苗藥狹葉崖爬藤的抗菌活性研究

摘要：目的 探討苗藥狹葉崖爬藤提取物對(duì)表皮葡萄球菌的抗菌活性。方法 采用中藥抑菌實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)狹葉崖爬藤提取物進(jìn)行98株表皮葡萄球菌的最低抑菌濃度（MIC）檢測(cè)。結(jié)果 狹葉崖爬藤提取物對(duì)208株表皮葡萄球菌中的55株耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）與43株耐甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）的最低抑菌濃度分別為1185 μg/ml、286 μg/ml。結(jié)論 苗藥狹葉崖爬藤具有較強(qiáng)的抑菌作用。

關(guān)鍵詞：苗藥；狹葉崖爬藤；表皮葡萄球菌；抗菌活性

Abstract：Objective To study the antibacterial activity of Tetrastigma Serrulatum extracts on the staphylococcus epidermidis.Methods The bacteriostasis of TCM was tested.The MIC（minimal inhibitory concentration）of Tetrastigma Serrulatum extracts for 98 strains of staphylococcus epidermidis was detected.Results The MIC for 55 strains of MRSE and 43 strains of MSSE was1185μg/ml and 286μg/ml（P<0.05）.Conclusion The Tetrastigma Serrulatum has a stronger bacteriostasis effect.

Key words：Miao Ethnic medicine；Tetrastigma Serrulatum；Staphylococcus epidermidis；Antibacterial activity

表皮葡萄球菌是臨床感染中最為多見的一種病原菌，屬于革蘭陽(yáng)性球菌，研究表明其在臨床標(biāo)本中的分離率高達(dá)50%～80%[1]。目前，我國(guó)抗菌類藥物的使用存在濫用情況，導(dǎo)致耐甲氧西林表皮葡萄球菌對(duì)多種抗菌類藥物存在耐受性。苗藥狹葉崖爬藤又名五爪金龍，來(lái)源于葡萄科植物崖爬藤的全株，其性溫、味辛，歸冷、熱二經(jīng)，在貴州苗族民間常用于治療風(fēng)寒濕痹、瘀血內(nèi)停、高血壓等心臟等慢性疾病[2]。有研究顯示，苗藥狹葉崖爬藤具有降低炎癥因子水平的作用[3]。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1抗菌藥物 苗藥狹葉崖爬藤、青霉素、氨芐西林等。

1.1.2病原菌菌種 表皮葡萄球菌共98株，其中耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）55株，耐甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）43例。所有病原菌均制備成0.5麥?zhǔn)蠁挝痪捍谩?/p>

1.2方法

1.2.1苗藥狹葉崖爬藤提取液制備方法 采用水提醇沉法提取苗藥狹葉崖爬藤的有效成分，然后將提取液制備成1 g/ml的藥液。采用0.45 μm微孔濾膜對(duì)藥液進(jìn)行濾過(guò)，進(jìn)行滅菌后待用。

1.2.2藥液稀釋方法 取無(wú)菌試管10支并分別標(biāo)號(hào)，其中第2～10支無(wú)菌試管內(nèi)加入滅菌蒸餾水10 ml。取滅菌的苗藥狹葉崖爬藤提取液20 ml，第1～2支無(wú)菌試管內(nèi)分別加入10 ml。充分搖勻第2支試管，然后取出混合液10 ml加入第3支試管內(nèi)。充分搖勻第3支試管，然后取出混合液10 ml加入第4支試管內(nèi)。通過(guò)上述連續(xù)稀釋方法至第9支試管，棄掉第9支試管內(nèi)取出的10 ml混合液。第10支試管再次加入10 ml滅菌蒸餾水作為對(duì)照。

1.2.3平板制備方法 取無(wú)菌M-H瓊脂900 ml，將其溶化后分別加入10瓶標(biāo)號(hào)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶90 ml。將第1支含有10 ml 25%苗藥狹葉崖爬藤提取液置入第1瓶培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在充分混合后傾注4個(gè)平板，每個(gè)平板含有瓊脂25 ml，后續(xù)平板制備方法同上。第1組平板含苗藥狹葉崖爬藤1∶40，第2組為1∶80，第3組為1∶160，依此類推。

1.2.4培養(yǎng)基藥物濃度計(jì)算方法 將50 ml苗藥狹葉崖爬藤提取物按照1∶4比例置于37℃溫箱內(nèi)進(jìn)行烘干并稱重，然后得到每1 ml苗藥狹葉崖爬藤提取物的實(shí)際重量，并進(jìn)而得到每1 ml培養(yǎng)基中苗藥狹葉崖爬藤提取物的干重量。根據(jù)上述計(jì)算方法，第1組苗藥狹葉崖爬藤提取物的干重為9500 μg/ml，第2組為4750 μg/ml，第3組為2370 μg/ml，以此類推。

1.2.5檢測(cè)方法 采用多點(diǎn)接種儀分別吸取各種菌液并點(diǎn)種于含不同藥物濃度的瓊脂平板上，然后在35℃環(huán)境中培養(yǎng)24 h，并觀察最低抑菌濃度（MIC）。另外，分別統(tǒng)計(jì)MIC 50與MIC 90藥物濃度以及濃度累積抑菌百分率。

1.2.6最低抑菌濃度檢測(cè)方法 采用M-H瓊脂檢測(cè)青霉素以及氨芐西林，并對(duì)98株表皮葡萄球菌的最低抑菌濃度進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1最低抑菌濃度檢測(cè)結(jié)果 55株MRSE中，對(duì)青霉素、氨芐西林的耐藥率分別為100.00%（55/55）、70.91%（39/55）；43株MSSE中，對(duì)青霉素、氨芐西林的耐藥率分別為58.14%（25/43）、65.12%（28/43），見表1。

2.2苗藥狹葉崖爬藤抑菌效果分析 苗藥狹葉崖爬藤對(duì)MRSE的MIC50以及MIC90分別為286.0 μg/ml、1185.0 μg/ml，對(duì)MSSE的MIC50以及MIC90分別為143.0 μg/ml、286.0 μg/ml，見表2。對(duì)表皮葡萄球菌濃度累積抑菌率，見表3。

3 討論

目前研究顯示[4-6]，苗藥狹葉崖爬藤地上部分可以分離初10個(gè)化合物，分別為8-谷甾醇，棕櫚酸、正二十五烷、胡蘿卜苷、白藜蘆醇、沒食子酸、沒食子酸乙酯、兒茶素、7-氧-沒食子?；?兒茶素、3，3-二甲氧基鞣花酸-4-氧-葡萄糖苷[7-8]?，F(xiàn)代藥理研究已經(jīng)證實(shí)，谷甾醇、白藜蘆醇、沒食子酸、沒食子酸乙酯以及兒茶素等均具有不同程度的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用[9-10]。

本研究對(duì)苗藥狹葉崖爬藤的體外抑菌作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)本研究，能夠?yàn)槊缢帾M葉崖爬藤的臨床抗菌應(yīng)用提供理論依據(jù)。

綜上所述，MRSE與MMSE對(duì)青霉素以及氨芐西林的耐藥性均較高，而苗藥狹葉崖爬藤具有較強(qiáng)的抑菌作用。

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