L時(shí)，在不銹鋼片，聚四氟乙烯片，玻璃片三者之間均呈現(xiàn)出顯著性差異（P<0.05）。5株菌在二氧化氯濃度為0.5，1，1.5，2.5g/L時(shí)，不銹鋼和玻璃片兩者之間呈現(xiàn)出顯著性差異（P<0.05）。總體來(lái)說(shuō)，在二氧化氯的濃度處于中低濃度時(shí)，在不銹鋼和玻璃片之間呈現(xiàn)出顯著性差異（P<0.05），不銹鋼片上的菌存活量較玻璃片上存活的菌多。

2.3過(guò)氧化氫對(duì)克羅諾桿菌殺菌作用

5株克羅諾桿菌在不同材料表面進(jìn)行過(guò)氧化氫消毒劑的處理試驗(yàn)的差異性分析如表3所示。5株菌當(dāng)用過(guò)氧化氫質(zhì)量濃度為35 g/L處理后，在三種材料上均未檢測(cè)出有菌。5株菌在用過(guò)氧化氫質(zhì)量濃度小于30 g/L處理后，在不銹鋼片和玻璃片上都存在顯著性差異（P<0.05）。由此可以推斷，當(dāng)用過(guò)氧化氫消毒劑處理時(shí)，在不銹鋼和玻璃片間存在顯著性差異（P< 0.05），而這種差異主要表現(xiàn)在過(guò)氧化氫處于中低質(zhì)量濃度時(shí)。

表3 過(guò)氧化氫對(duì)不同材料表面克羅諾桿菌殺菌作用

通過(guò)以上3種消毒劑對(duì)不銹鋼、聚四氟乙烯和玻璃表面克羅諾桿菌殺菌作用的試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，當(dāng)3種消毒劑處于一定濃度時(shí)，不銹鋼表面殘存活菌數(shù)量明顯多于玻璃表面殘存活菌數(shù)量，這一結(jié)果與張娜[14]等人的研究結(jié)果相一致。不銹鋼和玻璃片之間的顯著性差異可能是由于不銹鋼片表面粗糙，具有明顯的溝壑結(jié)構(gòu)，在用消毒劑處理時(shí)，更有利于菌的存活。而玻璃片表面較光滑所以活菌數(shù)較少。因此,由本研究可推斷出，材料表面的粗糙度是影響消毒劑對(duì)表面殺菌效果的重要因素之一。

3 結(jié)論

通過(guò)3種化學(xué)消毒劑過(guò)氧乙酸、二氧化氯、過(guò)氧化氫對(duì)在不銹鋼片、聚四氟乙烯片、玻璃片上的克羅諾桿菌進(jìn)行殺菌處理，結(jié)果表明，當(dāng)過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫的質(zhì)量濃度分別為3 g/L和35 g/L，二氧化氯為3 g/L時(shí)，在3種材料上均未檢測(cè)出克羅諾桿菌。且當(dāng)3種消毒劑濃度處于中間濃度時(shí)，不銹鋼表面殘存活菌數(shù)量明顯多于玻璃表面殘存活菌數(shù)量，存在顯著性差異。

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《中國(guó)乳品工業(yè)》雜志摘要寫(xiě)作要求

1摘要寫(xiě)作要求

按報(bào)道性摘要書(shū)寫(xiě)，字?jǐn)?shù)300字左右，以提供文章內(nèi)容梗概為目的，不加評(píng)論及補(bǔ)充解釋?zhuān)袘?yīng)包括研究目的、方法及過(guò)程、結(jié)果與結(jié)論、創(chuàng)新性和創(chuàng)新點(diǎn)。中英文摘要內(nèi)容應(yīng)一致。

2摘要寫(xiě)作注意事項(xiàng)

2.1 著重反映新內(nèi)容和特別強(qiáng)調(diào)的觀點(diǎn)。

2.2 排除在本學(xué)科領(lǐng)域已成常識(shí)的內(nèi)容。

2.3 不得簡(jiǎn)單地重復(fù)題名中已有的信息。

2.4 書(shū)寫(xiě)要合乎語(yǔ)法、保持上下文的邏輯關(guān)系。

2.5 結(jié)構(gòu)要嚴(yán)謹(jǐn)，表達(dá)要簡(jiǎn)明，語(yǔ)義要確切，不分段落。

2.6 用第三人稱(chēng)的寫(xiě)法。應(yīng)采用“對(duì)……進(jìn)行了研究”、“報(bào)告了……現(xiàn)狀”、“進(jìn)行了……調(diào)查”等記述方法，不要使用“本文”、“作者”等為主語(yǔ)。

2.7 采用規(guī)范化的名詞術(shù)語(yǔ)（包括地方、機(jī)構(gòu)名和人名）。

2.8 縮略語(yǔ)、略稱(chēng)、代號(hào)，除了相鄰專(zhuān)業(yè)的讀者也能清楚理解的以外，在首次出現(xiàn)處必須加以說(shuō)明。

3英文摘要寫(xiě)作注意事項(xiàng)

3.1 避免在摘要的第一句重復(fù)使用題目或題目的一部分。

3.2 用簡(jiǎn)潔、明確的語(yǔ)言（一般不超過(guò)150個(gè)單詞），盡量用短句并避免句型單調(diào)。

3.3 描述作者的工作一般用過(guò)去時(shí)態(tài)，陳述由這些工作所得的結(jié)論時(shí)用現(xiàn)在時(shí)態(tài)。

3.4 盡量用主動(dòng)語(yǔ)態(tài)代替被動(dòng)語(yǔ)態(tài)。

3.5 盡量用語(yǔ)義清楚并為人熟知的詞匯，對(duì)于大眾熟知的縮寫(xiě)語(yǔ)可直接使用。

Effects of common disinfectants on the survival of Cronobacter spp.on the surfac?es of different materials

NIU Jie-tinga,PAN Rui-lia,ZHOU Yan-honga,LOU Bin-bina,JIANG Xiaa,ZHAO Si-yua,FEI Penga, MAN Chao-xinb,JIANG Yu-juna,b
(Northeast Agricultural University a.Key Lab of Dairy Science,Ministry of Education,College of Food Science；b.Na?tional Research Center of Dairy Engineering and Technology，Harbin 150030，China)

5 strains of Cronobacter isolated from PIF and production processing were as the research object in this study.The research was car?ried out to study the effects of common disinfectants on the survival of Cronobacter spp.on the surfaces of stainlesssteel,teflon and glass.The results showed that:when the concentration of the disinfectants in the middle,the log CFU/coupon of Cronobacter on stainless steel surface was more than that on glass surface,there was a significant difference.When the w/v of peracetic acid,chlorine dioxide,hydrogen peroxide was 0.3%,3 000 ppm and 3.5%,respectively,Cronobacter spp.were not detected on the material surfaces.This study provided theoretical basis for the prevention and control,did contribute to select suitable materials to reduce the contamination of Cronobacter in powdered infant for?mula.

Cronobacter；stainless steel；teflon；glass；disinfectants

TS252.1

A

1001-2230（2016）09-0012-04

2016-01-07

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2013BAD18B11）；黑龍江省杰出青年基金項(xiàng)目（JC201415）；黑龍江省科研機(jī)構(gòu)創(chuàng)新能力提升專(zhuān)項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目（YC13D005）。

牛婕婷（1989-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。

姜毓君