用兩種方法檢測乙肝表面抗原結果分析

摘要：目的 了解用ELISA法檢測乙肝表面抗原和用化學發(fā)光法檢測表面抗原兩者之間的結果情況。方法 采集320例就診人員的血液標本，分別用化學發(fā)光法與ELISA法檢測。結果 320份標本中，發(fā)光法檢測出40份陽性，280份陰性。ELISA法檢測出42份陽性，278份陰性。經(jīng)χ2檢驗兩者無顯著性差異（P>0.05）。結論 ELISA法成本比較低，耗時長，實驗的影響因素比較多，易出現(xiàn)假陽性?；瘜W發(fā)光法成本高，所需時間短，干擾因素少，不易出現(xiàn)假陽性。

關鍵詞：乙肝表面抗原；ELISA；化學發(fā)光

流行病學調(diào)查結果顯示，我國的乙型病毒肝炎感染性約達10%，乙肝的實驗檢測對其防治具有非常重大的意義[1]。乙型肝炎病毒乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外殼蛋白，它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。隨著科學越來越進步，檢測的手段也越來越多。自20世紀70年代至今，諸多高敏感性的檢測方法被廣泛應用于臨床免疫學的檢測中，當中應用最為廣泛的就屬酶聯(lián)免疫法（enzyme linked Immunosor bent assay，ELISA）[2]。近幾年，化學發(fā)光微粒子免疫分析法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）正逐漸發(fā)展，是一種敏感性較強的臨床免疫學檢測方法，有效解決了低濃度乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的檢測難題[3]。現(xiàn)用ELISA法，化學發(fā)光法，這兩種方法檢測的相關性進行探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 標本來自于我院2016年3月1日～3月5日體檢人員，共320例，男198例，女122例，年齡18～72歲，平均年齡為（39.5±8.4）歲。

1.2標本采集 用紅頭采血管，真空抽取靜脈血3 ml，標本靜置后離心提取血清。

1.3檢測試劑與儀器 一種采用雅培化學發(fā)光HBsAg定量檢測試劑盒，標本離心后，按照雅培I2000化學發(fā)光儀的操作規(guī)程檢測。試劑源自美國雅培公司，批準文號為70318HN00，儀器為美國雅培公司生產(chǎn)的i2000r化學光分析儀。另一種采用英科新創(chuàng)HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，安圖酶標儀，按照說明書的操作步驟進行。試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司提供，批準文號為2008095514，主要儀器為酶標儀（型號：伯樂680）、恒溫水浴箱（生產(chǎn)企業(yè)：上海博訊公司醫(yī)療器械廠）。

1.4結果陽性的判讀 化學發(fā)光法檢測含量>0.05為陽性。ELISA法：檢測標本的OD值/0.105>1為陽性。

2 結果

320份標本，ELISA法檢測出278份陰性，42份陽性，其中40份陽性的OD值>0.5，2份標本的OD值<0.5?；瘜W發(fā)光法檢測出40份陽性，其中ELISA法檢測的那2份OD值<0.5的陽性標本檢測為陰性。最后再用ELISA法重新檢測這兩份標本，結果最終顯示又為陰性，與化學發(fā)光法結果相符。

3 討論

ELISA法檢測HBsAg是標本中存在的乙肝表面抗原與固相載休表面的抗體相結合，放入恒溫箱，通過一段時間的反應，再進行洗滌拍干后加入酶標記的抗體，反應一定時間后，再進行洗滌拍干，最后加顯色劑，與固相載體表面復合物相反應，如果存在乙肝表面抗原抗體復合物就會出現(xiàn)一定的顏色反應，呈現(xiàn)陽性?；瘜W發(fā)光法將待測標本與生物素標記的單克隆抗體、三氯聯(lián)吡啶釕標記單克隆抗體、鏈酶親和素標記磁性微粒加入到反應杯中共同溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標記抗體復合物。經(jīng)儀器內(nèi)的緩沖液沖洗，當磁性微粒流經(jīng)電極表面時，被安裝在電極下的磁鐵吸引住，而游離的發(fā)光劑標記抗體被沖走。同時在電極加電壓，啟動電化學發(fā)光反應，使發(fā)光試劑標記物三氯聯(lián)吡啶釕和TPA在電極表面進行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學發(fā)光，光的強度與待測抗原的濃度成正比。全自動化學發(fā)光法所有的操作控制由儀器操作，具有靈敏度，準確率高，無輻射及快捷方便等優(yōu)點[4]，避免了各種交叉污染，標本加錯的可能性，避免了溫度，時間控制偏差等。在ELISA法測定中影響因素較多，操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測結果影響較大，在臨床檢驗中除正常反應外，有時?？梢姷揭恍╁e誤的結果（即假陽性或陰性結果）[5]。如在人工加標本，加酶結合物，加底物，可能產(chǎn)生氣泡或濺出等人為的不當操作，特別是洗滌在ELISA中決定著實驗的成敗，標本中的非特異性的干擾物質(zhì)吸附于固相載體上后，如果沒洗脫掉，就會產(chǎn)生假陽性，錯誤的結果。

320份標本中兩種方法檢測雖沒有顯著性差異，但有2份標本結果不相符，通過ELISA法一旦報告給患者，就會引起多方面的麻煩。化學發(fā)光法雖所需時間短，干擾因素少，不易出現(xiàn)假陽性，但成本高。由于ELISA法成本比較低，檢測的價格便宜，雖耗時長，實驗的影響因素比較多，易出現(xiàn)假陽性，但大多數(shù)健康體檢人員還是比較喜歡采用此種方法。所以作為臨床檢驗人員在操作的過程中一定要仔細，不得馬虎，對于像這種OD值<0.5標本一定要重新檢測，排除人為因素。

綜上所述，在乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的檢測上，ELISA法成本比較低，耗時長，實驗的影響因素比較多，易出現(xiàn)假陽性。化學發(fā)光法成本高，所需時間短，干擾因素少，不易出現(xiàn)假陽性。

參考文獻：

[1]衛(wèi)曉青，黃秋芳，戴悅，等.低水平HBsAg3種方法檢測結果比較[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10（3）：283-284.

[2]李秀梅，劉秋霞，閻澤君，等.ELISA法檢測乙肝表面抗原出現(xiàn)假陽性結果分析[J].慢性病學雜志，2010，12（9）：1037-1038.

[3]馬躍飛，高麗欽， 林曉麗.ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原假陽性的影響因素[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2010，31（10）： 1176-1177.

[4]孫永惠. 淺議化學發(fā)光法診斷系統(tǒng)檢測乙型肝炎表面抗原[J]. 醫(yī)學信息，2013，26（8）：604-605.

[5]遲婉利，孔祥民. ELISA檢測乙肝病毒表面抗原假陽性原因分析[J].中國誤診學雜志，2011，11（9）：2050-2050.編輯/哈濤