正交設計優(yōu)選風芍六君子湯的提取工藝

李柏群，劉 駿，陳紹成，彭 騰，黃道秋，薛 梅

（1．重慶三峽中心醫(yī)院，重慶 404000； 2．重慶市北碚區(qū)中醫(yī)院，重慶 400711；3．重慶第二師范學院，重慶 400067； 4．成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 611137）

正交設計優(yōu)選風芍六君子湯的提取工藝

李柏群1，劉 駿2，陳紹成3，彭 騰4，黃道秋1，薛 梅2

（1．重慶三峽中心醫(yī)院，重慶 404000； 2．重慶市北碚區(qū)中醫(yī)院，重慶 400711；3．重慶第二師范學院，重慶 400067； 4．成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 611137）

目的 優(yōu)化風芍六君子湯的提取工藝。方法 采用正交設計試驗法，考察不同提取工藝制備的風芍六君子湯中芍藥苷和橙皮苷的含量及出膏率，并依據(jù)試驗數(shù)據(jù)設計最佳提取工藝。結(jié)果 最佳提取工藝為加10倍量水，提取2次，每次1 h。結(jié)論 優(yōu)選出的提取工藝簡便、經(jīng)濟、提取效率高。

正交設計；風芍六君子湯；芍藥苷；橙皮苷；提取工藝

腸易激綜合征屬中醫(yī)泄瀉、便秘、腹痛、郁證等范疇，為常見的功能性腸道疾病[1]，中醫(yī)辨證論治具有一定優(yōu)勢。風芍六君子湯是醫(yī)院臨床運用多年的經(jīng)驗方劑，由白芍、白術(shù)、陳皮、茯苓、甘草、紅參、地錦草、半夏、防風等藥組方，對腹瀉型腸易激綜合征有顯著效果。現(xiàn)采用水煎提，以芍藥苷、橙皮苷、出膏率為指標對加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)3個因素進行考察，用 L9（34）正交表進行工藝優(yōu)選[2]，以確定最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

儀器：LC－20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司），DAD檢測器；BP121S型電子天平（德國 Sartorius公司）；BUG25－12型超聲清洗器（必能信超聲有限公司）；Diamonsil鉆石C18色譜柱（250mm×4．6mm，5μm）；優(yōu)普UPT系列超純水器（成都優(yōu)普電子產(chǎn)品有限公司）。

試藥：芍藥苷對照品（批號為110736－200526）、橙皮苷對照品（批號為0721－9909）均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇（Fisher Scientific）、乙腈、超純水、磷酸均為分析純，由成都科龍化工試劑廠提供；白芍（批號為1002055）、白術(shù)（批號為 0907034）、紅參（批號為0910138）、茯苓（批號為 1003209）、甘草（批號為0905126）、陳皮（批號為 0910010）、半夏（批號為0902003）、地錦草（批號為 0803008）、防風（批號為1006118）9味中藥飲片均購于四川新荷花中藥飲片股份有限公司，由成都中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室龍飛副教授鑒定，均符合2010年版《中國藥典（一部）》的要求。

2 方法與結(jié)果

2．1 芍藥苷、橙皮苷含量測定[3－7]

2．1．1 色譜條件

島津LC－20AT型高效液相色譜儀，DAD檢測器；色譜柱：Diamonsil鉆石C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流動相：乙腈－0．1%磷酸水（20∶80）；流速：1．0m L／min；柱溫：35℃；檢測波長：230 nm；進樣量：10μL。

2．1．2 溶液制備

分別稱取芍藥苷、橙皮苷適量，精密稱定，用甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為0．103 7 g／L和0．019 0 g／L的對照品溶液。稱取處方1／10量的藥材，按正交設計要求提取9個樣品，過濾，取續(xù)濾液100mL，于80℃水浴下?lián)]干，減壓干燥24 h，取干浸膏約0．5 g，精密稱定，加25mL甲醇，稱重，超聲1 h，取出放干后補重，過濾，精密量取續(xù)濾液0．2 mL，用甲醇定容至1 mL容量瓶中，過0．45μm微孔濾膜，作為供試品溶液。按處方分別制備不含白芍和不含陳皮藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備成相應的陰性對照品溶液。

2．1．3 方法學考察

專屬性試驗：取對照品溶液、缺白芍和缺陳皮的陰性對照品溶液及供試品溶液，按擬訂色譜條件各進樣10μL測定，其色譜圖見圖 1。結(jié)果，陰性對照品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應保留時間處無峰出現(xiàn)，表明該方法專屬性較強。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取2．1．2項下芍藥苷對照品溶液1，2，6，8，10μL，按擬訂色譜條件進樣測定。以芍藥苷對照品溶液進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得芍藥苷回歸方程 Y＝1×106X－11 718，r＝0．999 9(n＝5)。同樣的方法，橙皮苷對照品溶液進樣量為8，12，16，18，20μL，得橙皮苷回歸方程Y＝2×106X－24 042，r＝0．999 9(n＝5)。結(jié)果表明，芍藥苷、橙皮苷進樣量分別在 0．103 7～1．037 0μg和 0．152 0～0．380 0μg范圍內(nèi)與各自峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：分別精密吸取2．1．2項下同一對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷、橙皮苷峰面積的 RSD分別為0．20%和0．22%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一提取方式（加10倍量水，煎煮2次，每次30min）制備的供試品6份，分別按2．1．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣10μL。結(jié)果芍藥苷平均質(zhì)量濃度為53．010 8 mg／g，RSD為0．58%（n＝6），橙皮苷平均質(zhì)量濃度為26．003 5mg／g，RSD為0．58%（n＝6），表明該方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，2，4，6，8，10 h時進樣10μL測定，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷、橙皮苷峰面積的 RSD分別為0．58%和1．20%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取同一提取方式（加10倍量水，煎煮2次，每次30 min，芍藥苷、橙皮苷質(zhì)量濃度分別為53．008 1，25．968 0 mg／g）制備的已測知含量的供試品適量，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品溶液5 mL及甲醇25 mL，按2．1．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣10μL，測定芍藥苷、橙皮苷的含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

2．1．4 樣品含量測定

按2．1．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。

2．2 浸膏得率測定

精密量取以上續(xù)濾液各10mL，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，80℃水浴揮干后，于烘箱105℃干燥3 h，放置干燥器中冷卻至室溫，立即精密稱定，計算出膏率。

2．3 正交試驗設計

2．3．1 因素水平確定

該方劑采用水煎提，以芍藥苷、橙皮苷、出膏率為指標對加水量（因素A）、煎煮時間（因素B）、煎煮次數(shù)（因素C）3個因素進行考察，用 L9（34）正交表進行工藝優(yōu)選，見表2。

2．3．2 評價標準

該復方制劑中白芍為君藥，陳皮為臣藥，故按照芍藥苷、橙皮苷、出膏率的權(quán)重系數(shù)分別為0．5，0．3，0．2進行綜合加權(quán)評分。正交試驗結(jié)果見表3，方差分析見表4。

2．3．3 結(jié)果分析

由表3可見，影響提取效果的各因素作用主次為C＞A＞B，得到的最佳提取工藝為A3B3C3。由表3可見，A，B，C因素均無顯著性差異，從生產(chǎn)上節(jié)約能源和時間的角度考慮，選定A2B2C2為最佳提取工藝，即加10倍量水，提取2次，每次1 h。

表1 風芍六君子湯提取工藝加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

表2 水煎工藝因素水平設計

2．4 優(yōu)選工藝驗證試驗

稱取處方量1／10的藥材3份，按優(yōu)選提取工藝條件提取，測定芍藥苷、橙皮苷、出膏率，結(jié)果見表5?？梢姡瑑?yōu)選工藝穩(wěn)定、合理、可行。3批樣品含量測定結(jié)果見表6。

表3 水提提取工藝正交試驗結(jié)果

表4 正交試驗綜合評分方差分析

表5 優(yōu)選工藝驗證試驗結(jié)果

3 討論

本方的君藥為白芍，臣藥為陳皮，而2010年版《中國藥典（一部）》把芍藥苷、橙皮苷分別作為白芍和陳皮質(zhì)量控制的指標。前期配伍試驗顯示，在配伍前后，白芍中的芍藥苷、陳皮中的橙皮苷與單煎相比，含量明顯發(fā)生了變化。因此認為，芍藥苷和橙皮苷是本方中的特征性成分，可作為提取工藝考察的指標性成分。

表6 風芍六君子湯提取工藝芍藥苷、橙皮苷含量測定結(jié)果(n＝3)

在流動相的選擇中，考察了甲醇－水、乙腈－水、甲醇－磷酸水、乙腈－磷酸水4種，最后選擇乙腈－磷酸水作為流動相，分離效果好。

[1]陳文莉．腸易激綜合癥（IBS）的中醫(yī)治療五法[J]．山西中醫(yī)學院學報，2005，6（2）：23－24．

[2]王永炎，嚴世蕓．實用中醫(yī)內(nèi)科學[M]．上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2009：109－120．

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[7]仇 雪．陳皮中陳皮素和橙皮苷含量測定[J]．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015，11（7）：19－20．

Optim ization of Fengshao Liujunzi Decoction Extraction Technology by Orthogonal Design

Li Boqun1，Liu Jun2，Chen Shaocheng3，Peng Teng4，Huang Daoqiu1，Xue Mei2
（1．Chongqing Three Gorges Central Hospital，Chongqing，China 404000； 2．Beibei Traditional Chinese Medical Hospital，Chongqing，China 400711；3．Chongqing Second Normal University，Chongqing，China 400067； 4．Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan，China 611137）

Ob jective To optimize the extracting technology for Fengshao Liujuzi Decoction．M ethods Orthogonal design method was used to detect the content and the ratio of extraction of peoniflorin，aurantiamarn in Fengshao Liujuzi Decoctionm，and to design the best extracting method according to the results．Resu lts The best extracting method was 10 times of water，decocted for 2 times，and 1 h for each time．Conclusion The optimized extracting method is effective and cheap，easy to operate，and highly efficient．

orthogonal design；Fengshao Liujunzi Decoction；peoniflorin；aurantiamarin；extracting technology

TQ 461；R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)06－0026－04

李柏群（1971－），女，大學本科，副主任中藥師，研究方向為中藥制劑的開發(fā)，（電子信箱）bqlicn＠163．com；陳紹成（1965－），男，碩士研究生，主任藥師，研究方向為中藥制劑及其標準，本文通訊作者，（電子信箱）csc1966109＠sohu．com。

2015－07－28；

2015－10－23)

重慶市2010年科技攻關(guān)項目，項目編號：CSTC，2010AC5095。