模擬運(yùn)輸條件下孔雀石綠及其代謝物在鱖體內(nèi)的殘留消除規(guī)律

李麗春，劉書貴，尹怡，馬麗莎，單奇，戴曉欣，鄭光明

(中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室(廣州)；農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)種質(zhì)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室：廣東 廣州 510380)

模擬運(yùn)輸條件下孔雀石綠及其代謝物在鱖體內(nèi)的殘留消除規(guī)律

李麗春，劉書貴，尹怡，馬麗莎，單奇，戴曉欣，鄭光明*

(中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室(廣州)；農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)種質(zhì)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室：廣東 廣州 510380)

在模擬運(yùn)輸條件下，分析孔雀石綠(MG)及其代謝產(chǎn)物隱色孔雀石綠(LMG)在鱖體內(nèi)的代謝規(guī)律。將體重為(20±5)g的健康鱖放入100 μg/L MG藥液中，分別藥浴5 min、1 d和2 d后，于藥浴后取樣檢測，發(fā)現(xiàn)鱖體內(nèi)MG和LMG殘留量隨藥浴時間增加而增加，藥浴2 d的鱖在藥浴后90 d仍有MG和LMG殘留。采用100、200和400 μg/L MG藥浴2 d后，鱖體內(nèi)LMG藥峰濃度Cmax分別為658.37、1 128.80和1 461.25 μg/kg，鱖體內(nèi)LMG的富集量隨藥浴濃度的增加而增加；400 μg/L MG溶液藥浴下鱖體內(nèi)MG和LMG消除半衰期T1/2分別為64.39和42.69 d，表觀分布容積Vd為21.55和0.98 L/kg，清除率CL分別為0.232和0.016 L/d，體內(nèi)平均駐留時間MRT分別為81.05和49.43 d。本研究結(jié)果表明，在運(yùn)輸條件下鱖體內(nèi)MG和LMG消解較慢，易造成鱖中MG和LMG超標(biāo)，建議加強(qiáng)鱖運(yùn)輸環(huán)節(jié)中MG的監(jiān)管，確保鱖等水產(chǎn)品的質(zhì)量安全。[中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2016,6(6):12-19]

鱖；孔雀石綠；隱色孔雀石綠；代謝；消除；殘留；運(yùn)輸

孔雀石綠(malachite green, MG)是一種人工合成的三苯甲烷類染料，廣泛用于制陶業(yè)、紡織業(yè)、皮革業(yè)、食品顏色劑和細(xì)胞化學(xué)染色[1]；在以往的漁業(yè)生產(chǎn)中，MG常被用作驅(qū)蟲劑、殺蟲劑和防腐劑，主要防治水產(chǎn)動物的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等[1-2]；但由于MG及其代謝產(chǎn)物隱色孔雀石綠(leucomalachite green，LMG)都具有高毒、高殘留和“三致”(致癌、致畸、致突變)等特點(diǎn)[3- 4]，且可在組織中迅速蓄積，給消費(fèi)者帶來安全隱患。因此，中國于2002 年5 月發(fā)布的《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》(農(nóng)牧發(fā)[2002]1號)中明確規(guī)定，所有可食用動物組織中不得檢出MG及其代謝物。這也意味著在水產(chǎn)養(yǎng)殖中禁止使用MG[5-6]，但因其對水霉病有特效，價(jià)格低廉，且暫無其他有效替代藥，目前仍有少量違規(guī)使用MG的現(xiàn)象，主要用于苗種、商品魚的養(yǎng)殖、運(yùn)輸和銷售等環(huán)節(jié)[7-9]。近年來MG及其代謝物的殘留受到國內(nèi)學(xué)者的高度關(guān)注[10-14]。

目前MG在水產(chǎn)品中的研究主要集中在殘留分析方法方面，其殘留消除規(guī)律方面的研究已報(bào)道的主要品種有：大菱鲆(Psettamaxima)[6]、羅非魚(Oreochromisconiloticus)[15]、鯽(Carassiusauratus)[8]、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)[16]、青石斑魚(Epinephelusawoara)[17]、鯉(CyprinuscarpioLinnaeus)[18]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[18-19]等。近兩年來，雖然鱖中MG殘留消除方面的研究有所報(bào)道[20-24]，但大多針對的是短時間藥浴下鱖體內(nèi)MG及其代謝物的殘留消除規(guī)律，對于低濃度長時間藥浴下鱖對MG的蓄積和消除規(guī)律的研究并不多見。鱖(Sinipercachuatsi) 是鱸形目真鱸科鱖屬的魚類，肉質(zhì)鮮美，為中國名優(yōu)水產(chǎn)品。鱖主要在廣東、江西、安徽、浙江和湖南等地養(yǎng)殖，其中廣東和江西是中國鱖養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)。一般鱖養(yǎng)殖周期為5～8個月，主要銷往北京、上海、成都等城市，鱖的長途跨省運(yùn)輸通常是從魚塘收購后首先進(jìn)行不斷降溫處理，降至15 ℃左右，暫養(yǎng)3～4 h后進(jìn)行箱包型打包，并加入高壓氧進(jìn)行運(yùn)輸，運(yùn)輸時間一般為1～2 d。在鱖的養(yǎng)殖中，當(dāng)水溫低于16 ℃時水霉病較為嚴(yán)重，而在實(shí)際中鱖運(yùn)輸環(huán)節(jié)的水溫一般維持在16 ℃左右，因此在運(yùn)輸環(huán)節(jié)中存在違規(guī)使用MG的風(fēng)險(xiǎn)隱患。為明確鱖的運(yùn)輸環(huán)節(jié)中MG的殘留動態(tài)，本實(shí)驗(yàn)?zāi)M運(yùn)輸環(huán)節(jié)研究低濃度長時間藥浴下鱖體內(nèi)MG及其代謝物的殘留消除規(guī)律，以期為確保鱖的食用安全及加強(qiáng)MG在水產(chǎn)養(yǎng)殖和運(yùn)輸中的監(jiān)管提供參考和借鑒。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)魚及養(yǎng)殖條件

體重為(20±5) g的健康鱖苗2 500尾，購于廣東省肇慶市四會市；購回后在網(wǎng)箱中暫養(yǎng)。養(yǎng)殖餌料魚為鯪(Cirrhinusmolitorella)，由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所良種基地提供，經(jīng)測定無MG及其代謝物殘留；養(yǎng)殖場所位于廣州市中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所實(shí)驗(yàn)動物房。采用安裝有智能溫度控制儀和冷凝器的圓形養(yǎng)殖桶，在桶內(nèi)放入300 L水，將水溫降低至(16±1) ℃，并連續(xù)曝氣48 h后放入鱖120尾進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前將鱖置于養(yǎng)殖桶內(nèi)適應(yīng)3～5 d，并于實(shí)驗(yàn)前一天暫停喂食，實(shí)驗(yàn)過程中保持水體連續(xù)曝氣以補(bǔ)充水體中的溶解氧，每隔1 d投喂1次餌料魚，每次投喂1～2 kg。

1.2 試劑和儀器設(shè)備

MG、LMG及其同位素內(nèi)標(biāo)氘代孔雀石綠(D5-MG)和氘代隱色孔雀石綠(D6-LMG)標(biāo)準(zhǔn)品，均購于德國Dr. Ehrenstorfer公司，純度大于98%

Quattro Micro API三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀(Waters e2695 美國)及其他實(shí)驗(yàn)室常用小型儀器。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥

實(shí)驗(yàn)設(shè)6個實(shí)驗(yàn)組和1個空白對照組。其中3個實(shí)驗(yàn)組中，每組各80尾鱖，用100 μg/L MG分別藥浴0.5 min、1 d和2 d，研究藥浴時間對鱖體內(nèi)MG殘留消除規(guī)律的影響；另外3個實(shí)驗(yàn)組，每組120尾鱖，分別用100、200和400 μg/L MG藥浴2 d，研究不同藥浴濃度下鱖體內(nèi)MG及其代謝物殘留消除規(guī)律；對照組不使用MG藥浴。以體內(nèi)無MG和LMG殘留的鯪為餌料魚正常飼喂，保持水體溫度為(16±1)℃，并連續(xù)曝氣以補(bǔ)充水體中溶解氧。

1.4 樣品采集

經(jīng)100 μg/L MG分別藥浴0.5 min、1 d和2 d后，換清水養(yǎng)殖，于換水后1、3、5、7、10、15、20、50和90 d采樣。每個時間點(diǎn)隨機(jī)采集3個平行樣，每個平行樣2～3尾，去除頭部、鱗和皮，取肌肉部分勻漿后-18 ℃保存待測。

在100、200和400 μg/L MG藥浴期間，分別于藥浴后0、2、6、12、24和48 h采樣。待藥浴2 d后，換清水養(yǎng)殖，于換水后1、2、3、5、7、10、15、20、50和90 d采樣。每個時間點(diǎn)隨機(jī)采集3個平行樣，每個平行樣2～3尾， 去除頭部、鱗和皮，取肌肉部分勻漿后于-18 ℃保存待測。

1.5 樣品前處理

參考GB/T 19857—2005《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定》進(jìn)行樣品前處理，稍做修改。準(zhǔn)確稱取勻漿后的鱖樣品(5.00±0.05) g于50 mL 離心管中，加入100 μL質(zhì)量濃度為100 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入11 mL 乙腈超聲波振蕩提取5 min，以8 000 r/min均質(zhì)提取30 s，5 000 r/min 離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至25 mL 比色管中。重復(fù)上述步驟1 次，將上清液合并至25 mL比色管中，用乙腈定容至25 mL，搖勻備用。

取5.00 mL 樣品溶液，加至已活化的中性氧化鋁柱(5 mL，乙腈活化)中，用KD濃縮瓶接收流出液，用4 mL乙腈洗滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液，于45 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，準(zhǔn)確加入2.00 mL乙腈-5 mmol/L乙酸銨(1 ∶1，V∶V)，超聲振蕩1 min，10 000 r/min離心5 min，經(jīng)0.22 μm 濾膜過濾后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.6 儀器分析條件

1.6.1 液相色譜條件

色譜柱為C18柱，100 mm×2.1 mm(I.D.)，粒度3 μm。流動相A為5 mmol/L 乙酸銨緩沖溶液(pH4.5)，流動相B為乙腈，流速為0.30 mL/min，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為20 μL，梯度洗脫見表1。

表1 梯度洗脫條件

Tab.1 Conditions of gradient elution

序號Serial洗脫時間/minElutiontime緩沖液A/%BufferA乙腈B/%Acetonitrile流速/(mL·min-1)Flowrate10.025750.3024.001000.3035.625750.3047.101000.3059.125750.30

1.6.2 質(zhì)譜條件

采用大氣壓電噴霧離子源(ESI)，正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，離子傳輸毛細(xì)管溫度為350 ℃。質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 質(zhì)譜參數(shù)

Tab.2 MS parameters

測定物Analytes母離子Parention子離子Production錐孔電壓/VDeclustingpoten-tial碰撞能量/eVCollisionenergy駐留時間/sDwelltimeMG329.4208.258350.2329.4313.4*58370.2LMG331.5239.440300.2331.5316.5*40200.2D5-MG334.4318.470350.2D6-LMG337.4322.460200.2

注：帶*的離子為定量離子(quantitative ion)。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用PKSolver 2.0藥代動力學(xué)分析軟件進(jìn)行非房室模型分析(Non-Compartmental Analysis，NCA)，對不同濃度MG藥浴2 d后鱖體內(nèi)MG和LMG的藥-時數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，獲得其藥代動力學(xué)參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 孔雀石綠和隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

在上述儀器分析條件下所檢測的標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品基線平穩(wěn)，無其他雜峰干擾，峰形良好；MG和LMG的保留時間(retention time，RT)分別為4.66和8.17 min，其標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖見圖1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性

將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液稀釋成7個梯度濃度，在1～200 μg/L范圍內(nèi)以MG和LMG峰面積與其內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y)，以濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出線性方程和相關(guān)系數(shù)。 MG 和LMG 的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為Y= 0.293 6X- 0.065 7和Y= 0.357 2X+ 0.050 3，相關(guān)系數(shù)r分別為 0.999 3和0.999 1。由相關(guān)系數(shù)可以看出在該濃度范圍內(nèi)MG 和LMG及其內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比與其濃度之間具有良好的線性相關(guān)。方法檢測限為0.5 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg。

圖1 MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜圖Fig.1 Chromatograms of MG and LMG standards(4 μg·L-1)

2.3 回收率和精密度

分別向空白鱖樣品中添加MG和LMG混合標(biāo)準(zhǔn)溶液是使樣品中MG和LMG含量為5、20和50 μg/kg，按照上述前處理方法和儀器分析條件測定方法回收率和精密度，重復(fù)6次。MG和LMG在鱖肌肉中的平均回收率為88.5%～99.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.31%～6.38%(表3)。

2.4 不同藥浴時間下鱖體內(nèi)MG及其代謝物殘留消除規(guī)律

經(jīng)100 μg/L MG藥浴不同時間后，鱖肌肉中MG和LMG在不同時間點(diǎn)的殘留量見表4。

鱖經(jīng)不同時間MG藥浴后體內(nèi)MG和LMG的殘留量隨養(yǎng)殖時間的增加呈波動式下降，且隨藥浴時間的增加體內(nèi)MG和LMG殘留量均有所增加，藥浴時間越長體內(nèi)消除越慢，消除所需時間也相應(yīng)較長。從不同藥浴時間的鱖體內(nèi)MG和LMG消除曲線可以看出，當(dāng)?shù)蜐舛?100 μg/L)下短時間(5 min)藥浴時鱖體MG和LMG殘留量均較少，且在15 d內(nèi)基本可以完全消除；長時間藥浴下其體內(nèi)MG和LMG消除速率較慢，在藥浴90 d后仍有MG和LMG存在。而國內(nèi)鱖從產(chǎn)地長距離運(yùn)輸需要較長時間，如運(yùn)輸期間使用MG藥浴，則可造成其體內(nèi)MG和LMG殘留超標(biāo)，給消費(fèi)者食用安全性帶來威脅。因此應(yīng)加大對運(yùn)輸環(huán)節(jié)中MG使用的監(jiān)管力度，杜絕運(yùn)輸過程中違法使用MG。

2.5 不同濃度MG藥浴后鱖體內(nèi)MG及其代謝物富集消除規(guī)律

采用液相色譜質(zhì)譜法測定經(jīng)不同濃度MG藥浴后的鱖樣品中MG和LMG的殘留量，對其藥浴中和藥浴后殘留量進(jìn)行分析，獲得其富集消除規(guī)律(表5)。

表3 空白樣品加標(biāo)回收率和精密度

Tab.3 Recoveries and RSDs of spiked samples

n=6

表4 經(jīng)100 μg·L-1MG藥浴不同時間后鱖體內(nèi)MG和LMG殘留量

Tab.4 Residual amounts of MG and LMG insinipercachuastibathed in 100 μg·L-1MG solution for different time

n=3, μg·kg-1

注：ND為未檢出。2 d、1 d和5 min分別為藥浴時間。

表5 不同質(zhì)量濃度MG藥浴后鱖體內(nèi)MG和LMG殘留量

Tab.5 Residual amounts of MG and LMG insinipercachuastiat different exposed concentrationsn=3，μg·kg-1

注：ND為未檢出，*示MG藥液質(zhì)量濃度分別為100、200和400 μg·L-1。

不同質(zhì)量濃度MG藥浴下鱖體內(nèi)MG和LMG均具有先富集后消除的趨勢，高濃度下MG和LMG達(dá)到富集峰值的時間較短，均為24 h；低濃度下達(dá)到富集峰值時間較長，為48 h。不同質(zhì)量濃度MG藥浴下，鱖體內(nèi)MG富集峰值基本一致，均在80 μg/kg左右；而LMG在鱖體內(nèi)的富集值差異較大，藥浴濃度為100、200和400 μg/L的峰值含量分別為658.37、1 128.80和1 461.25 μg/kg，經(jīng)400 μg/L MG藥浴后鱖體內(nèi)LMG富集峰值是100 μg/L MG藥浴后的2倍多。藥浴后鱖體內(nèi)MG和LMG的消除規(guī)律均表現(xiàn)為波動式下降，消除時間較長，藥浴90 d后仍有LMG檢出，藥浴90 d后鱖體內(nèi)LMG含量仍在50 μg/kg左右。鱖體內(nèi)LMG的富集量隨藥浴濃度的增加而增加，且藥浴濃度越大鱖體內(nèi)LMG殘留量越高，消除越慢。鱖運(yùn)輸時間一般1～2 d，若運(yùn)輸過程中使用MG，則很可能會造成市場中鱖體內(nèi)MG和LMG的殘留超標(biāo)，存在安全隱患。

2.6 不同濃度MG藥浴后鱖體內(nèi)MG和LMG代謝動力學(xué)參數(shù)

由表6可知，高濃度下MG和LMG達(dá)峰時間Tmax均較短，為1 d。100、200和400 μg/L MG藥浴2 d的鱖體內(nèi)MG藥峰濃度Cmax分別為80.73、74.85和84.10 μg/kg，而LMG藥峰濃度Cmax分別為658.37、1 128.8和1 461.25 μg/kg，由此可知MG進(jìn)入鱖體后主要以LMG形式存在，鱖體內(nèi)LMG的Cmax隨藥浴濃度的增加而增加。高濃度MG藥浴下消除半衰期較大，400 μg/L MG藥浴下鱖體內(nèi)MG和LMG消解半衰期T1/2分別為64.39和42.69 d；MG和LMG在鱖體內(nèi)清除率CL隨藥浴濃度的增加而增加，400 μg/L MG藥浴下鱖體內(nèi)MG和LMG清除率CL分別為0.232 0和0.016 0 L/d，鱖體內(nèi)MG清除率CL遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于LMG?？傮w而言，藥浴濃度對鱖體內(nèi)藥代動力學(xué)各參數(shù)均有影響，除消除半衰期T1/2和達(dá)峰時間Tmax外，其他各參數(shù)值均隨藥浴濃度的增加而增加。

表6 經(jīng)不同濃度MG藥浴2 d后鱖體內(nèi)MG和LMG藥代動力學(xué)參數(shù)

Tab.6 Pharmacokinetic parameters for MG and LMG inSinipercachuatsiby MG medicated bath at different concentrations for 2 d

藥代動力學(xué)參數(shù)Pharmacokineticparameters單位UnitMG質(zhì)量濃度/(μg·L-1)MGmassconcentrationLMG質(zhì)量濃度/(μg·L-1)LMGmassconcentration100200400100200400消除半衰期T1/2d33.1960.0864.3931.0947.7642.69達(dá)峰時間Tmaxd221221藥峰濃度Cmaxμg·kg-180.7374.8584.10658.371128.81461.25藥-時曲線下面積AUC0-tμg·kg-1·d-11077.351031.301155.6414464.1716919.3120818.15平均駐留時間MRTd37.6971.8681.0542.2354.4249.43表觀分布容積VdL·kg-13.8811.8521.550.270.660.98清除率CLL·d-10.08110.13670.23200.00600.00960.0160

3 討論

3.1 藥浴時間影響鱖體內(nèi)MG和LMG的代謝消除

MG通過藥浴方式進(jìn)入魚體后在其體內(nèi)殘留消除的影響因素較多，其中藥浴時間、濃度、水產(chǎn)品種類、水溫和pH是主要因素。有關(guān)研究表明，藥浴時間對MG和LMG 在魚體內(nèi)的殘留和消除具有較大影響。在同一藥浴濃度下，15 min/次組中MG在青石斑魚肌肉中的殘留濃度小于浸泡5 h組，說明浸泡時間對MG在魚體內(nèi)殘留量影響較大[25]；采用100和200 μg/L的MG對鰻藥浴24 h，發(fā)現(xiàn)鰻肌肉中殘留時間大于120 d[26]；采用800 μg/L MG浸泡1 h后，大菱鲆肌肉中MG消除至檢測限(0.5 μg/kg)以下需要20.3 d，而LMG則需要281.9～356.7 d[6]。本研究采用100 μg/L MG分別藥浴鱖5 min、1 d和2 d，鱖體內(nèi)殘留的MG和LMG均隨藥浴時間的增加而增加，藥浴時間越長在體內(nèi)消除越慢，消除所需時間也相應(yīng)較長。100 μg/L的MG藥浴鱖時，藥浴5 min其體內(nèi)MG和LMG在15 d內(nèi)基本完全消除；而藥浴時間超過1 d時鱖體內(nèi)MG和LMG消除較慢，藥浴后90 d仍有檢出。目前在中國鱖長途運(yùn)輸一般1～2 d，如果運(yùn)輸過程中長時間使用MG則很可能造成鱖中MG和LMG的檢出，給消費(fèi)者帶來安全隱患，因此應(yīng)加大鱖運(yùn)輸環(huán)節(jié)是否使用MG的監(jiān)管力度。

3.2 藥浴濃度影響鱖體內(nèi)MG和LMG的富集消除

MG進(jìn)入魚體后，可迅速轉(zhuǎn)化成脂溶性較強(qiáng)的LMG，從而在魚體內(nèi)蓄積殘留[6]。有關(guān)研究表明，MG藥浴濃度和魚體內(nèi)MG/LMG殘留量呈正相關(guān)[15，20,27]，不同水產(chǎn)品對MG及LMG的殘留消除有一定影響。用0.5和2 mg/L的MG藥浴不同規(guī)格的羅非魚，藥浴60 d后仍有LMG檢出[15]；用0.1和0.2 mg/L MG藥浴鰻鱺24 h后，鰻鱺中MG和LMG代謝規(guī)律基本相似，只是MG和LMG達(dá)峰時間和消除時間不同[26]。本研究采用100、200和400 μg/L MG藥浴鱖2 d，其消除規(guī)律基本一致，這與高露嬌等[26]的研究相符；經(jīng)400 μg/L MG藥浴后，鱖體內(nèi)LMG富集峰值是100 μg/L MG藥浴后峰值的2倍多。藥浴后鱖體內(nèi)MG和LMG的消解規(guī)律均表現(xiàn)為波動式下降，消除時間較長，藥浴90 d 后仍有LMG檢出，藥浴90 d后鱖體內(nèi)LMG含量仍在50 μg/kg左右。這可能因?yàn)榈蜏丨h(huán)境下魚體內(nèi)各種代謝酶活性較低，導(dǎo)致其體內(nèi)代謝緩慢，因此MG和LMG代謝消除也較慢。

3.3 不同藥浴濃度下鱖體內(nèi)MG和LMG代謝動力學(xué)分析

有關(guān)研究表明，采用7 mg/L MG藥浴斑點(diǎn)叉尾鮰5 min后，MG和LMG消解半衰期分別為113.068和105.84 h[16]。本研究以鱖為對象，模擬運(yùn)輸環(huán)境下，分析MG和LMG在其體內(nèi)的藥代動力學(xué)規(guī)律，結(jié)果表明，不同濃度MG藥浴下鱖體內(nèi)MG和LMG代謝動力學(xué)差異明顯，在100、200和400 μg/L MG藥浴2 d后，鱖體內(nèi)LMG藥峰濃度Cmax分別為658.37、1 128.8和1 461.25 μg/kg，Cmax隨藥浴濃度的增加而增加，而MG藥峰濃度Cmax分別為80.73、74.85和84.10 μg/kg。400 μg/L MG藥浴2 d后，鱖體內(nèi)MG和LMG消除半衰期T1/2分別為64.39和42.69 d；100 μg/L MG藥浴下鱖體內(nèi)MG和LMG消除半衰期T1/2分別為33.19和31.09 d。鱖體內(nèi)MG清除率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于LMG，MG藥浴鱖后主要以LMG殘存體內(nèi)，LMG消除速度明顯低于MG。國內(nèi)鱖運(yùn)輸時間一般1～2 d，大部分都采用低溫運(yùn)輸，如在運(yùn)輸過程中長時間使用MG則很可能造成鱖體內(nèi)MG和LMG殘留超標(biāo)。黃向榮等[23]研究表明0.5、1.0和2.0 mg/L藥浴鱖苗種2 h后，鱖體內(nèi)MG和LMG殘留量分別于藥浴后第37、55天時低于判定值1.0 μg/kg，而鱖養(yǎng)殖周期一般為5～8個月，因此苗種期使用MG并不會造成成魚中MG和LMG殘留。本研究表明，在實(shí)際運(yùn)輸條件下鱖體內(nèi)MG和LMG殘留消除速度較慢，消除所需時間較長，如果運(yùn)輸過程中使用MG濃度高于100 μg/L藥浴2 d以上時，在換水后50 d鱖體內(nèi)MG和LMG殘留量仍較高，因此市場鱖中高濃度MG和LMG的檢出很有可能是在運(yùn)輸過程中使用了MG。為確保鱖食用安全性，必須加強(qiáng)運(yùn)輸環(huán)節(jié)中禁用藥物的監(jiān)管力度，杜絕MG在運(yùn)輸過程中的使用。

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Malachite green and its metabolites residues elimination rulesfrom Siniperca chuatsi in simulating transportation environment

LI Lichun, LIU Shugui, YIN Yi, MA Lisha, SHAN Qi, DAI Xiaoxin, ZHENG Guangming*

(Pearl River Fisheries Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences;Ministry of Agriculture Laboratory of Quality & Safety Risk Assessment for Aquatic Product (Guangzhou);Key Laboratory of Tropical & Subtropical Fishery Resource Application & Cultivation:Guangzhou 510380,China)

The study was analyzed the elimination rules of malachite green (MG) and leuco malachite green (LMG) from mandarin fish (Sinipercachuatsi) at different time and different medicated bath concentrations in the simulating transportation environment. When mandarin fish (body weight (20±5) g) were bathed in 100 μg/L malachite green solution for 5 min, 1 d and 2 d, the residues of MG and LMG in fish body were increased with the medicated bath time extending, and the MG and LMG were still detected inS.chuatsiwhen the time reached to 90 d after the MG medicated bath 2 d. Moreover, after 100, 200, and 400 μg/L MG exposed to fish for 2 d, the peak concentration of LMG(Cmax) were 658.37, 1 128.80, and 1 461.25 μg/kg, respectively，and the LMG residues were increased with the medicated bath concentrations rise. At 400 μg/L malachite green, the elimination half-lifeT1/2of MG and LMGinS.chuatsiwere 64.39 and 64.39 d; the apparent volume of distribution (Vd) were 21.55 and 0.98 L/kg; clearance(CL) were 0.232 and 0.016 L/d; Mean Residence Time (MRT) were 81.05 and 49.43 d, respectively. The study suggested that the elimination of MG and LMG residues was relatively slow in mandarin fish in transportation environment, and was easy to cause MG and LMG residues in mandarin fish out of limits. Thus, it should enhance supervision of malachite green used in mandarin fish transportation environment in order to ensure fish food safety. [Chinese Fishery Quality and Standards, 2016, 6(6):12-19]

Sinipercachuatsi; malachite green; leucomalachite green; metabolize; elimination; residue；transportation

ZHENG Guangming, zgmzyl1964@163.com

2016-05-21；接收日期：2016-09-24

農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品養(yǎng)殖禁限用藥物調(diào)查與產(chǎn)品安全性評估(GJFP201501001)

李麗春(1986-)，男，博士，助理研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量安全，lichunli0214@163.com 通信作者：鄭光明，研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)種質(zhì)資源學(xué)和水產(chǎn)品質(zhì)量安全，zgmzyl1964@163.com

S94

A

2095-1833(2016)06-0012-08