HPLC法測(cè)定魚(yú)腥草素鈉包合物中的藥物含量*

宋婉玉 黃玉嬌 李衛(wèi)紅 李 菲

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

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HPLC法測(cè)定魚(yú)腥草素鈉包合物中的藥物含量*

宋婉玉 黃玉嬌 李衛(wèi)紅 李 菲

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

目的 采用高效液相色譜法測(cè)定包合物中魚(yú)腥草素鈉的含量。方法 色譜柱：大連伊力特C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol/L四丁基溴化銨-三乙胺(43∶57∶0.3)；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；流速：1.0 ml/min。結(jié)果 魚(yú)腥草素鈉在9.6～ 96 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999；平均回收率為97.64%(RSD=1.37%,n=9)。結(jié)論 該法檢測(cè)快速、準(zhǔn)確，可用于魚(yú)腥草素鈉包合物的含量測(cè)定。

魚(yú)腥草素鈉；高效液相色譜法；含量測(cè)定

魚(yú)腥草別名折耳根，為三白草科植物蕺菜的干燥地上部分，是一味常用中藥。中醫(yī)認(rèn)為魚(yú)腥草具有清熱解毒、消癰排膿、利尿除濕之功效?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)腥草的主要有效成分為癸酰乙醛(魚(yú)腥草素)，具有抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[1-2]，臨床上主要用于治療支氣管肺炎、呼吸道感染、鼻淵等疾病。由于癸酰乙醛游離狀態(tài)易于聚合失效，所以成品則需制成性質(zhì)較為穩(wěn)定的加成物。1971年國(guó)內(nèi)人工合成了癸酰乙醛亞硫酸氫鈉，俗稱合成魚(yú)腥草素或魚(yú)腥草素鈉，具有抗菌、免疫調(diào)節(jié)等作用[3-4]。魚(yú)腥草素鈉在水中微溶，遇水有特殊魚(yú)腥臭，且易于發(fā)生水解。將魚(yú)腥草素鈉制成β-環(huán)糊精包合物可增加其溶解度，掩蓋其不良?xì)馕?，并提高穩(wěn)定性[5]。本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定β-環(huán)糊精包合物中魚(yú)腥草素鈉的含量。

1 儀器與試劑

依利特P230Ⅱ高效液相色譜儀(包括UV230Ⅱ紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器，EC2006色譜數(shù)據(jù)處理工作站，大連依利特分析儀器有限公司)；低速離心機(jī)(型號(hào)：TDL-40B，上海安亭科學(xué)儀器廠)；超純水機(jī)(型號(hào):UPT-I-107，成都超純科技有限公司)；醫(yī)用超聲波清洗槽(型號(hào)：KQ-500E，昆山市超聲儀器有限公司)。

魚(yú)腥草素鈉對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100247-199601，純度>98﹪)；魚(yú)腥草素鈉原料藥(西安開(kāi)來(lái)生物工程有限公司，批號(hào)：K141203，純度>98﹪)；魚(yú)腥草素鈉-β-環(huán)糊精包合物(自制)；乙腈(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：F000128)；甲醇(色譜純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

精密稱取魚(yú)腥草素鈉對(duì)照品適量，加乙腈-0.01 mol/L四丁基溴化銨溶液—三乙胺(43∶57∶0.3)溶解并稀釋為24 mg/L的溶液。以乙腈-0.01 mol/L四丁基溴化銨溶液—三乙胺(43∶57∶0.3)為空白對(duì)照，在UV200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，掃描圖譜見(jiàn)圖1。

圖1 魚(yú)腥草素鈉紫外掃描圖譜

結(jié)果表明，魚(yú)腥草素鈉在283 nm有最大吸收峰，故選283 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件

色譜柱：大連伊力特C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol/L四丁基溴化銨—三乙胺(43∶57∶0.3)；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μl。在上述色譜條件下進(jìn)樣，魚(yú)腥草素鈉保留時(shí)間為6.1 min，色譜峰與相鄰物質(zhì)峰分離度良好，空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 空白溶液(A)、標(biāo)準(zhǔn)品(B)、樣品(C)的高效液相色譜圖

2.3 溶液制備

2.3.1 對(duì)照品溶液 精密稱取魚(yú)腥草素鈉對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋，制成質(zhì)量濃度為240 mg/L的對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液 取自制包合物30 mg置于100 ml容量瓶中，加蒸餾水適量，超聲5 min，加蒸餾水定容，搖勻，0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取魚(yú)腥草素鈉對(duì)照品12.0 mg，加水準(zhǔn)確配制濃度為240 mg/L的儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液適量至10 ml量瓶中，加水稀釋得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)行HPLC測(cè)定。以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(ρ)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=80025ρ-20759，r=0.9999，表明魚(yú)腥草素鈉在9.6～ 96 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取魚(yú)腥草素鈉對(duì)照品適量，用水溶解并稀釋成低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度為9.6，48，96 mg/L的溶液，于1 d內(nèi)各連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)精密度。結(jié)果見(jiàn)表1，RSD<1%，表明精密度良好。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果(n= 5)

2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的魚(yú)腥草素鈉包合物30 mg，分別加入對(duì)照品溶液10, 20, 30 ml，每個(gè)水平3份，共9份。按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備加樣回收供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)行HPLC測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率測(cè)定結(jié)果(n= 3)

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液，室溫放置0 h、 2 h、 4 h、 8 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD為1.89%，表明供試品溶液在室溫放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取包合物樣品5份，每份30 mg，按照“2.3.2”項(xiàng)下方法操作制成供試液進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD為1.63%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 樣品測(cè)定

取3批樣品按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)行HPLC測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算魚(yú)腥草素鈉含量為17.32 ± 1.90% (n=3)。

3 討 論

魚(yú)腥草素鈉水溶液不穩(wěn)定，易于水解為癸酰乙醛和亞硫酸氫鈉。將魚(yú)腥草素鈉制成包合物可增加其穩(wěn)定性和溶解度，并掩蓋其不良?xì)馕丁ｔ~(yú)腥草素鈉極性較大，流動(dòng)相中主要以離子形式存在，采用反相色譜保留時(shí)間短。流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑四丁基溴化銨，可延長(zhǎng)其保留時(shí)間[6]。流動(dòng)相pH對(duì)離子對(duì)色譜影響較大[7]，以乙腈-0.01 mol/L四丁基溴化銨(43∶57)為流動(dòng)相，出現(xiàn)拖尾峰。加入三乙胺調(diào)節(jié)水相pH為11可避免拖尾，改善峰形。

[1] 吳衛(wèi).魚(yú)腥草的研究進(jìn)展[J].中草藥, 2001, 32(4): 367-370.

[2] 李爽，于慶海，金佩珂.魚(yú)腥草的有效成分、藥理作用及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1997, 14(2):144-147.

[3] 何小燕.魚(yú)腥草素鈉類化合物的構(gòu)效關(guān)系研究現(xiàn)狀[J].藥學(xué)進(jìn)展, 2009,33(4): 163-166.

[4] 王大勇，畢秀麗，周園，等.合成魚(yú)腥草素對(duì)巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)，細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度及T細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-2的影響[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003, 20(3):210-214.

[5] 夏之寧, 向順?lè)? 李珍義, 等.魚(yú)腥草素鈉與β-環(huán)糊精包絡(luò)常數(shù)的電泳法研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003, 38(1):42-45.

[6] 張志斌，錢衛(wèi)德，杭亞軍, 等.反相離子對(duì)色譜法測(cè)定魚(yú)腥草素鈉的含量[J].中成藥，2006, 28(6):895-896.

[7] 馬廉舉，劉新.反相離子對(duì)色譜法測(cè)定馬尾松松針中莽草酸的含量[J].中藥材，2008, 31(1):63-65.

Determination of sodium houttuyfonate in sodium houttuyfonate inclusion complex by HPLC

SONG Wan-yu HANG Yu-jiao LI Wei-hong LI Fei

(Dept.of Pharmacy, Taishan Medical University, Taian 271016, China)

Objective: To establish an HPLC method for the determination of sodium houttuyfonate.Methods: The analysis was performed on a Hypersil ODSC18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with acetonitrile -0.01 mol/L tetrabutyl ammonium bromide solution -trithylamine (43∶57∶0.3) as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min and detection wavelength of 283 nm.Results：The method achieved a good linearity in the range of 9.6～ 96 mg/L for sodium houttuyfonate.The mean recovery of sodium houttuyfonate was 97.64% (RSD = 1.37%,n=9).Conclution: This method is convenient and accurate, it can be used to determine the content of sodium houttuyfonate.

sodium houttuyfonate; HPLC; content determination

國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201510439092)。

宋婉玉，2013級(jí)制藥工程專業(yè)本科生。

李菲，女，講師，研究方向：中藥新劑型和新制劑。

R917

A

1004-7115(2016)10-1102-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.10.007

2016-07-22)