俄色總黃酮緩釋栓劑的制備工藝研究

徐作軍，毛 羽，雷 敏，楊 昳，林靈敏，楊邦祝，楊學軍

(1.西南民族大學藥學院，四川 成都 610041；2.爐霍雪域俄色有限責任公司，四川 爐霍 624000)

俄色總黃酮緩釋栓劑的制備工藝研究

徐作軍1，毛 羽1，雷 敏2，楊 昳1，林靈敏1，楊邦祝1，楊學軍1

(1.西南民族大學藥學院，四川 成都 610041；2.爐霍雪域俄色有限責任公司，四川 爐霍 624000)

目的進行藏藥新藥俄色總黃酮(ESE)降糖緩釋栓劑的制備工藝研究.方法通過單因素實驗和多因素實驗以混合PEG為基質，分別以HPMC、CMC-Na和硬脂酸為緩釋材料，采用熔融法制備含不同量緩釋材料的ESE緩釋栓劑，考察體外累計釋放度和緩釋材料含量之間的關系，優(yōu)化ESE緩釋栓劑的最佳處方和制備工藝.結果ESE緩釋栓劑的最優(yōu)處方組成為:ESE 200 g；硬脂酸400 g，PEG400 1400 g，PEG4000 1400 g.ESE緩釋栓劑在12 h內緩慢釋放，且釋藥完全(＞90%).結論ESE緩釋栓劑處方設計合理，制備工藝可行.

俄色；總黃酮；緩釋；栓劑

俄色樹是產于青藏高原海拔3000ˉ3800 m之間的薔薇科蘋果屬植物變葉海棠Malus toringoides (Rehd.)Hughes.ESE為俄色葉總黃酮提取物，導師課題組2005年首次研究發(fā)現ESE的藥用和經濟價值.并系統進行了以ESE為主要原料的食品、保健食品、藥品等相關研究開發(fā)工作[1-3].研究表明，ESE具有降血糖、降血脂、降血壓、抗糖尿病并發(fā)癥等多種生理活性及藥理作用，對人類的三高疾病的治療、輔助治療及預防有重要意義.并在研究中發(fā)現，ESE會在胃腸道內被酸解和酶解，導致口服生物利用度降低.因此，為避免ESE在胃腸道中被酸解和酶解并避免肝臟的首過效應，提高ESE的生物利用度，故將其制成緩釋肛門栓劑[5-10].

本實驗采用單因素和多因素試驗考察ESE緩釋栓劑的制備過程中各因素對ESE緩釋栓劑體外累計釋放度的影響，優(yōu)化其處方及制備工藝參數，制備藏藥新藥俄色總黃酮(ESE)降糖緩釋栓劑.

1 儀器與材料

722 型分光光度計(上海第三分析儀器廠)；ZF—I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)；DZF-6050型真空干燥器(上海-恒科技有限公司). ESE(自制)，PEG400(天津博迪化工股份有限公司)；PEG600(天津博迪化工股份有限公司)；PEG4000(成都市聯合化工試劑研究所)；PEG6000(成都市聯合化工試劑研究所)；硬脂酸(成都市科龍化工試劑廠)，HPMC(四川瀚華藥用輔料有限公司)；HPMC試劑為化學純，其他試劑均為分析純.

2 實驗方法與結果

2.1 ESE緩釋栓劑制備

按《中華人民共和國藥典》2015版四部制劑通則0107“栓劑”中的有關規(guī)定[4]，供制備栓劑用的固體藥物，應全部通過六號篩(100目).將原料輔料先于50℃干燥兩小時，粉碎后過100目篩備用.按處方量取基質，于60℃水浴加熱熔融后，加入處方量的輔料，待輔料熔融后，加入處方量ESE總黃酮藥粉，攪拌混合均勻.攪拌混合均勻，注模成型后得栓劑.

2.2 含量測定方法的建立

2.2.1 供試品溶液的制備

取ESE緩釋栓劑3粒，在研缽中研碎，稱取1 g，置25 mL錐形瓶中，用30 mL甲醇溶解，超聲20 min，放冷，過濾，濾液置于25 mL容量瓶中定容，精密量取濾液10 mL，減壓旋干，殘渣用甲醇超聲溶解并定容于10 mL容量瓶中，過濾，濾液作為供試品溶液.

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取ESE對照品0.00460 g，置10 mL的容量瓶中，加95%乙醇溶解并稀釋至刻度，得0.460 mg/mL ESE對照品溶液.

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

按處方比例，去除藥品只加基質與輔料制備空白栓劑.參照2.2.1方法制備溶液，作為陰性樣品溶液.

2.2.4 ESE含量測定

選用ESE為對照品，利用黃酮與鋁鹽的顯色反應，按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0401“紫外-可見分光光度法”中比色法對ESE進行含量測定，既是測定其吸光度，并將測定結果用空白實驗校正，按標準曲線回歸方程計算ESE的含量.

2.2.5 標準曲線的制備

精密吸取0.2 mL ESE溶液于具塞試管中，用95 %乙醇加至4 mL，再加入5%NaNO2溶液0.5 mL，搖勻；6 min后加入10%Al(NO)3溶液0.5 mL，搖勻；6 min后加入4%NaOH溶液4 mL，搖勻并靜置10 min，隨行試劑作為空白.

精密量取0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2 mL，2.5 mL ESE對照品溶液于具塞試管中，照上法顯色后，隨行試劑為空白，0.5 h內于468 nm測定吸光度，以ESE含量(mg)為橫坐標，吸收值A為縱坐標，繪制標準曲線，得ESE含量與吸光度之間的關系為:A＝4.2043＋0.0031，R2＝0.9997.表明ESE含量在0.023 mg-0.489 mg范圍內與吸光度A有良好的線性關系.

2.3 釋放度的測定方法

按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0931“釋放度測定法”第一法轉籃法[4]，以脫氣的新鮮純化水900 mL為溶出介質，溫度(37士0.5)℃，轉速100 r/min，經0.5、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h，取樣10 mL，0.8 μm微孔濾膜過濾，并即時補充新鮮的同溫度的介質10 mL，減壓揮干溶劑，殘渣用甲醇超聲溶解至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻.精密吸取供試品液適量，按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0401“紫外-可見分光光度法”中比色法[4]對ESE進行含量測定，既測定其吸光度，代入標準曲線求含量，計算不同時間的累積釋藥百分率.

2.4 處方篩選

2.4.1 基質的初步篩選

取適量各型號的PEG，按比例混合，在65℃下熔融，注入模具中，冷卻后，得空白基質栓.按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0612“熔點測定法”第二法[4]測定不易粉碎的固體藥品提供的方法，測定混合PEG各比例的熔點，見表1.

表1 各比例混合PEG的熔點測定Table 1 Melting point determination of mixed PEG in various proportions

查閱文獻[11-16]，PEG的混合比例多數為上述幾組，通過測其熔點，經比較，PEG600:PEG6000各比例所測熔點高，為了避免體溫下不融化或不軟化，故選擇PEG400:PEG4000這幾組進行下一步實驗.

2.4.2 緩釋輔料的篩選

1)HPMC對其釋放度的影響

昌樂并不出產黃金，卻在這十幾年里，形成了一條集藍寶石開采、黃金珠寶首飾加工、寶石鑲嵌、展覽展示、批發(fā)零售到休閑旅游購物的各環(huán)節(jié)功能較完備的產業(yè)鏈條。在昌樂黃金產業(yè)發(fā)展的歷史長河中，有這樣一家企業(yè)，有這樣一位人物起到了至關重要的作用。

羥丙基甲基纖維素(HPMC)是一種水溶性凝膠材料，緩釋能力顯著.本文針對其兩種型號及用量對藥物釋放的影響進行考察.選用二種不同粘度規(guī)格的HPMC，粘度分別為K4m，K15m.取適量水溶性基質PEG400:PEG4000＝1:2，加入藏藥新藥俄色(ESE)總黃酮藥粉及不同型號的HPMC(K15m和K4m)及其不同用量的HPMC(1.5%、9%、15%)，按照其制備工藝分別制備藏藥新藥俄色總黃酮緩釋栓劑.按2.3項下釋放度的測定方法，計算出累積釋放度，其累積釋放度結果見圖1、圖2.

圖1 PEG基質＋HPMC(K4m)累積釋放度曲線Fig.1 Cumulative release curve of PEG matrix＋HPMC(K4m)

圖2 PEG基質＋HPMC(K15m)累積釋放度曲線Fig.2 Cumulative release curve of PEG matrix＋HPMC(K15m)

結果表明:隨著HPMC用量的增加，釋藥有緩慢減慢，但是基本上2 h以后釋放度基本無變化.所以當基質為PEG時HPMC的緩釋效果不明顯.

2)CMC-Na對其釋放度的影響

羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)是一種水溶性凝膠材料，具有增稠、乳化等作用.取適量水溶性基質PEG400:PEG4000＝1:2，加入藏藥新藥俄色(ESE)總黃酮藥粉及不同用量的CMC-NA(1.5%、9%、 15%)，按照其制備工藝分別制備藏藥新藥俄色總黃酮緩釋栓劑.按2.3項下釋放度的測定方法，計算出累積釋放度，其累積釋放度結果見圖3.

圖3 PEG基質-CMC-Na累積釋放度曲線Fig.3 Cumulative release curve of PEG matrix-CMC-Na

結果表明:當基質為PEG時，隨著CMC-NA的含量增加，釋藥速度稍有減緩，且6 h之內藥物釋放基本完全，緩釋效果不明顯.

3)硬脂酸對其釋放度的影響

取適量水溶性基質PEG400:PEG4000＝1:2，加入藏藥新藥俄色(ESE)總黃酮藥粉及不同含量的硬脂酸(1.5%、9%、15%)，按照其制備工藝分別制備藏藥新藥俄色總黃酮緩釋栓劑.按2.3項下釋放度的測定方法，計算出累積釋放度，其累積釋放度結果見圖4.

圖4 PEG基質-硬脂酸累積釋放度曲線Fig.4 Cumulative release curve of PEG matrix and stearic acid

2.4.3 ESE緩釋栓劑的處方優(yōu)化

2.4.3.1 檢測方法

以對藥物釋放度的綜合評分為評價指標，選擇最佳處方，主要考察三個時間點藥物的累積釋放度:1 h的累計釋放度:以30%為標準；4 h的累計釋放度:以60%為標準；12 h的累計釋放度:以95%為標準.

采用綜合評分T＝｜T1-30｜＋｜T4-60｜＋｜T12-95｜，T值越小，表明與所選用的標準趨勢接近.

2.4.3.2 試驗方法

依據單因素篩選結果，將PEG400:PEG4000的比例、硬脂酸的用量進行實驗.見表2.通過藥物溶出釋放測定不同時間點的釋放度，釋放結果圖5、圖6、圖7.

表2 PEG比例與硬脂酸用量的實驗方案Table 2 Experimental program of PEG ratios and stearic acid contents

圖5 PEG比例為1:2時硬脂酸不同用量的累積釋放度曲線Fig.5 Cumulative release curve of different dosage of stearic acid on PEG ratio of 1:2

圖6 PEG比例為1:1時硬脂酸不同用量的累積釋放度曲線Fig.6 Cumulative release curve of different dosage of stearic acid at PEG ratio of 1:1

圖7 PEG比例為2:1時硬脂酸不同用量的累積釋放度曲線Fig.7 Cumulative release curve of different dosage of stearic acid at PEG ratio of 2:1

結果表明:

1)當PEG400:PEG4000＝1:2時，雖然隨著硬脂酸的含量增大，釋藥變緩，但是基本上10 h以內就釋放完全了.

2)當PEG400:PEG4000＝1:1時，硬脂酸含量為15%時，釋藥緩慢，大于12 h，緩釋效果明顯.

3)當PEG400:PEG4000＝2:1時，硬脂酸含量較小時，釋藥較迅速，緩釋效果不明顯，當硬脂酸含量為15%時，釋放時間明大于12 h，緩釋效果明顯.

綜上所述，故選取組6、組9重復實驗，同時制備了不加硬脂酸只有基質和藥粉的組6和組9做對照，進行釋放度測定，結果見圖8、圖9.

圖8 PEG比例為1:1硬脂酸含量為15%時栓劑的釋放曲線Fig.8 Release curve of suppository with stearic acid content of 15%at PEG ratio of 1:1

圖9 PEG比例為2:1硬脂酸含量為15%時栓劑的釋放曲線Fig.9 Release curve of suppository with stearic acid content of 15%at PEG ratio of 2:1

由上圖可知，加了緩釋材料的組6釋放緩慢，并且濃度平穩(wěn)；加了緩釋材料的組9釋放緩慢但其濃度不平穩(wěn).所以，選擇PEG400:PEG4000比例為1:1，硬脂酸含量為15%.

2.5 ESE緩釋栓劑的最佳處方及制備工藝

綜合單因素考察和多因素實驗的結果，確定ESE緩釋栓劑的最佳處方和制備工藝如下.處方規(guī)格:每粒2 g.

制備工藝:將原料輔料先于50℃干燥兩小時，粉碎后過100目篩備用.取處方量PEG400和PEG4000，于60℃水浴加熱熔融后，加入適量15%硬脂酸，待硬脂酸熔融后，加入ESE總黃酮藥粉，攪拌混合均勻，注模成型后得栓劑.

2.6 驗證實驗

為保證制劑處方及工藝的可行性，對優(yōu)選的最佳處方及最佳制備工藝制備3批樣品，通過對三批樣品釋放度的考察來進行最佳處方和制備工藝驗證.驗證結果見表3.

表3 處方及制備工藝驗證結果Table 3 Validation of formulation and preparation process

結果表明:各批樣品累積釋放度變化不大，在各溶出時間點的累積釋放度的RSD值均小于5%，所以，該最佳處方及最佳制備工藝較為科學、可行.

3 結論

根據輔料篩選實驗結果，當PEG400:PEG4000＝1:1，硬脂酸含量15%時藥物的累計釋放度符合要求，故選取PEG400:PEG4000＝1:1，硬脂酸含量15 %為ESE緩釋栓劑基質的最佳處方.因此，確定ESE緩釋栓劑的最佳處方為:ESE 200 g，硬脂酸400 g，PEG 1400 g，共1000粒.規(guī)格:每粒2 g.總黃酮含量為200 mg/粒.ESE緩釋栓劑的最佳制備工藝為:將原料輔料先于50℃干燥兩小時，粉碎后過100目篩備用.取處方量PEG400和PEG4000，于60℃水浴加熱熔融后，加入適量15%硬脂酸，待硬脂酸熔融后，加入ESE總黃酮藥粉，攪拌混合均勻，注模成型后得栓劑.三批ESE緩釋栓劑處方工藝驗證實驗在各溶出時間點的累積釋放度的RSD值均小于5%，證明此栓劑處方設計合理，制備工藝可行.

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(責任編輯:李建忠，付強，張陽，羅敏；英文編輯:周序林，鄭玉才)

Preparation of ESE sustained-release suppository

XU Zuo-jun1，MAO Yu1，LEI Min2，YANG Yi1，LIN Ling-min1，YANG Bang-zhu1，YANG Xue-jun1
(1.School of Pharmacy，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，P.R.C.；2.Lu-huo Snow-world ESE Limited Liability Company，Lu-huo 624000，P.R.C.)

Objective To study the preparation of new Tibetan drugs named ESE anti-diabetic sustained release suppository.Methods In order to mix PEG as matrix，HPMC，CMC-Na and stearic acid as the controlled release materials，melt method was used to prepare ESE sustained-release suppository containing different amounts of sustained material by one-factor experimental design and multi-factors experimental design.The relationship between in vitro cumulative release and sustained release material content was studied.Prescription and preparation of ESE anti-diabetic sustained release suppositories were optimized.Results The optimized prescription of ESE anti-diabetic sustained release suppositories is as follows:ESE 200 g；stearic acid 400 g；PEG400 1400 g，PEG4000 1400 g.ESE anti-diabetic sustained release suppositories can release more than 90%in 12 h.Conclusion The prescription of ESE anti-diabetic sustained release suppositories is reasonable，and the preparation is feasible.

ESE；total falconoid；sustained release；suppository

R283；R29

A

2095-4271(2016)05-0496-07

10.11920/xnmdzk.2016.05.005

2016-06-22

毛羽(1961—)，男，漢族，四川人，副教授，博士，碩士生導師，研究方向:中藥及民族藥新藥制劑研發(fā).E-mail:yumao192000＠126.com

四川省農業(yè)科技成果轉化資金項目(14NZ0015)