豫西脂尾羊的血清酯酶與體尺性狀的關聯(lián)分析

摘要：運用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術（PAGE）對豫西脂尾羊血清酯酶（Es）的多態(tài)性進行檢測和分析。結果表明，在豫西脂尾羊上Es基因座有2個等位基因即Es+和Es-，而且Es+和Es-的基因頻率別為0.55和0.45，有3種基因型Es+ +、Es+ -、Es- -，其頻率分別為0.425、0.250和0.325。不同基因型西清酯酶對體尺的影響結果表明，在薦高方面，Es+ +基因型顯著高于Es+-基因型（P<0.05），而兩者均與Es- -基因型沒有顯著差異（P>0.05）。在胸圍方面，Es+ +基因型極顯著高于Es--基因型（P<0.01），而兩者均與Es+ -基因型的胸圍沒有顯著差異（P>0.05）。Es對其他指標都無顯著影響（P>0.05）。

關鍵詞：豫西脂尾羊；血清酯酶；多態(tài)性

中圖分類號：S826.8+9 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）11-2846-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.033

豫西脂尾羊在動物分類學中屬?？粕窖騺喛疲–aprovinae）綿羊屬（Ovis）[1]，系蒙系綿羊，源于中亞和遠東地區(qū)，經(jīng)過豫西人們長期馴化選育而成，因脂尾呈橢圓形，尾尖緊貼尾溝，將尾分為兩瓣，下垂于飛節(jié)之上；主要分布在原洛陽地區(qū)和原南陽地區(qū)北部，以臨汝縣最多，方城縣次之，故定名為“豫西脂尾羊”。血液蛋白及同工酶多態(tài)性可用于研究畜禽品種遺傳結構，探索品種的起源分化，親緣關系[2]以及與經(jīng)濟性狀的相關性，早期檢測選種，縮短世代間隔，是血液生化遺傳標記的最常用指標，在動物遺傳標記領域一直占有十分重要的地位，對品種資源的保存和利用不但提供了有力的工具、有效的方法和豐富的研究資料等理論指導意義，而且在生產上有現(xiàn)實的使用價值[3]。目前，張才駿等[4，5]、馬海明等[6]、楊永新等[7]、臧榮鑫等[8]對優(yōu)良品種綿羊血液蛋白多態(tài)性進行了研究。楊俊年[9]、楊慈清等[10]研究表明，血清酯酶的多態(tài)性與綿羊生產性能有一定相關性。本研究主要對豫西脂尾羊血清酯酶的多態(tài)性進行分析，這對于揭示豫西脂尾羊的種質特性、親緣關系、品種起源、進化歷程等方面均有重要的學術價值，為豫西脂尾羊的選育提高和保種提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

采集40只純種豫西脂尾羊的新鮮血樣5 mL/只，肝素抗凝，低溫帶回實驗室，室溫下以1 500 r/min離心20 min，將上層血漿吸入滅菌小瓶，貼好標簽置于-20 ℃的冰柜中保存。體尺測量包括體長、體高、薦高、胸圍、胸深、胸寬、管圍，測量均參考《家畜育種學》的方法測定[11]。

1.2 方法

按楊廣禮[12]的方法制備凝膠，酯酶測定所用凝膠為8%分離膠和3.5%濃縮膠，淀粉酶測定所用凝膠為7.5%分離膠和4%濃縮膠，凝膠的配制成分及用量見表1。以160 V的電壓進行15 min的預電泳，然后穩(wěn)壓200 V開始正式電泳，酯酶2.5～3.0 h，淀粉酶4.0～4.5 h。

血清酯酶：將電泳后的凝膠用蒸餾水漂洗后，放入酯酶的染色液（a-乙酸萘酯和β-乙酸萘酯各200 mg分別溶于10 mL丙酮和20 mL 0.15 mol/L的pH 7.5的磷酸緩沖液中，用前各取上清液10 mL再加入100 mg固藍RR鹽，用0.15 mol/L的磷酸緩沖液定容至100 mL），在37 ℃保溫20 min，取出凝膠用無離子水沖洗，酶帶呈紫色和褐色。置入7%的乙酸中保存。對Es的判型是按文獻[13，14]的方法進行。即：在15 min以內出現(xiàn)褐色區(qū)帶的為Es+ +型，雖然出現(xiàn)褐色區(qū)帶但較模糊的為Es+ -，出現(xiàn)紫紅色活性區(qū)帶的為Es- -。

2 結果與分析

2.1 血清酯酶（Es）

血清酯酶（Es）在豫西脂尾羊中存在多態(tài)性，根據(jù)顯帶顏色將其判定為Es+ +、Es+ -和Es- -。血清酯酶3種基因型Es+ +、Es+ -、Es- -的基因型頻率分別為0.425、0.250、0.325；血清酯酶有2個等位基因Es+和Es-，Es+和Es-的基因頻率分別為0.55、0.45。豫西脂尾羊Es基因型頻率和基因頻率見表2，可見Es+基因是豫西脂尾羊的優(yōu)勢基因，其頻率為0.55。而Es+ +基因型是豫西脂尾羊的優(yōu)勢基因型，其頻率為0.425。

2.2 血清酯酶多態(tài)與體尺性狀的關系

豫西脂尾羊的不同基因型血清酯酶對體尺指標（體長、體高、薦高、胸圍、胸深、胸寬、管圍）的影響結果見表3，不同基因型血清酯酶除了對薦高和胸圍有顯著影響外，對其他指標都無顯著影響（P>0.05）。在薦高方面，Es+ +基因型顯著高于Es+ -基因型，而兩者均與Es- -基因型的薦高（61.00）沒有顯著差異。在胸圍方面，Es+ +基因型極顯著高于Es- -基因型，而兩者均與Es+ -基因型沒有顯著差異。

3 討論

酯酶有羧基酯酶、膽堿酯酶和芳基酯酶3種酯酶，但只有芳基酯酶（Arylesterase，Es）存在多態(tài)性[10]，因此，豫西脂尾羊血清酯酶指芳基酯酶。按照張才俊等[4]的研究結果，根據(jù)Es的基因頻率可將綿羊分為兩大類：一類是Es-占有絕對優(yōu)勢，其Es-基因頻率在0.8～1.0之間；另一類的Es+和Es-基因頻率大致相等，豫西脂尾羊的Es-基因頻率是0.45，故應屬于后一類綿羊。楊廣禮[12]研究發(fā)現(xiàn)，Es在甘肅藏羊和小尾寒羊中的表型均為Es+ +、Es+ -、Es- -，該位點受一對共顯性等位基因Es+、Es-控制，在甘肅藏羊中Es- -為優(yōu)勢基因型，頻率為0.370 4，小尾寒羊中以Es- -為優(yōu)勢基因型，其頻率為0.459 2。甘肅高山細毛羊、青海細毛羊、青海藏羊以Es+ -為優(yōu)勢基因型，而灘羊以Es+ +為優(yōu)勢基因型。如果以優(yōu)勢基因計算的話，小尾寒羊、青海細毛羊以Es-為優(yōu)勢基因；而甘肅高山細毛羊、青海藏羊、甘肅藏羊、灘羊以Es+為優(yōu)勢基因。在本研究中，Es在豫西脂尾羊中以Es+為優(yōu)勢基因，因此作為一個群體與其他群體不同的特殊蛋白位點，這與張慧茹等[15]的研究結果相一致。

楊俊年[9]和楊慈清等[10]研究表明，小尾寒羊Es+ +型的產羔數(shù)顯著（P<0.05）高于Es- -型和Es+ -型。而本研究與以上研究有相似的結果，從豫西脂尾羊的不同基因型血清酯酶對體尺指標和產羔數(shù)的影響中可以看出，按照Es- -、Es+ -、Es+ +的順序，第一胎次產羔數(shù)、第二胎次產羔數(shù)、第三胎次產羔數(shù)表現(xiàn)為增加趨勢，但是不同基因型血清酯酶對產羔數(shù)無顯著影響（P>0.05）。不同基因型血清酯酶除了對薦高和胸圍有顯著影響（P<0.05）外，對其他體尺指標都無顯著影響（P>0.05）。Es+ +基因型的薦高顯著高于Es+ -基因型的薦高（P<0.05），而兩者均與Es- -基因型的薦高沒有顯著差異（P>0.05）。Es+ +基因型的胸圍顯著高于Es- -基因型的胸圍（P<0.05），而兩者均與Es+ -基因型的胸圍沒有顯著差異（P>0.05）。

參考文獻：

[1] 涂友仁，蔣 英，馮維棋，等.中國羊品種志[M].上海：上?？茖W出版社，1988.

[2] 陳周田，尹君亮，朱桂芝，等.阿墾肉用細毛羊血紅蛋白多型性研究[J].新疆農業(yè)科學，1993（4）：171-173.

[3] 曹杯森，李金林，王輝暖，等.洼地綿羊血液蛋白HB和TF多胎性研究[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2001（4）：8-10.

[4] 張才駿，張武學，劉從明.引入青海的新疆細毛羊生化遺傳多態(tài)性的研究[J].青海畜牧獸醫(yī)學院學報，1995，12（1）：10-13.

[5] 張才駿，王 勇，盧 福.拉羊血清酯酶多態(tài)性及其與血液指標的聯(lián)系[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志，2009，39（1）：1-3.

[6] 馬海明，門正明，韓建林.蘭州大尾羊血清淀粉酶、脂酶及蘋果酸脫氫酶同工酶的研究[J].甘肅農業(yè)大學學報，2002，37（4）：442-446.

[7] 楊永新，崔泰保，鄢 珣，等.小尾寒羊血清酯酶（Es）多態(tài)性的研究[J].甘肅農業(yè)大學學報，2004，39（5）：475-477.

[8] 臧榮鑫，楊具田，徐紅偉，等.蘭州大尾羊血液蛋白（酶）多態(tài)性的研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2010（2）：21-23.

[9] 楊俊年.小尾寒羊血液蛋白（酶）位點上多胎性的比較研究[J].安徽農業(yè)科學，2007，35（33）：10626-10627.

[10] 楊慈清，李小英.小尾寒羊血清酯酶多態(tài)性及其與產羔性能關系的研究[J].安徽農業(yè)科學，2009，37（9）：4149-4150.

[11] 張 沅.家畜育種學[M].北京：中國農業(yè)出版社，2001.

[12] 楊廣禮.綿羊多胎性的研究與利用[D].蘭州：甘肅農業(yè)大學，2004.

[13] 鈴木正三.比較血型學[M].程光潮，韓建林，楊華林，等，譯.北京：中國科學技術出版社，1991.

[14] 楊廣禮，羅玉柱.小尾寒羊血液蛋白多態(tài)性與多羔性研究[J].甘肅農業(yè)大學學報，2004，39（4）：381-385.

[15] 張慧茹，魏智清，于洪川，等.寧夏灘羊血清酯酶同工酶與雙羔性能的研究[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，1999，29（5）：9-10.