龍脷葉莖顯微和薄層色譜鑒別的研究

丘 琴， 陳明偉， 甄漢深*， 黃培倩,3

( 1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué), 南寧 530001； 2. 廣西中醫(yī)學(xué)校， 南寧 530022； 3. 欽州市中醫(yī)院， 廣西 欽州 53500 )

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龍脷葉莖顯微和薄層色譜鑒別的研究

丘 琴1,2， 陳明偉1， 甄漢深1*， 黃培倩1,3

( 1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué), 南寧 530001； 2. 廣西中醫(yī)學(xué)校， 南寧 530022； 3. 欽州市中醫(yī)院， 廣西 欽州 53500 )

龍脷葉(SauropusspatulifoliusBeille)為大戟科守宮木屬植物，主要分布于我國的廣西和廣東等地，為廣西常用壯藥，具有潤肺止咳、通便之功效，在民間使用廣泛?，F(xiàn)代研究表明，龍脷葉具有較好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。全草均可入藥，為國家藥典收載品種。但其鑒別方法尚未完全建立，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待進一步完善。目前其葉與根的顯微鑒別已有報道，而莖的鑒別未見有相關(guān)報道，因此有必要對龍脷葉莖的鑒別方法進行研究。該研究采用生藥學(xué)顯微鑒別和薄層色譜法對龍脷葉的莖進行了鑒別。結(jié)果表明：龍脷葉莖的主要顯微特征為木栓層有7～12列細(xì)胞，皮層中含有較多淀粉粒，并含有纖維束，韌皮部窄，木質(zhì)部寬，射線明顯，髓部大；粉末可見螺紋、網(wǎng)紋及梯紋導(dǎo)管, 伴有草酸鈣簇晶，淀粉粒較小，有纖維。薄層色譜采用對照藥材進行對照，發(fā)現(xiàn)樣品斑點與對照藥材斑點數(shù)量和位置一一對應(yīng)。上述特征可作為鑒別和制定龍脷葉莖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)， 該研究結(jié)果為建立龍脷葉莖的鑒別方法以及進一步建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

龍脷葉， 莖， 顯微鑒別， 薄層色譜鑒別， 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

龍脷葉(SauropusspatulifoliusBeille)為廣西常用壯藥，又名龍利葉，其來源于大戟科(Euphorbiaceae)守宮木屬(SauropusBl.)植物，主要分布于我國的廣西、廣東、福建等地，全草均可入藥(國家藥典委員會, 2010; 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會， 1999)。中醫(yī)認(rèn)為龍脷葉性平，味甘、淡，具有潤肺止咳，通便之功效，主要用于治療肺燥咳嗽、口干、便秘等癥(國家藥典委員會, 2010; 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會,1999; 中國科學(xué)院植物研究所, 2005; 廣西科學(xué)院廣西植物研究所, 1991)。

龍脷葉全草均可入藥，藥用價值高，為國家藥典收載品種。目前，對龍脷葉的研究主要集中在對其化學(xué)成分和藥理作用的研究。研究表明龍脷葉含有甾醇類等化學(xué)成分(丘琴等，2013，2015)；具有較好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用(甄漢深等，2013；丘琴等，2013)。在龍脷葉的鑒別方面，目前有對龍脷葉的薄層色譜進行了鑒別(陳珍，2014)；龍脷葉的葉與根的顯微鑒別已有相關(guān)報道(劉蓉等，2009；吳懷恩等，2008)。但未見有對龍脷葉莖顯微鑒別和薄層色譜鑒別的相關(guān)報道，因此龍脷葉莖的鑒別方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚需進一步完善。本研究采用顯微鑒別和薄層色譜法，對龍脷葉莖的鑒別方法進行了研究，旨在為建立龍脷葉的鑒別方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

切片機(徠卡，RM-2145型)，生物顯微鏡及Qwin圖像分析系統(tǒng)(徠卡，Mps-60型)，超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，KQ5200B型)，939型自動鋪板器(重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠)。薄層層析硅膠G(青島海洋化工有限公司)，實驗所用試劑均為分析純，水為純凈水。

龍脷葉莖采自廣西欽州、北海、防城、上思、浦北、東興等地，對照藥材采自廣西中醫(yī)藥大學(xué)植物園，經(jīng)廣西一心藥業(yè)馬脷飛副主任藥師鑒定為大戟科守宮木屬植物龍脷葉(SauropusspatulifoliusBeille /SauropusrostratusMiq.)的莖。

1.2 方法

1.2.1 橫切面和粉末制作 采用生藥學(xué)的方法，制作龍脷葉莖的橫切面和粉末。

1.2.2 薄層色譜鑒別 (1)硅膠G薄層板的制備：稱取80 g薄層層析用硅膠G，加入240 mL 1%羧甲基纖維素鈉溶液，攪拌均勻后置于自動鋪板器上鋪板，自然晾干，于105 ℃活化30 min，置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?2)供試品溶液的制備：稱取龍脷葉莖2 g于100 mL帶塞錐形瓶中，加入30 mL水飽和正丁醇，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液。(3)對照藥材溶液的制備：取龍脷葉莖對照藥材1.0 g，按2.2.2項方法制備對照藥材溶液。(4)操作方法：分別吸取供試品溶液和對照藥材溶液各2 μL。于同一塊硅膠G薄層板上，分別用環(huán)己烷∶乙酸乙酯(8∶3)和石油醚∶丙酮(2∶1)兩個展開系統(tǒng)展開，取出，晾干。分別在紫外燈254 nm下檢視和分別噴以2%香草醛-硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

2 結(jié)果與分析

2.1 顯微鑒別

2.1.1 莖橫切面特征 木栓層由7～12列細(xì)胞組成；皮層寬，卵圓形或不規(guī)則形，含有較多淀粉粒，纖維束鑲嵌其中，草酸鈣簇晶較多；韌皮部狹窄，韌皮細(xì)胞細(xì)小且不規(guī)則形；形成層由1～2列細(xì)胞組成；木質(zhì)部較寬，由導(dǎo)管和木薄壁細(xì)胞組成，射線明顯；髓部大，細(xì)胞為不規(guī)則形，含有較多淀粉粒。結(jié)果見圖1，圖2。

2.1.2 莖粉末特征 淡黃色粉末，氣清香，味淡。導(dǎo)管多見，有螺紋、網(wǎng)紋導(dǎo)管，直徑11.5～19.1 μm；淀粉粒很多，直徑1.5～6.4 μm；有纖維，胞壁厚，腔窄，直徑11.5～28.4 μm；簇晶較多，伴有含草酸鈣簇晶薄壁細(xì)胞， 常數(shù)個呈軸向排列， 直徑8.5～19.8 μm；偶見草酸鈣方晶，直徑4.3～10.2 μm； 有木栓細(xì)胞碎片。結(jié)果見圖3。

圖 1 龍脷葉莖橫切面簡圖 (×100) A. 木栓層; B. 皮層; C. 韌皮部; D. 木質(zhì)部; E. 髓部; F. 草酸鈣簇晶。Fig. 1 Transverse section sketch of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie (×100) A. Cork; B. Cortex; C. Phloem; D. Xylem; E. Pith; F. Calcium oxalate cluster crystal.

圖 2 龍脷葉莖橫切面詳圖 (×100) A. 木栓層; B. 皮層; C. 纖維束; D. 草酸鈣簇晶; E. 韌皮部; F. 木質(zhì)部; G. 髓部; H. 淀粉粒。Fig. 2 Transverse section detailed drawing of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie (×100) A. Cork; B. Cortex; C. Fiber bundle； D. Calcium oxalate cluster crystal； E. Phloem； F. Xylem； G. Pith； H. Starch grain.

圖 3 龍脷葉莖粉末圖 (×100) A. 纖維; B. 薄壁細(xì)胞; C. 導(dǎo)管; D. 木栓細(xì)胞; E. 草酸鈣簇晶; F. 草酸鈣方晶; G. 淀粉粒。Fig. 3 Powder characteristic of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie (×100) A. Fiber； B. Parenchyma cell； C. Vessel； D. Cork cell； E. Calcium oxalate cluster crystal； F. Prismatic crystal of calcium oxalate； G. Starch grain.

2.2 薄層色譜鑒別

供試品溶液和對照藥材溶液同一塊硅膠G薄層板上，取出，晾干后，分別在紫外燈254 nm下檢視和分別噴以2%香草醛-硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，供試品溶液薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的斑點。結(jié)果見圖4-7。

圖 4 龍脷葉莖薄層色譜圖 展開劑：環(huán)己烷∶乙酸乙酯(8∶3)； 顯色劑:2%香草醛-硫酸溶液。A. 對照藥材； B-I. 不同產(chǎn)地龍脷葉莖提取液。下同。Fig. 4 TLC of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie Developer: cyclohexane-ethyl acetate(8∶3)； Chromogenic reagent: 2% vanillin sulfuric acid solution. A. Control medicinal material； B-I. Extraction of the stem of S. rostratus Miq. The same below.

圖 5 龍脷葉莖薄層色譜圖 展開劑：環(huán)己烷∶乙酸乙酯(8∶3)；紫外燈(254 nm)觀察。Fig. 5 TLC of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie Developer: cyclohexane-ethyl acetate(8∶3); Ultraviolet lamp observation(254 nm).

圖 6 龍脷葉莖薄層色譜圖 展開劑：石油醚∶丙酮(2∶1)；顯色劑：2%香草醛-硫酸溶液。Fig. 6 TLC of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie Developer: petroleum ether-acetone(2∶1); Chromogenic reagent: 2% vanillin sulfuric acid solution.

圖 7 龍脷葉莖薄層色譜圖 展開劑：石油醚∶丙酮(2∶1)；紫外燈(254 nm)觀察。Fig. 7 TLC of the stem of Sauropus spatulifolius Bellie Developer: petroleum ether-acetone(2∶1); Ultraviolet lamp observation(254 nm).

3 討論與結(jié)論

本研究在顯微鑒別中，龍脷葉莖的木栓層、皮層中所含的淀粉粒、纖維束，韌皮部和木質(zhì)部的寬窄、射線和髓部的特征，粉末中的導(dǎo)管、草酸鈣簇晶、纖維等可作為其主要顯微特征。上述特征可作為鑒別和制定龍脷葉莖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。在薄層色譜鑒別中，因目前尚未能找到龍脷葉有效化學(xué)成分的合適對照品，本研究只能采用其對照藥材進行對照。在展開劑中，以環(huán)己烷∶乙酸乙酯(8∶3)，石油醚∶丙酮(2∶1)系統(tǒng)展開，展開斑點Rf值適中，斑點形狀較完整，無拖尾現(xiàn)象，其研究結(jié)果可作為龍脷葉莖藥材的薄層色譜鑒別的參考依據(jù)。

關(guān)于龍脷葉的薄層鑒別，陳珍(2014)發(fā)表的論文“龍脷葉薄層色譜鑒別”主要針對龍脷葉的皂苷和氨基酸成分進行了鑒別。而本研究中的薄層色譜鑒別主要是對龍脷葉藥材的正丁醇提取液進行鑒別，所用的展開劑配制較前者簡單，斑點數(shù)量較多，且較清晰，分離度較好，鑒別特征更顯著，同時本研究還對龍脷葉的莖進行了顯微鑒別，可為龍脷葉的鑒別和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。

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Microscopic identification and TLC identification on stem ofSauropusspatulifoliusBeille

QIU Qin1,2, CHEN Ming-Wei1， ZHEN Han-Shen1*, HUANG Pei-Qian1,3

( 1.GuangxiUniversityofChineseMedicine, Nanning 530001, China； 2.GuangxiSchoolofChineseMedicine, Nanning 530022, China; 3.QinzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine, Qinzhou 53500, Guangxi, China )

SauropusspatulifoliusBeille belongs to euphorbiaceae sauropus herb，which is mostly distributed in Guangxi Zhuang Autonomous Region and Guangdong Province.S.spatulifoliusBeille is the Zhuang medicine of Guangxi which is used widely. The herb can be widely used for moistening lung and stopping coughing, and the catharsis effect is significant. Modern researches show thatS.spatulifoliusBeille has good anti-inflammatory and analgesic effects. The whole herb has high medicinal value, and it is contained in Chinese national pharmacopoeia. The identification method ofS.spatulifoliusBeille has not been established and the quality standards remained to be further perfected as so far. The microscopic identifications of the leaf and root have been reported, but the microscopic identification of stem has not been reported yet. In the paper, microscopic identification and TLC identification methods were used to identify the stem ofS.spatulifoliusBeille. The main microscopic characteristics of stem ofS.spatulifoliusBeille were as follows: cork layer was consisted of 7-12 column cells, many starch grains and fiber bundles were contained in cortex, and the phloem was narrow and the xylem was wide. The ray was obvious and the medulla was large. In the powder, there were spiral vessels, reticulated vessels, scalariform vessels, calcium oxalate crystal, fiber and small granule. In the TLC identification, the spots of the sample were the same as the control medicinal material. These characteristics provides the reference for the identification and the quality standard setting ofS.spatulifoliusBeille.

SauropusspatulifoliusBeille, stem, microscopic identification, TLC identification， quality standard

10.11931/guihaia.gxzw201507031

2015-11-24

2016-01-15

國家自然科學(xué)基金(81460601); 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳中醫(yī)藥民族醫(yī)藥繼承創(chuàng)新工程研究項目(GZZJ13-03)[Supported by the National Natural Science Foundation of China(81460601); Health Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region (GZZJ13-03)]。

丘琴(1982-)，女，廣西貴港人，博士，副教授，從事藥學(xué)和中藥學(xué)的教學(xué)和科研工作，(E-mail)12031983@163.com。

*通訊作者： 甄漢深，教授，博士生導(dǎo)師，從事藥學(xué)和中藥學(xué)的教學(xué)和科研工作，(E-mail)8zhen@163.com。

Q944.57

A

1000-3142(2016)11-1330-05

丘琴， 陳明偉， 甄漢深， 等. 龍脷葉莖顯微和薄層色譜鑒別的研究 [J]. 廣西植物， 2016， 36(11):1330-1334

QIU Q, CHEN MW, ZHEN HS， et al. Microscopic identification and TLC identification on stem ofSauropusspatulifoliusBeille [J]. Guihaia， 2016，36(11):1330-1334