趙麗娜,徐國(guó)輝,呂杰凱,高雄梅,,王賀新*,王麗金,侯義龍,劉國(guó)玲,胡春丹
(1.大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,遼寧大連 116622;2.大連大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究院,遼寧大連 116622;3.大連森茂現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司,遼寧大連 116112;4.北京工商大學(xué)食品學(xué)院,北京 100048;5.哈爾濱師范大學(xué)圖書(shū)館,哈爾濱 150080)
高叢藍(lán)莓自然雜交優(yōu)良品系篩選
趙麗娜1,徐國(guó)輝2,呂杰凱1,高雄梅2,3,王賀新2*,王麗金4,侯義龍1,劉國(guó)玲3,胡春丹5
(1.大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,遼寧大連 116622;2.大連大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究院,遼寧大連 116622;3.大連森茂現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司,遼寧大連 116112;4.北京工商大學(xué)食品學(xué)院,北京 100048;5.哈爾濱師范大學(xué)圖書(shū)館,哈爾濱 150080)
研究采用多品種混合自然雜交快速育種方式,通過(guò)植株長(zhǎng)勢(shì)和果實(shí)品質(zhì)等特征初選10個(gè)北高叢藍(lán)莓自然雜交品系(SMN-72、SMN-86、SMN-234、SMN-291、SMN-339、SMN-350、SMN-351、SMN-460、SMN-461、SMN-470),進(jìn)一步通過(guò)模糊數(shù)學(xué)多因素綜合評(píng)價(jià)法分析供試雜交品系單果重、果硬度、含糖量、含酸量等10個(gè)果實(shí)性狀指標(biāo)。結(jié)果表明,雜交品系SMN-72、SMN-86、SMN-291、SMN-350和SMN-351評(píng)判值較高(>0.55),不僅果實(shí)品質(zhì)優(yōu)良,耐貯藏,可長(zhǎng)途運(yùn)輸,綜合性狀表現(xiàn)良好,可作為優(yōu)良品種推出;SMN-234、SMN-339、SMN-460和SMN-461評(píng)判值中等(0.35~0.55),但某些性狀表現(xiàn)良好,可作為備用優(yōu)良種質(zhì)資源;SMN-470評(píng)判值偏低,果實(shí)小而軟,內(nèi)含物較少,綜合性狀表現(xiàn)差,可以淘汰。綜上所述,試驗(yàn)選出5個(gè)優(yōu)良雜交品系,可為其申報(bào)新品種奠定前期基礎(chǔ)。
藍(lán)莓;雜交育種;優(yōu)良品系;篩選
藍(lán)莓為杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vaccinium spp.)植物,小漿果類(lèi)果樹(shù)代表[1]。其果實(shí)內(nèi)含有花青苷等抗氧化物質(zhì),具有特殊營(yíng)養(yǎng)、保健與醫(yī)用價(jià)值[2]。藍(lán)莓果實(shí)中的花青苷Dp(飛燕草素)可被血管內(nèi)皮細(xì)胞吸收,避免內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷,Cy(矢車(chē)菊素)可通過(guò)多種途徑改善人體細(xì)胞內(nèi)脂代謝紊亂,Mv(錦葵素)具有軟化血管和促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)等功能[3]。另外果實(shí)中的黃酮醇(如槲皮素、山柰酚、楊梅酮)和白藜蘆醇等酚類(lèi)物質(zhì),具有強(qiáng)抗氧化、抗癌等作用[4-7]。多酚類(lèi)化合物為促進(jìn)健康的次生代謝物,天然酚類(lèi)化合物已應(yīng)用于心血管疾病、癌癥、眼保健和延緩衰老等方面[8-12]。
藍(lán)莓開(kāi)發(fā)研究在美國(guó)已有100多年歷史,相關(guān)研究較深入。我國(guó)藍(lán)莓引進(jìn)歷史較短,目前研究也主要集中在資源調(diào)查、栽培生產(chǎn)、結(jié)果習(xí)性、生長(zhǎng)環(huán)境分析以及生態(tài)等方面,藍(lán)莓新品種選育方面研究較少[13]。我國(guó)現(xiàn)階段栽培藍(lán)莓品種主要引種于美國(guó),其中大多數(shù)是幾十年前推出品種,目前很多已被淘汰。近年來(lái),以美國(guó)為主的北美、歐洲及新西蘭等國(guó)家加大藍(lán)莓育種力度,不斷推出極具產(chǎn)業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的新品種,但這些新品種幾乎全部申請(qǐng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù),正常途徑很難引進(jìn)。開(kāi)發(fā)具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)藍(lán)莓新品種,有利于提高我國(guó)藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。藍(lán)莓新品種選育方法多樣,多品種混合自然雜交方式更便利、快捷,雜交后代表型具有多樣性,更符合自然規(guī)律。
本研究以前期積累的北高叢藍(lán)莓自然雜交品系為材料,在樹(shù)勢(shì)、果實(shí)品質(zhì)等特征選擇基礎(chǔ)上,利用模糊數(shù)學(xué)綜合評(píng)價(jià)法綜合分析初選品系形態(tài)學(xué)和果實(shí)品質(zhì)特征,進(jìn)一步精選出優(yōu)良藍(lán)莓自然雜交品系,為開(kāi)發(fā)具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)藍(lán)莓新品種及選育優(yōu)良藍(lán)莓育種材料奠定基礎(chǔ)。
1.1 材料
試驗(yàn)材料由前期多品種混合自然雜交快速育種方式獲得,利用長(zhǎng)勢(shì)和果實(shí)品質(zhì)等特征初選10個(gè)7年生、生長(zhǎng)環(huán)境相同品系。由大連森茂現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司藍(lán)莓育種基地提供。
1.2 方法
1.2.1 高叢藍(lán)莓自然雜交優(yōu)良品系植株形態(tài)學(xué)特征鑒定
①高度:采用塔尺測(cè)定樹(shù)木高度;
②葉面積:選取成熟且長(zhǎng)勢(shì)完整葉片采摘掃描,要求每張圖像單位像素、寬度和高度等參數(shù)一致,應(yīng)用Image-Pro Plus軟件測(cè)量分析,獲得葉面積相對(duì)平均值。每個(gè)品種掃描30個(gè)葉片。
1.2.2 高叢藍(lán)莓自然雜交優(yōu)良品系果實(shí)品質(zhì)特征鑒定
待果實(shí)成熟時(shí),摘取果實(shí),分為兩份,一份用于果實(shí)外觀品質(zhì)特征鑒定,另一份-20℃存放,用于果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)鑒定。
①單果重:隨機(jī)選取20個(gè)果實(shí)用千分位電子天平稱(chēng)重,計(jì)算平均值;
②果硬度:隨機(jī)選取10個(gè)果實(shí),用GY-4硬度計(jì)測(cè)量,計(jì)算平均值;
③果實(shí)尺寸:隨機(jī)選取20個(gè)果實(shí)掃描,要求每張圖像單位像素、寬度和高度等參數(shù)一致,應(yīng)用Image-Pro Plus軟件測(cè)量分析,獲得對(duì)應(yīng)樣本果實(shí)直徑、高度等參數(shù)平均值。
④耐貯性:室溫條件(25℃)下,根據(jù)儲(chǔ)存時(shí)間分為長(zhǎng)(5 d以上)、中(3~5 d)、短(1~2 d)3個(gè)等級(jí),分別賦值3、2、1。
⑤果粉:多人觀察,根據(jù)果粉厚、中等、薄,綜合評(píng)定,分別賦值3、2、1。
⑥總糖(以葡萄糖計(jì))含量測(cè)定:蒽酮比色法[14-15]。
⑦總酸(以檸檬酸計(jì))含量測(cè)定:指示劑法[16]。
⑧花青苷和其他類(lèi)黃酮化合物測(cè)定:雜交品系果實(shí)花青苷及其他類(lèi)黃酮含量測(cè)定參照Wang等方法[17]?;ㄇ嘬斩ㄐ苑治霾捎酶咝б合嗌V-光電二極管陣列檢測(cè)(High-performance liquid chromatography-photodiode array detector,HPLC-DAD)和高效液相色譜-電噴霧離子化-質(zhì)譜(HPLC-ESI-M2)方法,花青苷定量測(cè)量采用外標(biāo)半定量法。
1.2.3 高叢藍(lán)莓自然雜交優(yōu)良品系篩選
利用模糊數(shù)學(xué)多因素綜合評(píng)價(jià)法[18],綜合評(píng)判影響藍(lán)莓雜交品系優(yōu)良性重要指標(biāo),并根據(jù)評(píng)判結(jié)果對(duì)雜交品系優(yōu)劣性排序。設(shè)評(píng)判指標(biāo)集O= {o1,o2,...,on},樣本集P={p1,p2,...,pm},因素權(quán)重集Q={q1,q2,…,qn},各品系性狀原始數(shù)據(jù)經(jīng)公式標(biāo)準(zhǔn)化處理后,得到綜合評(píng)判的模糊矩陣A=qijrij,評(píng)判結(jié)果B等于各品系A(chǔ)值之和。各因素權(quán)重,由多位藍(lán)莓育種專(zhuān)家根據(jù)藍(lán)莓品系各關(guān)鍵評(píng)判指標(biāo)重要性給予賦值,最終確定。
其中,Oij為第i個(gè)樣本第j個(gè)性狀值;
max(Oij)為i個(gè)品系中第j個(gè)性狀最大值;
min(Oij)為i個(gè)品系中第j個(gè)性狀最小值。
2.1 藍(lán)莓自然雜交優(yōu)良品系形態(tài)學(xué)特征鑒定
本試驗(yàn)考查10個(gè)自然雜交品系及母本植株長(zhǎng)勢(shì),并對(duì)植株樹(shù)高、樹(shù)冠類(lèi)型、冠幅等形態(tài)特征記錄分析。10個(gè)品系樹(shù)勢(shì)表現(xiàn)優(yōu)良。樹(shù)冠類(lèi)型包括直立、半開(kāi)張、開(kāi)張三種類(lèi)型。10個(gè)雜交品系中,6個(gè)品系樹(shù)冠類(lèi)型與母本相同,分別為SMN-72、SMN-291、SMN-339、SMN-351、SMN-460、SMN-470,其余4個(gè)與母本樹(shù)冠類(lèi)型不同,其中SMN-86、SMN234、SMN-461樹(shù)冠為開(kāi)張型,其母本‘日出’‘藍(lán)豐’‘晚藍(lán)’均是直立型,SMN-350樹(shù)冠為直立型,其母本‘陶柔’卻為半張開(kāi)型。雜交品系樹(shù)高相對(duì)母本而言,變化不一,有高于母本的,也有低于母本的,例如母本‘愛(ài)國(guó)者’三個(gè)雜交品系,SMN-72(100 cm)和SMN-339(127 cm)平均樹(shù)高均高于母本,而SMN-291(90 cm)樹(shù)高卻低于母本;大部分品系植株冠幅比母本寬,東西冠幅是37~115 cm,南北冠幅是40~100 cm;10個(gè)雜交品系葉片特征與母本相比差異較大(見(jiàn)圖1),葉面積變化范圍是6.32~13.35 cm2,葉面積最大品系是SMN-86,為12.53 cm2,比其母本‘日出’大3.33 cm2;葉面積最小是SMN-470,為5.52 cm2,和母本‘藍(lán)港’差別較小,為0.22cm2。
圖1 10個(gè)自然雜交品系及母本葉片F(xiàn)ig.1Leaves of ten hybrid strains and their female plants
2.2 高叢藍(lán)莓自然雜交品系及母本果實(shí)品質(zhì)特征鑒定
2.2.1 果實(shí)外觀品質(zhì)鑒定
本研究通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn),藍(lán)莓自然雜交品系及母本果實(shí)尺寸、果粉厚度各不相同(見(jiàn)圖2、3)。SMN-86、SMN-234、SMN-291、SMN-350果粉較厚,呈亮藍(lán)色;SMN-72、SMN-339、SMN-351、SMN-461、SMN-470果粉相對(duì)較薄,果實(shí)呈深藍(lán)色;SMN-460果實(shí)幾乎沒(méi)有果粉,果實(shí)呈藍(lán)紫色,遠(yuǎn)看其果簇,與葡萄相似。
圖2 10個(gè)藍(lán)莓雜交品系果實(shí)Fig.2Fruits of ten blueberry hybrid strains
圖3 10個(gè)藍(lán)莓雜交品系及母本果實(shí)比較Fig.3Fruits comparison of ten hybrid strains and their female plants
供試雜交品系與其母本果實(shí)外觀特征比較見(jiàn)表1,結(jié)果表明,雜交品系果重和果硬度均優(yōu)于各自母本,而果實(shí)形狀則表現(xiàn)不同,有的與母本相似,有的差別明顯。
選自栽培品種‘愛(ài)國(guó)者’3個(gè)雜交品系SMN-72,SMN-291,SMN-339平均單果重、最大果重均超出‘愛(ài)國(guó)者’很多,其中SMN-72最為突出,平均果重為4.49 g,最大果重為6.55 g,幾乎是‘愛(ài)國(guó)者’2倍,SMN-291次之,分別為3.79和4.51g。‘愛(ài)國(guó)者’果實(shí)硬度為3.31 N,屬于中硬度,而SMN-72、SMN-291、SMN-339硬度均較大,SMN-72硬度最大(4.11 N)。根據(jù)果形指數(shù)可知‘愛(ài)國(guó)者’為近圓形,而SMN-72、SMN-291、SMN-339均為扁圓形?!異?ài)國(guó)者’果粉較厚,耐貯性較好,SMN-72和SMN-339果粉一般,耐貯性較好;SMN-291果粉較厚,耐貯性一般。而選自栽培品種‘日出’的SMN-86平均單果重、最大果重與母本相差較大,最大果重是母本平均果重的1.92倍,果實(shí)硬度也較母本大,形狀與母本相同,為近圓形,果粉較厚,耐貯性與母本相同。選自栽培品種‘藍(lán)光’的SMN-351雖然果粉、耐貯性及果硬度均與其母本差別較小,但單果重與最大果重均比母本高出1.5倍,特性?xún)?yōu)良且突出?!~’是小果型栽培品種,而其雜交后代SMN-460在最大果重及單果重方面表現(xiàn)優(yōu)秀。其他‘藍(lán)豐’‘藍(lán)港’‘陶柔’‘晚藍(lán)’各自后代SMN-234、SMN-470、SMN-350、SMN-460在單果重及最大果重方面均優(yōu)于其母本。
表1 10個(gè)藍(lán)莓雜交品系及其母本果實(shí)外觀特征Table 1Morphological characteristics of ten hybrid strains and their female fruits
2.2.2 果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)鑒定
雜交品系及其母本果實(shí)中共檢測(cè)到24種花青苷組分(圖4為部分雜交品系花青苷HPLC結(jié)果),分屬于5類(lèi)(見(jiàn)表2),Dp(4種)、Cy(4種)、Pt(6種)、Pn(3種)和Mv(7種),以Dp型和Mv型色素為主,二者之和約占總花青苷50.48%~80.35%。整體來(lái)看,Pn型色素含量普遍偏低,除‘愛(ài)國(guó)者’達(dá)到總花青苷含量的3.01%,其余品種均小于3%;Cy型和Pt型相對(duì)含量相差較小,除‘藍(lán)光’和SMN-351、‘藍(lán)豐’和SMN-234、‘陶柔’和SMN-350的Cy型色素為3.14~5.13外,其余品種Cy型和Pt型均保持在總花青苷的13.46%~29.73%。
2.3 利用模糊數(shù)學(xué)多因素綜合評(píng)價(jià)法篩選藍(lán)莓優(yōu)良品系
通過(guò)測(cè)定和分析,獲得藍(lán)莓自然雜交品系各性狀原始數(shù)據(jù),根據(jù)模糊數(shù)學(xué)多因素綜合評(píng)價(jià)原理,將影響雜交品系10個(gè)重要指標(biāo)(樹(shù)高、葉面積、總糖含量、總酸含量、類(lèi)黃酮總含量等)原始數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理,經(jīng)矩陣運(yùn)算得到品系綜合評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表4。品系評(píng)判值越大,綜合性狀越好,并按其綜合性分值排序。據(jù)此,可將供試品系分為3類(lèi):
第一類(lèi)包括SWN-72、SWN-86、SMN-291、SMN-350和SMN-351,評(píng)判值在0.55以上,這些品系特點(diǎn)是植株生長(zhǎng)旺盛、果實(shí)飽滿(mǎn)、果形大、果粉厚,顏色亮麗、香味濃郁,含有豐富花青苷等類(lèi)黃酮化合物,果實(shí)硬度較大,耐貯藏,可作為優(yōu)良品系推廣種植。
圖4 四個(gè)藍(lán)莓雜交品系(SMN-72,86,291,339)花青苷HPLCFig.4Anthocyanin HPLC of four blueberry hybrid strains
表2 10個(gè)雜交品系和其母本果實(shí)中花青苷相對(duì)含量和總花青苷含量Table 2Contents of anthocyanins in fruit of ten hybrid strains and their female plants
表3 10個(gè)藍(lán)莓自然雜交品系和其母本果實(shí)中其他類(lèi)黃酮相對(duì)含量及總含量Table 3Contents of other flavonoids in female plants and their ten hybrid strains
表4 雜交品系綜合評(píng)判結(jié)果Table 4Comprehensive evaluation results of hybrid strains
續(xù)表
第二類(lèi)包括SMN-234、SMN-339、SMN-460和SMN-461,評(píng)判值為0.35~0.55。品系SMN-234耐貯存,果粉厚,甜度差;品系SMN-339果實(shí)花青苷等黃酮類(lèi)化合物相對(duì)較低,其余性狀相對(duì)較好。品系SMN-460和SMN-461糖酸比及類(lèi)黃酮化合物含量等果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)表現(xiàn)良好,但果實(shí)尺寸一般。這些品系單一性狀較好,可作為育種材料保留。
第三類(lèi)SMN-470評(píng)判值低于0.35。SMN-470果實(shí)尺寸、硬度和類(lèi)黃酮化合物含量等性狀均表現(xiàn)一般,耐貯性較差且內(nèi)含物較少。因此,此品系不適合推廣種植,可淘汰。
藍(lán)莓優(yōu)良品系篩選由多性狀決定。本研究利用模糊數(shù)學(xué)綜合評(píng)價(jià)方法,可把定性評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)化為定量評(píng)價(jià),完成藍(lán)莓優(yōu)良品系篩選。這種方法首次在藍(lán)莓品系篩選中應(yīng)用,通過(guò)優(yōu)良雜交品系性狀與母本性狀對(duì)比,發(fā)現(xiàn)雜交品系總體性狀優(yōu)于母本,果實(shí)品質(zhì)優(yōu)良、耐貯藏、適合長(zhǎng)途運(yùn)輸,可作為開(kāi)發(fā)藍(lán)莓新品種候選材料或雜交育種材料。該方法適合藍(lán)莓優(yōu)良品系評(píng)價(jià)及品種選育。
本研究育種目標(biāo)是培育大果鮮食型品種,由于藍(lán)莓花青苷素類(lèi)物質(zhì)主要存在于果皮中,而果實(shí)越大其單位果重果皮表面積和果皮量越少,花青苷含量相對(duì)變低[19]。但是,從花青苷素組成來(lái)看,選育各品系高于或接近母本,果實(shí)所含花青苷質(zhì)量并未降低。另外,花青苷含量也隨栽培環(huán)境和果實(shí)成熟度變化而異,但花青苷組成一般不受這些因素影響[20],可作為品種鑒定指標(biāo)利用。
在藍(lán)莓鮮果市場(chǎng),大多數(shù)消費(fèi)者喜歡果實(shí)大且顏色好品種。而對(duì)于種植者,較大果實(shí)品種更方便采收[21]。硬度和耐貯性也是藍(lán)莓果實(shí)品質(zhì)研究重要指標(biāo),其與果實(shí)保存時(shí)間及適運(yùn)性密切相關(guān)[22],特別是出口外銷(xiāo)果實(shí)對(duì)這一性狀要求更嚴(yán)格。羅靜等研究發(fā)現(xiàn),果實(shí)硬度還與果形指數(shù)和單果重等指標(biāo)存在相關(guān)性[23]。市售藍(lán)莓單重通常為2 g,本研究供試品系果實(shí)單重均大于或接近3 g,大多數(shù)果實(shí)硬度較大。同時(shí),本研究供試品系糖酸比變化為5.09~79.57,開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景良好。
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Screening of excellent natural hybridization strains of highbush blue-berry/
ZHAO Lina1,XU Guohui2,LV Jiekai1,GAO Xiongmei2,3,WANG Hexin2,WANG Lijin4,HOU Yilong1,LIU Guoling3,HU Chundan5(1.School of Life Science and Technology,Dalian University, Dalian Liaoning 116622,China;2.Institute of Modern Agricultural Research,Dalian University, Dalian Liaoning 116622,China;3.Dalian Senmao Modern Agriculture Co.,Ltd,Dalian Liaoning 116112,China;4.School of Food,Beijing Technology and Business University,Beijing 100048, China;5.Library,Harbin Normal University,Harbin 150080,China)
In this study,by the way of rapid breeding of mixing multi varieties with natural hybridization,ten natural hybridization strains of northern highbush blueberry were selected through the character of plant growth and fruit quality(SMN-72,SMN-86,SMN-234,SMN-291,SMN-339,SMN-350, SMN-351,SMN-460,SMN-461,SMN-470),then by the methods of multi factor comprehensive evaluation of fuzzy mathematics,ten fruit characters of these strains were evaluated comprehensivelywhich included single fruit weight,fruit hardness,sugar content,acid content,and so on.The results showed that the hybridization strain SMN-72,SMN-86,SMN-291,SMN-350 and SMN-351,had higher value(>0.55),not only good fruit quality,but also storage,long-distance transportation.SMN-234,SMN-339,SMN-460 and SMN-461 had medium value(0.35-0.55).However,some traits were good and could be used as a good germplasm resource.SMN-470 had low value,its fruit was small,soft and incoherent,and the comprehensive traits was poor and could be eliminated.Above all,we had selected five excellent hybrid strains,these excellent strains will be laid a preliminary basis for application of new varieties.
blueberry;cross-breeding;excellent strains;screening
S663.9
A
1005-9369(2016)11-0017-09
時(shí)間2016-12-1 14:47:01[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20161201.1447.014.html
趙麗娜,徐國(guó)輝,呂杰凱,等.高叢藍(lán)莓自然雜交優(yōu)良品系篩選[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,47(11):17-25.
Zhao Lina,Xu Guohui,Lv Jiekai,et al.Screening of excellent natural hybridization strains of highbush blueberry[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(11):17-25.(in Chinese with English abstract)
2016-10-14
大連金州新區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(XDNY-NYKJ-2015-001);大連市高層次人才創(chuàng)新支持計(jì)劃項(xiàng)目(2015R090);大連市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015B11NC083);遼寧省博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(20141120);遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2015068)
趙麗娜(1991-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)橹参镞z傳育種。E-mail:15942857423@163.com
*通訊作者:王賀新,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)榻?jīng)濟(jì)林學(xué)及果樹(shù)學(xué)。E-mail:wanghexin@dlu.edu.cn