保存溫度及時間對血清游離脂肪酸檢測的影響

摘要：目的 探討血清標(biāo)本在不同保存溫度和不同保存時間下，對游離脂肪酸測定結(jié)果的影響。提出標(biāo)本保存的合理方法，為臨床測定結(jié)果的準(zhǔn)確性提供試驗(yàn)依據(jù)。方法 隨機(jī)抽取住院患者血液標(biāo)本18例，即刻離心測定，吸取血清分別保存在室溫、4℃和-20℃以下，于采血后4h、8h、24h、48h分別測定保存于室溫和4℃下標(biāo)本游離脂肪酸濃度，于采血后24h、48h測定保存于-20℃以下標(biāo)本游離脂肪酸濃度，對各組檢測結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果 室溫下放置4h、8h、24h、48h血清游離脂肪酸濃度與即刻檢測結(jié)果比較有統(tǒng)計學(xué)差異；4℃下放置4h血清游離脂肪酸濃度與即刻結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，而放置8h、24h、48h后均明顯升高，-20℃冷凍條件下放置24h后血清游離脂肪酸濃度與即時結(jié)果之間無統(tǒng)計學(xué)差異，而放置48h后與即時濃度之間有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論 標(biāo)本放置時間及條件對游離脂肪酸測定有影響，為保證游離脂肪酸結(jié)果穩(wěn)定，必須對血清標(biāo)本低溫保存并快速檢測。

關(guān)鍵詞：血清；保存時間；溫度；游離脂肪酸

游離脂肪酸主要產(chǎn)生于皮下和內(nèi)臟脂肪脂解，部分由血中脂肪酶水解脂肪產(chǎn)生，是機(jī)體的主要能量物質(zhì)，人體約70%的熱量來源于血液中循環(huán)的游離脂肪酸。有大量研究顯示，過高的游離脂肪酸導(dǎo)致的高游離脂肪酸血癥與代謝綜合征、動脈粥樣硬化、急性冠脈綜合征、心力衰竭等疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[1]。由于脂肪酶的代謝作用，其濃度隨放置時間的延長而逐漸升高，因此保證結(jié)果的準(zhǔn)確性除了加強(qiáng)檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制外，檢驗(yàn)前過程也是影響檢測結(jié)果的重要因素，現(xiàn)就檢驗(yàn)前過程的一些影響因素進(jìn)行分析以期規(guī)范工作流程。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)抽取住院患者新鮮血清標(biāo)本18例，其中男性13例，女性5例，平均年齡51.9歲。

1.2儀器與試劑 奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀，一次性真空采血管（含促凝劑），游離脂肪酸檢測試劑盒由北京九強(qiáng)生物科技有限公司提供（批號：14-0312P），校準(zhǔn)品為朗道CAL2350（批號：828UN）。

1.3方法 標(biāo)本抽取完畢后立即以4000r/min在4℃低溫下離心5min，并即時測量其游離脂肪酸濃度；每一份患者標(biāo)本均分別吸取100ul樣品共10份，分別置于0.5mL規(guī)格的冷凍管中，其中兩份樣品即時保存于-20℃冷凍冰箱內(nèi)分別放置24h、48h；其余8份分別在4℃、20℃狀態(tài)下放置4h、8h、24h、48h，待達(dá)到放置時間后即時測量。其中4℃環(huán)境：標(biāo)本存放于冰箱冷藏柜，溫度設(shè)置為4℃；20℃環(huán)境：標(biāo)本存放于生化實(shí)驗(yàn)室，空調(diào)溫度設(shè)置為20℃，實(shí)驗(yàn)期間空調(diào)處于不間斷運(yùn)行狀態(tài)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 各組所測得的游離脂肪酸結(jié)果以（x±s）表示，用t檢驗(yàn)方式分析標(biāo)本放置時間和處理方式對游離脂肪酸濃度的影響，所有統(tǒng)計分析采用軟件SPSS19.0進(jìn)行。

2 結(jié)果

由表1可見，4℃下放置4h后血清游離脂肪酸濃度與即時游離脂肪酸濃度結(jié)果之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=-1.683，P>0.05），而放置8h、24h、48h后與即時游離脂肪酸濃度結(jié)果之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；20℃室溫下放置4h、8h、24h、48h血清游離脂肪酸濃度與即刻檢測結(jié)果比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），血清濃度隨時間的延長有明顯升高。-20℃冷凍條件下放置24h后血清游離脂肪酸濃度與即時結(jié)果之間差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），而放置48h后與即時濃度之間有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。

3 結(jié)論

游離脂肪酸（FFA）是指血清中未與甘油、膽固醇等酯化的脂肪酸，又稱非酯化脂肪酸（NEFA）或未酯化脂肪酸，正常情況下，血漿中含量極少，僅占總脂肪酸含量的5%～10%，在血漿中半衰期2～3min，主要與血清蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)到全身組織利用。

血中游離脂肪酸可反映人體脂肪代謝情況及血脂水平，胰島素、促?；鞍住⑦^氧化物酶增殖因子激活受體γ、脂聯(lián)素和泛酸等因素會導(dǎo)致NEFA水平降低；腫瘤壞死因子α、兒茶酚胺類激素、白細(xì)胞介素-6和瘦素會導(dǎo)致NEFA水平升高[2]。研究表明，F(xiàn)FA病理性升高會造成細(xì)胞和組織毒性[3]，并且血清中FFA的含量與胰島素抵抗呈正相關(guān)性，可直接導(dǎo)致胰島β細(xì)胞凋亡[4]。由于FFA與各種代謝性疾病的密切聯(lián)系，其在相關(guān)研究中的地位也日益重要。

本研究結(jié)果顯示，室溫下放置4h、8h、24h、48h血清游離脂肪酸濃度與即刻檢測結(jié)果比較有統(tǒng)計學(xué)差異；4℃下放置4h血清游離脂肪酸濃度與即刻結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，而放置8h、24h、48h后均明顯升高，-20℃冷凍條件下放置24h后血清游離脂肪酸濃度與即時結(jié)果之間無統(tǒng)計學(xué)差異，而放置48h后與即時濃度之間有統(tǒng)計學(xué)差異。同時，血清標(biāo)本于-20℃下可保存24h，與廠家提供的試劑說明書描述一致。

由此，對于游離脂肪酸標(biāo)本應(yīng)在抽取后及時離心，并即時檢測；若不能即時檢測，則需保存在4℃下于4h內(nèi)檢測完畢，或在-20℃下保存24h，以減少脂肪酶代謝的影響，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/周蕓霏