allo-HSCT受者細(xì)胞因子基因多態(tài)性與急性移植物抗宿主病的關(guān)系①

金雪峰 葉冬梅 藍(lán) 梅 陳 英

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，南寧530021)

allo-HSCT受者細(xì)胞因子基因多態(tài)性與急性移植物抗宿主病的關(guān)系①

金雪峰 葉冬梅 藍(lán) 梅 陳 英

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，南寧530021)

目的：探討在異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、干擾素γ(IFN-γ)等多種疾病相關(guān)細(xì)胞因子基因多態(tài)性與急性移植物抗宿主病(aGVHD)的相互關(guān)系。方法：選取2014年1月至2015年12月進(jìn)行allo-HSCT的受者32例及正常人群36例作為研究對(duì)象，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)聯(lián)合基因測(cè)序?qū)δ康幕蛱厥釹NP位點(diǎn)基因分型進(jìn)行檢測(cè)，觀察受者術(shù)后出現(xiàn)aGVHD的不同情況，分析細(xì)胞因子基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT預(yù)后的影響，探討疾病相關(guān)細(xì)胞因子特殊SNP點(diǎn)突變與aGVHD發(fā)病嚴(yán)重程度的潛在相關(guān)性。結(jié)果：在全部allo-HSCT受者中，TNF-α-308(G/A)、IL-6-174(G/C)、IL-10-1082(A/G)、TGF-β1+915(G/C)、IFN-γ+874(T/A)等細(xì)胞因子的基因多態(tài)性分布與重度aGVHD的發(fā)生率未見有顯著性的差異(P>0.05)。在TGF-β1+869SNP位點(diǎn)上，C/T型allo-HSCT患者中重度aGVHD發(fā)病率顯著高于C/C、T/T兩個(gè)基因型患者組(P<0.01)。結(jié)論：在allo-HSCT患者中TGF-β1+869(C/T)基因多態(tài)性與aGVHD發(fā)病的嚴(yán)重程度具有密切聯(lián)系。C/T型allo-HSCT患者更容易發(fā)生重度aGVHD，是誘發(fā)嚴(yán)重aGVHD出現(xiàn)的潛在危險(xiǎn)因素。因此，在allo-HSCT患者中針對(duì)TGF-β1+869(C/T)進(jìn)行基因多態(tài)性檢測(cè)，制定合理的aGVHD預(yù)防方案，可能有助于減少減輕aGVHD的發(fā)生。

異基因造血干細(xì)胞移植；細(xì)胞因子；基因多態(tài)性；急性移植物抗宿主病；個(gè)體化給藥

異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)是血液系統(tǒng)惡性疾病有效乃至唯一根治的手段，同時(shí)也是部分惡性腫瘤、遺傳性疾病和自體免疫性疾病的有效治療手段。急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease，aGVHD)作為allo-HSCT最常見的嚴(yán)重并發(fā)癥,嚴(yán)重影響干細(xì)胞移植的預(yù)后[1,2]。

在aGVHD的發(fā)生機(jī)制中，“細(xì)胞因子風(fēng)暴”學(xué)說占據(jù)重要地位，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究提示異基因造血干細(xì)胞移植供者和受者中多種細(xì)胞因子基因的單核苷酸多態(tài)性與aGVHD的發(fā)生可能具有潛在的聯(lián)系。這些細(xì)胞因子的合成及分泌水平受遺傳基因所調(diào)控，具有個(gè)體差異。其主要原因在于細(xì)胞因子基因調(diào)節(jié)區(qū)或啟動(dòng)區(qū)的多態(tài)性。因此，移植前檢測(cè)受者的細(xì)胞因子基因多態(tài)性有助于指導(dǎo)合理制定免疫抑制方案。其中，腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白細(xì)胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、白細(xì)胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、干擾素γ(Interferon-γ,IFN-γ)基因多態(tài)性被認(rèn)為與GVHD密切相關(guān)[3-7]。上述基因的不同分型可能與aGVHD的發(fā)生程度及預(yù)防藥物的代謝情況存在相互關(guān)系，但該方面尚未見相關(guān)研究報(bào)道。

本文旨在通過檢測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植受者TNF-α、IL-10、IL-6、TGF-β1、IFN-γ的基因多態(tài)性，分析其與aGVHD存在的潛在聯(lián)系，為根據(jù)疾病相關(guān)細(xì)胞因子基因分型確定合理免疫用藥方案，提高異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后移植物存活率及血液系統(tǒng)惡性疾病患者療效提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 選取2014年1月至2015年12月間進(jìn)行allo-HSCT患者32例作為研究對(duì)象，其中女性患者10例，男性患者22例。36例正常人群中包括女性13例及男性23例。allo-HSCT患者篩選標(biāo)準(zhǔn)為供、受者人類白細(xì)胞抗原(HLA)配型均完全相合，所有受者采用的移植預(yù)處理方案及預(yù)防GVHD藥物一致，輸注有核細(xì)胞數(shù)量及原發(fā)病等比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。受者均無感染、輸注供者白細(xì)胞，配型不合等誘因，均未進(jìn)行骨髓去T細(xì)胞處理。

1.1.2 試劑和實(shí)驗(yàn)儀器 Golden Easy PCR System[KT221-02，天根生化科技(北京)有限公司]；pBR322 DNA/Mspl Marker[MD206，天根生化科技(北京)有限公司]；血液基因組DNA提取試劑盒(TIANamp Blood DNA Kit)[DP318-02，天根生化科技(北京)有限公司]；凝膠核酸染料 GelRed Nucleic Acid Stain,10000Xin water 0.5 ml(13G0307，美國(guó)Biotium公司)。PowerPac基礎(chǔ)電泳儀(Bio-Rad laboratory)；S100梯度PCR儀 (美國(guó))；Genegenius凝膠成像系統(tǒng)(南寧友寧科技有限公司)

1.2 方法

1.2.1 預(yù)處理及預(yù)防GVHD方案

1.2.1.1 預(yù)處理方案 32例患者均采用改良的BuCy方案 羥基脲40 mg/kg口服，1次/10 h，共2次(術(shù)前10 d)；阿糖胞苷(Ara-C)1～2 g/m2靜脈滴注(術(shù)前9 d)；白消安1 mg/kg口服，1次/6 h(術(shù)前8、7、6 d)；環(huán)磷酰胺(CTX)1.8 g/m2靜脈滴注(術(shù)前5、4 d)，司莫司汀(Me-CCNu)250 mg/m2口服(術(shù)前3 d)。

1.2.1.2 預(yù)防GVHD方案 所有患者均采用甲氨蝶呤(MTX)+ CsA方案預(yù)防GVHD?；颊哂谝浦睬? d開始靜脈滴注CsA，劑量為3 mg/(kg·d)，持續(xù)24 h靜滴。待消化道癥狀消失后改為口服(約30 d)，按6 mg/(kg·d)。

1.2.1.3 aGVHD分級(jí) aGVHD的嚴(yán)重度分級(jí)是以器官受累類型和臨床征象確定的。本文分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)采用西雅圖Glucksberg[8]分級(jí)系統(tǒng)，其程度分成輕度(0～Ⅰ度)和重度(Ⅱ～Ⅳ度)。

1.2.2 基因型檢測(cè)

1.2.2.1 血樣采集及DNA提取 對(duì)allo-HSCT受者及正常人群外周血進(jìn)行采集，每人取3～5 ml于EDTA抗凝管中，4℃保存。基因組DNA的提取采用TIANGEN公司的離心柱型血液基因組DNA提取試劑盒對(duì)血樣中的基因組DNA進(jìn)行提取。

1.2.2.2 引物設(shè)計(jì) 引物分別參照GenBank中目的基因序列及相關(guān)文獻(xiàn)[9-12]設(shè)計(jì)，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。參考引物序列如表1所示。

1.2.2.3 目的基因 PCR擴(kuò)增反應(yīng) ①PCR反應(yīng)體系：DNA樣本 17 μl，上游引物2 μl，下游引物2 μl，Golden DNA polymerase 4 μl，2×Reaction Mix 21 μl，ddH2O 4 μl，進(jìn)行PCR反應(yīng)。各目的基因擴(kuò)增程序見表2。②PCR擴(kuò)增程序。

1.2.2.4 瓊脂糖凝膠電泳成像確定擴(kuò)增基因片段長(zhǎng)度 取制好的瓊脂糖凝膠浸入電泳液(0.5×TBE)中，以DNA Marker作為片段分子量的標(biāo)記，依次將各目的基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物6 μl及Marker6 μl加入2%瓊脂糖凝膠中，調(diào)節(jié)電泳電壓100V，進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)。電泳實(shí)驗(yàn)完成后將瓊脂糖凝膠放置于電泳成像儀中，觀察各個(gè)細(xì)胞因子基因的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度(如圖1)。

表1 各細(xì)胞因子的引物序列

Tab.1 Primer sequences of cytokine genes

CytokinegenePrimersequenceSNPTNF?αF：5′?AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT?3′R：5′?TCCTCCCTGCTCCGATTCCG?3′SNP?308IL?6F：5′?TGACTTCAGCTTTACTCTTGT?3′R：5′?CTGATTGGAAACCTTATTAAG?3′SNP?174IL?10F：5′?CTCGCTGCAACCCAACTGGC?3′R：5′?TCTTACCTATCCCTACTTCC?3′SNP?1082TGF?β1F：5′?ATCTAGGTTATTTCCGTGGGATA?3′R：：5′?TTGTGGGTTTCCACCATTAGCA?3′SNP+869，SNP+915IFN?γF：5′?ATCCAAGACAACACTACTAAG?3′R：5′?TTGAGACTCTAATATTGAGAC?3′SNP+874

表2 各細(xì)胞因子基因PCR反應(yīng)條件

Tab.2 PCR reaction conditions of cytokine genes

CytokinegenePre?denaturationDenaturationAnneallingExtensionCyclesFinalextensionTNF?α94℃，3min94℃，30s60℃，15s72℃，1min3072℃，5minIL?695℃，4min95℃，1min57℃，1min72℃，1min3072℃，5minIL?1095℃，3min94℃，30s58℃，1min72℃，1min3072℃，10minTGF?β194℃，3min94℃，30s60℃，1min72℃，1min3072℃，7minIFN?γ94℃，3min94℃，30s58℃，30s72℃，1min3072℃，5min

圖1 各個(gè)目的基因PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖譜Fig.1 Map of agarose gel electrophoresis of polymerase chain reaction amplified products for multiple target genesNote:M.pBR322 DNA/Mspl Marker. Fig.A:1.TNF-α-308 GG genotype;2.TNF-α-308AG genotype. Fig.B:1.IL-6-174 GG genotype;2.IL-6-174 GG genotype. Fig.C:1.IL-10-1082 AA genotype;2.IL-10-1082 AG genotype. Fig.D:1.TGF-β1+869 CC genotype;2.TGF-β1+869 TC genotype;1,2.TGF-β1+915 GG genotype. Fig.E:1,2.IFN-γ+874 TT genotype;3,4.IFN-γ+874 TA genotype.

圖2 各個(gè)細(xì)胞因子目的基因PCR產(chǎn)物測(cè)序圖譜Fig.2 Sequencing map of polymerase chain reaction amplified products for multiple target genesNote:The site which arrow indicates is the mutation site of the target gene.

1.2.2.5 聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物基因測(cè)序檢測(cè)目的基因特殊位點(diǎn)基因多態(tài)性變化 將PCR產(chǎn)物標(biāo)本送英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司進(jìn)行測(cè)序分析。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，與各目的基因SNP位點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)后確定基因分型(如圖2)。

2 結(jié)果

2.1 各細(xì)胞因子目的基因PCR擴(kuò)增結(jié)果 通過瓊脂糖凝膠電泳后對(duì)目的片段進(jìn)行比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段長(zhǎng)度與Genbank中目的基因在引物擴(kuò)增后得到的預(yù)期片段長(zhǎng)度相一致。

2.2 細(xì)胞因子基因多態(tài)性位點(diǎn)測(cè)序圖譜 通過將目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，能夠?qū)Σ煌?xì)胞因子基因特殊SNP位點(diǎn)的基因分型進(jìn)行有效的區(qū)分和鑒別。

2.3 allo-HSCT患者組與正常對(duì)照組的基本資料及各細(xì)胞因子基因型分布頻率比較 患者組女性10例，男性22例，平均年齡(48.3±12.7)歲；對(duì)照組女性13例，男性23例，平均年齡(51.6±14.2)歲?；颊呓M和對(duì)照組在性別及年齡構(gòu)成上未表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TNF-α-308、IL-6-174、IL-10-1082、TGF-β+869、TGF-β+915、IFN-γ+874各細(xì)胞因子特殊SNP位點(diǎn)上的基因型分布情況在allo-HSCT患者組和正常對(duì)照組中無顯著性差異(如表3)。通過將目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，能夠?qū)Σ煌?xì)胞因子基因特殊SNP位點(diǎn)的基因分型進(jìn)行有效的區(qū)分和鑒別(如圖2)。

2.4 細(xì)胞因子基因多態(tài)性與allo-HSCT患者出現(xiàn)aGVHD的嚴(yán)重程度及發(fā)病率的相關(guān)性

2.4.1 TNF-α-308(G/A)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者移植療效的影響 從PCR結(jié)合基因測(cè)序結(jié)果分析，在32例allo-HSCT患者組中針對(duì)TNF-α-308SNP位點(diǎn)共檢測(cè)出G/G及A/G兩種基因型。其中25例G/G型allo-HSCT患者有3例(12%)出現(xiàn)重度aGVHD，7例A/G型allo-HSCT患者中有1例(14.29%)出現(xiàn)aGVHD，P>0.05(P=0.97)(見表4)。提示兩種基因型患者中嚴(yán)重aGVHD的發(fā)生率無顯著性差異。TNF-α-308(G/A)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者重度aGVHD的發(fā)生情況無顯著影響。

2.4.2 IL-6-174(G/C)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者移植療效的影響 在32例allo-HSCT患者組中針對(duì)IL-6 -174SNP位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，未發(fā)現(xiàn)C/C、C/G基因型，32例患者全部為G/G基因型，4例出現(xiàn)重度aGVHD(見表4)?；颊呓M與正常對(duì)照組的基因分型無顯著差異，無進(jìn)行基因多態(tài)性比較的意義。

2.4.3 IL-10-1082(G/A)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者移植療效的影響 在allo-HSCT患者組中針對(duì)IL-10-1082SNP位點(diǎn)檢測(cè)出A/A及A/G兩種基因型，未發(fā)現(xiàn)1082G/G基因型。其中在29例為A/A基因型患者中有4例出現(xiàn)重度aGVHD(見表4)。

表3 allo-HSCT組和對(duì)照組中疾病相關(guān)細(xì)胞因子基因型的頻率分布

Tab.3 Distribution of disease related cytokines genotype in allo-HSCT and control group

CytokinegeneSNPgroupallo?HSCTgroup(n=32)Normalcontrolgroup(n=36)χ2PTNF?α?308G/G25(7812%)30(8333%)02970759A/A00A/G7(2188%)6(1667%)IL?6?174G/G32(100%)36(100%)——C/C00G/C00IL?10?1082A/A29(9063%)31(8611%)03330713A/G3(937%)5(1389%)G/G00TGF?β+869C/C16(50%)22(6111%)15880452T/T9(2813%)10(2778%)C/T7(2187%)4(1111%)TGF?β+915G/G31(9687%)35(9722%)00071000C/C00G/C1(313%)1(278%)IFN?γ+874T/T17(5313%)12(8056%)27130141A/A00T/A15(4687%)24(1944%)

表4 細(xì)胞因子基因分型在allo-HSCT患者的分布情況及不同基因型中重度aGVHD的發(fā)生率

Tab.4 Distribution of multiple target cytokines genotype in allo-HSCT patients and incidence of severe aGVHD in different genotypes

CytokinesgenesSNPgroupsnMild(0-Ⅰ)Severe(Ⅱ-Ⅳ)RateofsevereaGVHDinspecialgenotype/%PTNF?α?308(n=32)G/G2522312(3/25)A/A0000097A/G7611429(1/7)IL?6?174(n=32)G/G32284125(4/32)—C/C0000G/C0000IL?10?1082(n=32)A/A29254125(4/32)—A/G3300G/G0000TGF?β1+869(n=32)C/C1616000001(C/CvsC/T)T/T99000009(T/TvsC/T)C/T7345714(4/7)TGF?β+915(n=32)G/G31274129(4/31)07C/C0000G/C1100IFN?γ+874(n=32)T/T171421176(2/17)0893A/A0000T/A151321333(2/15)

而在36例正常人群中，IL-10-1082SNP位點(diǎn)同樣未檢測(cè)出G/G基因型，并且患者組與正常對(duì)照組的基因型分布無差異，未對(duì)該基因型進(jìn)行分析。

2.4.4 TGF-β1+869(C/T)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者移植療效的影響 針對(duì)TGF-β1+869基因多態(tài)性與aGVHD發(fā)病的相關(guān)性進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，對(duì)全部allo-HSCT患者針對(duì)TGF-β1+869SNP位點(diǎn)共檢測(cè)出C/C、T/T及C/T三種基因型。其中有7例為C/T型患者，4例出現(xiàn)重度aGVHD，發(fā)生率為57.14%。明顯高于TT型患者(P<0.01)(P=0.009)及CC型患者(P<0.01)(P=0.001)(CC型患者16例，TT型患者9例，均無嚴(yán)重aGVHD出現(xiàn)),見表4?；颊呓M與對(duì)照組相比，基因型分布趨于一致，allo-HSCT患者易感性無關(guān)。結(jié)果提示TGF-β1+869C/T基因型是allo-HSCT患者誘發(fā)重度aGVHD起病的危險(xiǎn)因素。

2.4.5 TGF-β+915(G/C)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者移植療效的影響 對(duì)全部32例allo-HSCT患者針對(duì)TGF-β+915SNP位點(diǎn)共檢測(cè)出G/G、G/C兩種基因型。其中有31例為G/G型患者，4例出現(xiàn)重度aGVHD，發(fā)生率為12.9%(4/31)。1例為G/C型患者，無aGVHD發(fā)生，P>0.05(P=0.7)(見表4)?；颊呓M與對(duì)照組的基因型分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TGF-β+915(G/C)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者aGVHD的發(fā)生情況無顯著影響。

2.4.6 IFN-γ+874(T/A)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者移植療效的影響 在全部allo-HSCT患者組中針對(duì)IFN-γ+874(T/A)SNP位點(diǎn)檢測(cè)出T/T及T/A兩種基因型。其中17例T/T型allo-HSCT患者有2例(11.76%)出現(xiàn)aGVHD，15例T/A型allo-HSCT患者中有2例(13.33%)出現(xiàn)嚴(yán)重aGVHD，P>0.05(P=0.893)(見表4)。結(jié)果表明IFN-γ+874(T/A)基因多態(tài)性對(duì)allo-HSCT患者aGVHD發(fā)生的嚴(yán)重程度沒有顯著影響。

3 討論

異基因造血干細(xì)胞移植是目前治愈多種血液系統(tǒng)惡性疾病和遺傳性疾病的唯一手段。而移植相關(guān)并發(fā)癥則是影響造血干細(xì)胞移植進(jìn)一步發(fā)展的主要障礙，其中急性移植物抗宿主病(aGVHD)作為一組累及皮膚、肝臟和腸道的臨床病例綜合征，是導(dǎo)致移植相關(guān)患者死亡最主要的原因。人類編碼細(xì)胞因子的基因位于染色體的不同部位上，DNA序列區(qū)中的特殊SNP位點(diǎn)存在著對(duì)應(yīng)的堿基變化。編碼區(qū)域內(nèi)的核苷酸序列差異，引起密碼子的改變，致使蛋白質(zhì)上氨基酸不同，細(xì)胞因子分泌的水平高低不一，導(dǎo)致不同個(gè)體間的藥物代謝和生物利用度出現(xiàn)差異。“細(xì)胞因子風(fēng)暴”被認(rèn)為貫穿于該疾病的發(fā)病過程，盡管aGVHD發(fā)病的確切分子機(jī)制尚不清楚，但細(xì)胞因子分泌失調(diào)被認(rèn)為是aGVHD發(fā)病的病理生理基礎(chǔ)。越來越多的研究表明，疾病相關(guān)細(xì)胞因子基因多態(tài)性在aGVHD的易感性及發(fā)病嚴(yán)重程度等方面扮演了至關(guān)重要的角色[13]。

本組研究采用PCR聯(lián)合基因測(cè)序的手段對(duì)32例行allo-HSCT受者多種疾病相關(guān)因子基因多態(tài)性進(jìn)行測(cè)定結(jié)合臨床療效分析后發(fā)現(xiàn)，在采用相同預(yù)處理方案及預(yù)防GVHD方案條件下，TNF-α-308(G/A)、IL-6-174(G/C)、IL-10-1082(G/A)、TGF-β+915(G/C)、IFN-γ+874(T/A)等多種細(xì)胞因子的基因多態(tài)性與嚴(yán)重aGVHD的發(fā)生率之間未見有顯著性的差異。但在TGF-β1+869SNP位點(diǎn)上，C/T型allo-HSCT患者中重度aGVHD的發(fā)病率遠(yuǎn)高于C/C、T/T兩個(gè)基因型患者組；且在患者及正常人群中，TGF-β1+869各基因型的分布比率趨于一致。本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TGF-β1+869 C/T雜合子基因型allo-HSCT患者在采用相同GVHD預(yù)防用藥方案下較純合子型更容易在術(shù)后發(fā)生嚴(yán)重aGVHD，與aGVHD發(fā)病的分子機(jī)制具有潛在聯(lián)系。

TGF-β1作為生命體內(nèi)重要的功能調(diào)節(jié)因子，對(duì)細(xì)胞增殖、分化具有重要調(diào)控作用，對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有廣泛影響，被認(rèn)為在心臟、腎臟及肝臟等器官的排斥反應(yīng)中扮演重要角色[14，15]。相關(guān)文獻(xiàn)指出，TGF-β1對(duì)細(xì)胞增殖具有雙向調(diào)節(jié)功能，對(duì)不同靶細(xì)胞及不同功能條件下相同靶細(xì)胞產(chǎn)生不同作用效果，與其在特殊SNP位點(diǎn)的基因分型有關(guān)[16]。TGF-β1基因多態(tài)性可能在aGVHD發(fā)病的分子機(jī)制中發(fā)揮了關(guān)鍵性的調(diào)控作用。研究表明，CsA能夠促進(jìn)TGF-β1mRNA的表達(dá)，在體內(nèi)及體外均能夠引起TGF-β1水平升高[17]。TGF-β1+869基因多態(tài)性可能引起不同患者在相同CsA劑量下表現(xiàn)出不同的藥物敏感性，是誘發(fā)重度aGVHD起病的潛在危險(xiǎn)因素之一，針對(duì)不同病人合理調(diào)整免疫抑制用藥可能是預(yù)防移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)發(fā)生的重要手段?；谒幬锘蚪M學(xué)的個(gè)體化治療根據(jù)每個(gè)病人的遺傳結(jié)構(gòu)實(shí)行分子診斷，選擇合適的藥物和劑量，優(yōu)化治療方案，是個(gè)體化醫(yī)學(xué)的先行領(lǐng)域。通過對(duì)allo-HSCT受者疾病相關(guān)基因在特殊位點(diǎn)的基因分型進(jìn)行檢測(cè)，可能對(duì)移植術(shù)后受者所出現(xiàn)的免疫排斥反應(yīng)的嚴(yán)重情況進(jìn)行有效的評(píng)估，從而預(yù)測(cè)移植受者對(duì)移植物的免疫應(yīng)答狀態(tài)，有助于建立更加合理的制定用藥方案，指導(dǎo)免疫抑制藥物種類和劑量的調(diào)整，避免不良反應(yīng)的發(fā)生。

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[收稿2016-05-27 修回2016-06-14]

(編輯 許四平)

Correlation between cytokine gene polymorphism and aGVHD in allo-HSCTrecipients

JIN Xue-Feng,YE Dong-Mei,LAN Mei,CHEN Ying.

The People′s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530021,China

Objective:To investigate the relationship between gene polymorphisms of disease-relevant multiple cytokines including TNF-α,IL-6,IL-10,TGF-β1,IFN-γ and acute graft versus host disease(aGVHD) in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(allo-HSCT).Methods:32 cases of recipients received allo-HSCT and 36 cases of normal groups in January 2014 to December 2015 were selected as objects of study.We detected genotypes on specific SNP of target genes by polymerase chain reation(PCR) combined with gene sequencing and observed the occurrence of aGVHD in postoperative recipients.The influence of cytokine gene polymorphisms on prognosis of allo-HSCT patients was analyzed,and the potential relationship between specific SNP mutation of the disease-relevant cytokine genes and severity of aGVHD was discussed.Results:Distribution of cytokines gene polymorphism including TNF-α-308(G/A),IL-6-174(G/C),IL-10-1082(A/G),TGF-β1+915(G/C),IFN-γ(T/A) had no significant differences with incidence of severe aGVHD(P>0.05).However,the occurrence of severe aGVHD in allo-HSCT recipients with C/T genotype was significantly higher than C/C and T/T in SNP of TGF-β1+869(P<0.01).Conclusion:Gene polymorphism of TGF-β1+869(C/T) in allo-HSCT patients was closely related to the occurrence of severe aGVHD.The research show allo-HSCT patients with C/T genotype occurred severe aGVHD more frequently,which is an important potential risk factor to induce the incidence of severe aGVHD.Therefore,detecting gene polymorphism of TGF-β1+869(C/T) in allo-HSCT recipients and developing the appropriate therapeutic regimen may be helpful to reduce the incidence of aGVHD.

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(allo-HSCT)；Cytokine gene；Polymorphism;Acute graft versus host disease(aGVHD)；Individual administration

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.12.021

金雪峰(1987年-)，男，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事基礎(chǔ)藥理學(xué)及臨床合理用藥等方面研究，E-mail:jinxuefeng_521111@126.com。

及指導(dǎo)教師：藍(lán) 梅(1974年-)，女，醫(yī)學(xué)碩士，副主任醫(yī)師，主要從事血液系統(tǒng)及風(fēng)濕免疫疾病診療方面的研究，E-mail:meilanmo@sina.com。

R394.3

A

1000-484X(2016)12-1820-06

①本文為廣西醫(yī)療衛(wèi)生適宜技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目(No.桂衛(wèi)S201420-01)。