兒童化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)中的稀釋方法研究

岑美婷 陳純旭 吳振興 張 慧

廣州市第一人民醫(yī)院 廣州市南沙中心醫(yī)院檢驗(yàn)科（廣州 510045）

兒童化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)中的稀釋方法研究

岑美婷 陳純旭 吳振興 張 慧

廣州市第一人民醫(yī)院 廣州市南沙中心醫(yī)院檢驗(yàn)科（廣州 510045）

目的 對(duì)兒童化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)中標(biāo)本量過(guò)少時(shí)的稀釋方法分析。方法 選取我院2013年5月—2015年5月兒童常規(guī)篩查項(xiàng)目50例血清三碘甲狀腺原氨酸（TT3）檢測(cè)為例，其稀釋介質(zhì)分別采用TT3定制液S0、醫(yī)用蒸餾水以及0.9%氯化鈉，對(duì)其實(shí)施手工2倍（1∶1）和4倍（1∶3）稀釋后，對(duì)比分析稀釋后結(jié)合和原始數(shù)據(jù)差異。結(jié)果 結(jié)果和原始數(shù)據(jù)對(duì)比，2倍、4倍稀釋S0組以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋結(jié)果差異不大，對(duì)比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其與各組均差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論 在兒童血清三碘甲狀腺原氨酸檢測(cè)中對(duì)其實(shí)施2倍、4倍稀釋S0以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋能夠滿足醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)需求，值得推廣應(yīng)用。

兒童 化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè) 稀釋方法

化學(xué)發(fā)光免疫分析法可以分成兩種，分別是免疫化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，也就是將化學(xué)發(fā)光劑在抗體或者抗原上面實(shí)施標(biāo)記的一種免疫檢測(cè)方式，在應(yīng)用中優(yōu)勢(shì)包括:操作方便、穩(wěn)定性高以及靈敏度高等，因此在臨床中的應(yīng)用比較廣泛［1］。兒童生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)測(cè)定的經(jīng)典方法為放射免疫分析法（RIA），并且已形成一套完整的判斷標(biāo)準(zhǔn)。但近幾年來(lái)隨著其他免疫學(xué)方法迅速發(fā)展，尤其是全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的廣泛使用，放射免疫法已逐漸被取代。其中在兒童化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)中難免會(huì)出現(xiàn)標(biāo)本量過(guò)少的情況，那么也就需要采用合適的稀釋劑對(duì)其實(shí)施稀釋檢測(cè)，本文則以我院兒童常規(guī)篩查項(xiàng)目中的血清三碘甲狀腺原氨酸（TT3）檢測(cè)為例，對(duì)其稀釋劑和稀釋倍數(shù)分析。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院2013年5月—2015年5月兒童常規(guī)篩查項(xiàng)目中50例患兒的血清三碘甲狀腺原氨酸（TT3）檢測(cè)標(biāo)本為例，其中男性患兒26例，女性患兒24例，患者年齡為3～13歲，平均年齡為（12.3±1.1）歲，所有患兒血清樣本均在檢測(cè)線性范圍之內(nèi)。

本次所有檢測(cè)工作均由美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀ACCESS 2對(duì)其樣本進(jìn)行檢測(cè)。試劑為配套試劑三碘甲狀腺原氨酸（TT3），試劑盒批內(nèi)質(zhì)控檢測(cè)采用BIO-RAD質(zhì)控品實(shí)施檢測(cè)，低、中、高三個(gè)濃度水平均在5%之下。

1.2 稀釋方法 其稀釋介質(zhì)分別采用TT3定制液S0、醫(yī)用蒸餾水以及0.9%氯化鈉，對(duì)其實(shí)施手工2倍（1∶1）和4倍（1∶3）稀釋，將所選取的50例血清樣本分別放置在不同稀釋劑和不同倍數(shù)稀釋劑中，最后對(duì)其臨床指標(biāo)實(shí)施檢測(cè)對(duì)比。

2 結(jié) 果

和原始數(shù)據(jù)對(duì)比，2倍、4倍稀釋S0組以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋結(jié)果差異不大，對(duì)比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其與各組均差異顯著（P＜0.05）。其中各組數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)和原始血清指標(biāo)見表1。各組差異對(duì)比，見表2。

表1 各組數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)和原始血清指標(biāo)（g/L）

圖1 不同稀釋劑2倍和原始數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果（單位:μg/L）

表2 不同稀釋劑和不同倍數(shù)和原始數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果

圖2 不同稀釋劑4倍和原始數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果（單位:μg/L）

3 討 論

化學(xué)發(fā)光是在常溫所出現(xiàn)的化學(xué)反應(yīng)光的發(fā)射，其發(fā)光機(jī)理是在反應(yīng)體系中的一些物質(zhì)分子，其中包括反應(yīng)物、熒光物質(zhì)或者中間體等，對(duì)反應(yīng)釋放能力有所吸收的話，從一開始基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，其中中間體能夠從一開始的激發(fā)態(tài)回歸到基態(tài)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)等能級(jí)光子的釋放，對(duì)這些光子實(shí)施臨床測(cè)定也就能夠?qū)嵤┫鄳?yīng)的定量分析［2］。化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)量則是將化學(xué)發(fā)光和免疫產(chǎn)物結(jié)合應(yīng)用的一種臨床檢測(cè)方法，因?yàn)榛瘜W(xué)發(fā)光具有一定的熒光特異性，但是其和熒光過(guò)程中所需要的激發(fā)光具有一定的差異，化學(xué)發(fā)光則是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)所出現(xiàn)的光強(qiáng)度，在此過(guò)程中并不需要激發(fā)光，以此也就對(duì)熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響作用有顯著避免［3］。基于其原理可以明確，在其檢測(cè)過(guò)程中對(duì)其精度要求較高，患者檢測(cè)過(guò)程中的血清加注可以直接影響到其檢測(cè)物濃度，從而影響檢測(cè)結(jié)果。兒童檢驗(yàn)和成人檢驗(yàn)具有一定差異，比如在加樣環(huán)節(jié)兒童化學(xué)免疫檢驗(yàn)通常會(huì)出現(xiàn)標(biāo)本量不足問(wèn)題，究其原因則主要包括三個(gè)方面，分別是兒童血液樣本通常是14歲以下兒童，患兒血球壓積過(guò)高血清量偏少，因此具有一定的采集難度；針對(duì)具體的檢驗(yàn)結(jié)果需要對(duì)某些問(wèn)題實(shí)施復(fù)查；不可預(yù)估的儀器故障會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本出現(xiàn)浪費(fèi)情況等等［4-5］。針對(duì)這些問(wèn)題，為了能夠有效避免反復(fù)抽血情況的出現(xiàn)，就需要找到相應(yīng)的稀釋介質(zhì)和合理的稀釋倍數(shù)，解決標(biāo)本量不足問(wèn)題。

其中在本次研究中所選用的稀釋介質(zhì)有三種，分別是和TT3相配合定制液S0，醫(yī)用蒸餾水以及0.9%氯化鈉，并各個(gè)稀釋介質(zhì)采用2倍和4倍實(shí)施稀釋。其中在臨床分析結(jié)果中顯示2倍、4倍稀釋S0組以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋結(jié)果可用，但是其他稀釋辦法在臨床應(yīng)用對(duì)其結(jié)果具有較大影響。其原因是S0定標(biāo)液組成成分為人血清含有零濃度甲狀腺原氨酸，這一物質(zhì)和樣品血清基本相近，兩者的結(jié)合應(yīng)用具有較高稀釋能力。同時(shí)零濃度甲狀腺原氨酸膠體具有較高穩(wěn)定性，成分單一，能夠有效排除其他物質(zhì)對(duì)血清所產(chǎn)生的影響作用，也就顯著降低了機(jī)制效應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果所具有的影響作用。因此S0定標(biāo)液在本次實(shí)驗(yàn)中所選用的2倍以及4倍稀釋對(duì)其檢測(cè)結(jié)果均影響不大。醫(yī)用蒸餾水本身沒有任何雜質(zhì)，在其稀釋過(guò)程中所產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)也比較小，能夠用來(lái)進(jìn)行稀釋，但是在醫(yī)用蒸餾水量達(dá)到4倍的時(shí)候，也就會(huì)出現(xiàn)隨著稀釋液量的逐漸增大也就逐漸提高了之間的誤差，從而導(dǎo)致其結(jié)果偏差過(guò)大［6］。0.9%氯化鈉的分析結(jié)果則顯示不管是2倍還是4倍均不可用，主要原因是將其作為稀釋劑應(yīng)用，其本身不含有蛋白質(zhì)和血清成分，如果用其進(jìn)行稀釋血清，也就會(huì)對(duì)其之前的穩(wěn)定性有所降低，也會(huì)引起吸光度范圍有較大波動(dòng)的出現(xiàn)，從而最終導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果具有較大差異，不可用。

化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定中經(jīng)常會(huì)用到稀釋液和稀釋方法，其也對(duì)檢測(cè)結(jié)果具有直接影響。關(guān)于稀釋液的選擇不但要簡(jiǎn)單方便，同時(shí)也不能夠?qū)ζ錂z測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。在本次研究中所選用的三種稀釋液中，最好的為SO稀釋液，并且每一種檢測(cè)項(xiàng)目的SO定制液成分均是這一實(shí)際的零濃度入血清。因此在實(shí)施其他標(biāo)本鑒定的時(shí)候也可以采用這一方式。但是在應(yīng)用中是否能夠選用4倍以上標(biāo)本稀釋液則還需要進(jìn)一步研究。醫(yī)用蒸餾水比較容易得到，但是其使用僅限制在2倍稀釋，相對(duì)而言0.9%氯化鈉則不能夠作為稀釋液應(yīng)用，在臨床中需要注意。

總之，在兒童血清總?cè)饧谞钕僭彼釞z測(cè)中對(duì)其實(shí)施2倍、4倍稀釋S0以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋能夠滿足醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)需求，檢驗(yàn)結(jié)果和原有數(shù)據(jù)之間偏差較小，因此也就說(shuō)明其能夠成功應(yīng)用在兒童血清標(biāo)本量過(guò)少情況中，同時(shí)也值得推廣應(yīng)用。

［1］鮑俊杰，楊紅玲，郭彩嬌，等.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)廣州地區(qū)兒童HB-sAb結(jié)果分析［J］.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2009，19（1）:44-46.

［2］麥愛芬.血清性激素水平的測(cè)定對(duì)兒童性激素分泌異常的早期診斷［J］.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2015（1）: 48-49.

［3］李華榮.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在跟蹤兒童乙型肝炎疫苗免疫效果中的動(dòng)態(tài)觀察［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7（20）:83-84.

［4］李麗珍.廣西那坡縣1～6歲兒童乙型病毒性肝炎及白喉免疫效果分析［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，29（1）:154-155.

［5］黃軍林，黃夏聲，羅炬，等.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)免疫兒童乙型肝炎表面抗體的結(jié)果分析［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2013，34（13）:2468-2469.

［6］陳紅兵，謝國(guó)錦，沈京培，等.化學(xué)發(fā)光法在兒童生長(zhǎng)激素缺乏癥診斷中的應(yīng)用［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（3）:325-327.

10.3969/j.issn.1000-8535.2016.01.021

2015-10-12）