兒童急性下呼吸道感染非典型病原體病原學(xué)分析

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(1.湖南醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，湖南 懷化 418000；2.懷化市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科)

·臨床醫(yī)學(xué)·

兒童急性下呼吸道感染非典型病原體病原學(xué)分析

周秀萍1*，楊長順2，林梅1

(1.湖南醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，湖南 懷化 418000；2.懷化市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科)

目的調(diào)查分析兒童急性下呼吸道感染非典型病原體的流行情況，為臨床合理用藥提供病原學(xué)依據(jù)。方法采集1 759例急性下呼吸道感染患兒的血清標(biāo)本，采用間接免疫熒光法進(jìn)行呼吸道九聯(lián)檢的檢測，得出病原體分布情況，并對其結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果在1 759例兒童急性下呼吸道感染患者中，總陽性率為38.7%，其中檢出率最高的是肺炎支原體，占19.6%，其次為嗜肺軍團(tuán)菌12.3%，呼吸道合胞病毒4.1%，未檢出Q熱立克次體和肺炎衣原體。共發(fā)現(xiàn)混合感染患者47例，混合感染率達(dá)6.9%。結(jié)論本地區(qū)兒童急性下呼吸道感染的非典型病原體以肺炎支原體和嗜肺軍團(tuán)菌較常見，亦存在其他病原體感染，不同地區(qū)的病原菌分布存在著一定的差異，在臨床用藥中應(yīng)根據(jù)病原體的不同選擇用藥。

兒童； 急性下呼吸道感染； 呼吸道九聯(lián)檢； 非典型病原體

急性下呼吸道感染是兒科門診及住院患者中的常見病及多發(fā)病，其感染病原體的種類多，臨床表現(xiàn)錯綜復(fù)雜，并且由于兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，更易引起多種嚴(yán)重并發(fā)癥，如呼吸衰竭、心肌炎、心力衰竭等，甚至危及到患者的生命。本研究擬對本地區(qū)呼吸道九聯(lián)檢的檢測結(jié)果進(jìn)行分析，了解本地區(qū)兒童急性下呼吸道感染非典型病原體的分布與流行情況，為臨床治療及合理用藥提供可靠的病原學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料病例來源為2015年1月～2015年12月期間，在懷化市第一人民醫(yī)院兒科門診就診及住院的0～7歲下呼吸道感染患兒1 759例?？崭钩槿§o脈血，分離血清，當(dāng)天完成呼吸道九聯(lián)檢各項(xiàng)目(嗜肺軍團(tuán)菌，肺炎支原體，Q熱立克次體，肺炎衣原體，腺病毒，呼吸道合胞病毒，甲型流感病毒，乙型流感病毒，副流感病毒)的檢測。

1.2試劑和儀器九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒(間接免疫熒光法indirectimmuno fluorescence assay，IFA)，購自鄭州安圖生物工程股份有限公司。該檢測是基于待測樣本中的IgM抗體與吸附在載玻片上相應(yīng)抗原所發(fā)生的反應(yīng)。樣本中若存在特異性抗體則與抗原結(jié)合不被洗脫，而其他未與抗原結(jié)合的抗體在洗滌步驟中被除去。下一步驟中抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白結(jié)合，再用水洗去未結(jié)合的標(biāo)記抗體，最后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果。儀器為BX-51奧林巴斯熒光顯微鏡。

1.3方法在30 μL 1∶1稀釋的血清中加入150 μL吸附劑，混勻，3 000 rpm離心15 min；在載玻片的每孔中加15 μL稀釋劑處理后的血清，在另一張載玻片的每孔中加入15 μL不稀釋的陽性對照和陰性對照；濕盒內(nèi)37 ℃溫育90 min；PBS沖洗后浸泡其中，水平搖床上搖動10 min，再用蒸餾水蘸洗；晾干，每孔加入15 μL FITC標(biāo)記物，濕盒內(nèi)37 ℃溫育30 min；重復(fù)上述洗滌步驟，加封閉介質(zhì)，蓋上蓋玻片，鏡檢。

1.4結(jié)果判斷腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒及副流感病毒的整個包被孔中有1%～15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光(在副流感病毒和呼吸道和胞病毒中能同時觀察到著色的合胞)；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的菌體呈現(xiàn)蘋果綠色熒光；支原體出現(xiàn)細(xì)胞外圍蘋果綠色熒光。見圖1。

2 結(jié) 果

2.1九種病原體檢測結(jié)果在1 759例急性下呼吸道感染患兒中，非典型病原體總的陽性率為38.7%(684/1759)，其中肺炎支原體的檢出率最高為19.6%，共檢出345例，占到了陽性病例的一半(345/684)，其次為嗜肺軍團(tuán)菌，檢出率為12.3%，呼吸道合胞病毒的檢出率為4.1%，未檢出Q熱立克次體和肺炎衣原體，見表1。

2.2混合感染結(jié)果共發(fā)現(xiàn)混合感染患者47例，混合感染率6.9%，以肺炎支原體合并腺病毒、肺炎支原體合并呼吸道合胞病毒最為常見。

3 討 論

近年來，隨著各種抗生素的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌如肺炎鏈球菌等引起的兒童呼吸道感染的感染率有所下降，但研究表明其他非典型病原體的感染率呈上升趨勢[1-2]。明確病原體對呼吸道感染的診斷和治療具有重要的意義，長期以來檢測呼吸道感染病原體的“金標(biāo)準(zhǔn)”是分離培養(yǎng)出病原體。由于多數(shù)患兒在入院前均已用藥，故分離培養(yǎng)陽性率低，同時由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，細(xì)胞培養(yǎng)在許多基層醫(yī)院沒有辦法開展。一般情況下當(dāng)病原體感染人體1～2周后，血清中特異IgM抗體會急劇升高，3～4周左右達(dá)到高峰。因此，檢測血清中特異IgM抗體可作為急性感染的診斷指標(biāo)[3]。

表1呼吸道九聯(lián)檢結(jié)果圖

病原體陽性數(shù)陽性率嗜肺軍團(tuán)菌21612.3%肺炎支原體34519.6%Q熱立克次體00.0%肺炎衣原體00.0%腺病毒181.0%呼吸道合胞病毒724.1%甲型流感病毒70.4%乙型流感病毒90.5%副流感病毒130.7%總陽性率68438.7%

本組1 759例下呼吸道感染患兒中，共有684例檢出病原體特異性IgM抗體，陽性率達(dá)38.7%,低于長春[4]，北京[5]地區(qū)。其中肺炎支原體的檢出率最高，占19.6%(345/1759)，可見引起本地區(qū)下呼吸道感染的病原體仍以支原體為主。排在第二位的病原體為嗜肺軍團(tuán)菌占12.3%(216/1759)，分析原因可能是隨著生活水平的提高，空調(diào)已經(jīng)成為日常家用電器，由于很多家庭對于空調(diào)的清洗及消毒沒有引起足夠的重視，導(dǎo)致軍團(tuán)菌在空調(diào)設(shè)備冷卻水中檢出率較高，如長沙市公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)檢出率18%，冷卻水的檢出率24.3%，冷凝水檢出率5.5%[6]。冬季由于天氣寒冷，很多家長不愿意帶小孩出門，長時間呆在空調(diào)房里，故嗜肺軍團(tuán)菌的感染率較其他季節(jié)明顯升高。軍團(tuán)菌肺炎的臨床癥狀復(fù)雜且不具有特異性，臨床醫(yī)生在診療時不易判斷，此時進(jìn)行血清病原學(xué)檢測就顯得尤為重要。排在第三位的是呼吸道合胞病毒，該病毒是嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎最常見的病原體。本地區(qū)未檢出Q熱立克次體和肺炎衣原體。我國占地面積廣，幅員遼闊，兒童急性下呼吸道感染的病原體的分布在不同地區(qū)存在著明顯差別，研究顯示，瀘州地區(qū)以呼吸道合胞病毒感染為主[7],濮陽地區(qū)[8]以肺炎支原體感染為主。因此各地區(qū)均需對本地區(qū)病原體的流行情況進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計，以指導(dǎo)臨床。

通過檢測共發(fā)現(xiàn)混合感染者47例，混合感染的病原體中以肺炎支原體合并腺病毒、肺炎支原體合并呼吸道合胞病毒最為常見。肺炎支原體的高混合感染率提示，該病原體的感染可促進(jìn)其他病原體的感染，但具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

本研究中呼吸道常見九種病原體特異IgM抗體的檢測的方法為間接免疫熒光法(IFA)，該技術(shù)將抗原抗體反應(yīng)的高特異性和熒光素標(biāo)記的高敏感性結(jié)合起來，能夠快速而準(zhǔn)確地檢測多種病原體，可作為兒童呼吸道感染病因診斷的重要試驗(yàn)手段。該法操作簡便，不需要特殊的儀器，各級醫(yī)院均可開展，且不受是否用過抗生素的干擾，具有良好的應(yīng)用前景，為防治本地區(qū)兒童下呼吸道急性感染提供了重要的病原學(xué)依據(jù)。

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AnalysisofAtypicalPathogensinChildrenwithAcuteLowerRespiratoryTractInfections

ZHOU Xiuping，YANG Changshun，LIN Mei

(CollegeofLaboratoryMedicine,HunanMedicineUniversity，Huaihua,Hunan418000,China)

ObjectiveTo analyse the distribution of atypical pathogens in children with acute lower respiratory tract infections and give guidance of therapy based on our study.MethodNine tests of respiratory tract of 1 759 patients which serum was collected were examined by indirectimmuno fluorescence assay.The distribution of pathogens was analysed.

ResultsIn 1 759 patients,the total positive rate of pathogens was 38.7%,and Mycoplasma pneumonia was the most common pathogen of infection(19.6%),followed by Legionella pneumophila(12.3%),Respiratory syncytial virus(4.1%).We didn’t detect Richettsia query and Chlamydia pneumoniae.Mixed infections were found in 47 cases,with the positive rate of 6.9%.ConclusionThe common atypical pathogens of acute lower respiratory tract infections are Mycoplasma pneumonia and Legionella pneumophila.Species difference exits in different ages.Treatments should be given based on pathogens.

children; acute lower respiratory tract infections; nine tests of respiratory tract; atypical pathogens

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.03.021

2015-12-25；

2016-03-30

*通訊作者，E-mail：changshunyang@sohu.com.

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蔣湘蓮)