DcR3在胰腺癌組織中的表達及其臨床意義

張文熠 林偉 余樂杰

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DcR3在胰腺癌組織中的表達及其臨床意義

張文熠 林偉 余樂杰

誘捕受體(decoy receptor，DcR)是新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子受體(tumour necrosis factor receptor，TNFR)超家族成員。已有研究表明，DcR3基因能夠通過多種途徑阻斷T細胞、自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)誘導腫瘤細胞凋亡，從而促進惡性腫瘤的免疫逃逸，在肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中扮演重要角色[1]。DcR家族有DcR1、DcR2、DcR3三個成員，目前關于胰腺癌涉及DcR的研究主要集中在DcR1、DcR2，而對DcR3的研究相對較少[2]。隨著DcR3單克隆抗體技術(shù)以及小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)技術(shù)的發(fā)展，DcR3在惡性腫瘤的基因診斷及靶向治療方面的應用價值越來越大[3]。本研究檢測胰腺癌組織DCR的表達，探討其對胰腺癌診斷、治療及預后判斷的意義。

一、資料與方法

1．研究對象：選取溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科2010年至2012年收集的資料完整的40例胰腺癌組織、20例匹配的胰腺癌旁組織、20例正常胰腺組織。癌旁組織是指距離病灶<3 cm的胰腺組織，正常胰腺組織來源于本院外科手術(shù)的患者，均經(jīng)病理學檢查證實為正常胰腺組織。術(shù)前接受過放化療治療的患者、臨床隨訪資料不完整的患者以及標本未經(jīng)病理學證實的患者均排除在外。出院后每3個月復查1次全腹部及胸部CT，檢測腫瘤標志物，隨訪3年。

2．免疫組化檢查：采用鏈霉親和素-過氧化物酶法檢測胰腺組織DcR3蛋白表達。DcR3單克隆抗體購自ABCAM公司，工作濃度1∶50；免疫組化SP法試劑盒購自北京賽馳生物科技公司，按說明書操作。以PBS替代一抗作為陰性對照。由病理科醫(yī)師盲法讀片。胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色、棕黃色、褐色顆粒為陽性表達，并根據(jù)著色強度及陽性細胞數(shù)評分：無色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，褐色為3分；陽性細胞數(shù)占總細胞數(shù)<5%為0分、5%～<25%為1分、25%～<50%為2分、50%～<75%為3分、>75%為4分。兩分相乘>4分為陽性。

二、結(jié)果

1．臨床資料：胰腺癌組織40例，其中男性22例、女性18例，年齡39～72歲，平均(58±10)歲；根據(jù)WHO2000年制定的腫瘤分期標準，高分化8例、中分化9例、低分化23例；依據(jù)AJCCTNM分期標準，Ⅰ期4例、Ⅱ期10例、Ⅲ期26例。癌旁組織20例，其中男性11例、女性9例，年齡42～70歲，平均(56±10)歲。正常胰腺組織20例，其中男性10例、女性10例，年齡44～68歲，平均(58±9)歲。3組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2．胰腺組織DcR3蛋白表達：胰腺癌、癌旁組織、正常胰腺組織DcR3蛋白陽性表達率分別為77.5%(31/40)、35.0%(7/20)、5.0%(1/20)，胰腺癌組織顯著高于癌旁組織及正常胰腺組織，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=32.400，P<0.001，圖1)。

3．胰腺癌組織DcR3蛋白表達與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關性：胰腺癌組織DcR3蛋白表達與腫瘤TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有顯著的相關性(P值均<0.05，表1)。

4．胰腺癌組織DcR3蛋白表達與患者預后的關系：40例胰腺癌患者隨訪9～34個月，失訪3例，隨訪率92.5%。到截止日期僅1例DcR3蛋白陰性表達患者存活。DcR3蛋白陰性表達的胰腺癌患者中位生存時間為24.8個月，顯著高于DcR3蛋白陽性表達胰腺癌患者的17.8個月(圖2)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.889，P=0.029)。

討論 目前的研究表明，腫瘤的發(fā)生是由于細胞增殖與凋亡的平衡過程受到破壞所致。DcR3是重要的凋亡抑制蛋白之一，由300個氨基酸組成，因缺乏跨膜結(jié)構(gòu)，屬于分泌性蛋白，能夠在血清中檢出。DcR3與TNFR具有高度同源性，能夠通過與Fas等介導細胞凋亡的蛋白分子配體相結(jié)合，阻斷后者介導的細胞凋亡過程[4]；另外，DcR3還參與T細胞的免疫凋節(jié)，導致機體免疫功能紊亂，促進腫瘤細胞的免疫逃逸[6]。已有研究表明，DcR3過表達與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關。蘇傳麗[7]檢測肝癌、肝硬化、急性感染患者的DcR3水平，證實肝癌患者DcR3陽性率明顯高于其他良性肝病患者，能夠鑒別腫瘤與炎癥性疾病。周健等[8]報道，與良性腫瘤患者及健康人群比較，胰腺癌患者血清DcR3水平顯著升高，而腫瘤切除后血清DcR3水平明顯下降。本研究結(jié)果也顯示，胰腺癌組織DcR3蛋白陽性表達率顯著高于癌旁胰腺組織及正常胰腺組織。DcR3在胰腺癌發(fā)病中的機制可能為：(1)DcR3能夠與Fas競爭結(jié)合Fas配體(FasL)，形成性質(zhì)穩(wěn)定的DcR3-Fc-FasL復合物，從而抑制FasL有效發(fā)揮介導細胞凋亡的作用[9]。(2)DcR3能夠與單純皰疹病毒侵入介質(zhì)(herpesvirusentrymediator，HVEM)的受體(LIGHT)相結(jié)合，阻斷LIGHT與淋巴毒素β受體及單純皰疹病毒侵入介質(zhì)相結(jié)合介導的細胞凋亡機制[10]。(3)DcR3基因表達能夠影響LIGHT與腫瘤壞死因子樣配體1A(TL1A)介導的T細胞激活機制[11]，使CD80等多種T淋巴細胞協(xié)同刺激信號分子的水平明顯降低，從而降低機體的細胞免疫功能。(4)DcR3能夠上調(diào)IL-4的表達，從而抑制CD4+T淋巴細胞活性，導致Th1/Th2的失衡[12]。

圖1 癌旁組織(1A)、正常胰腺組織(1B)、胰腺癌組織(1C)DcR3蛋白表達(SP ×20)

表1 胰腺癌組織DcR3蛋白表達與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關性

臨床病理參數(shù)陽性例數(shù)(%)陰性例數(shù)(%)χ2值P值年齡(歲)0．0180．893 ≥5518(58．1)5(55．6) <5513(41．9)4(44．4)性別0．5230．47 男18(58．1)4(44．4) 女13(41．9)5(55．6)腫瘤直徑(cm)0．0430．845 ≥416(51．6)5(55．6) <415(48．4)4(44．4)TNM分期5．1190．024 Ⅰ+Ⅱ8(25．8)6(66．7) Ⅲ23(74．2)3(33．3)分化程度5．9140．015 高+中10(32．3)7(77．8) 低21(67．7)2(22．2)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4．2690．039 是12(38．7)7(77．8) 否19(61．3)2(22．2)

圖2 生存函數(shù)圖

Dias-Santos等[13]研究報道，胰腺癌DcR3表達與腫瘤組織分化程度顯著呈負相關，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關。本研究結(jié)果顯示，DcR3陽性表達與胰腺癌TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存時間等密切相關，這現(xiàn)象可能與DcR3與TL1A能夠促進血管新生所致[14]。已有研究表明，DcR3基因表達能夠影響肝癌患者的腫瘤血管密度[15]，推測除了抑制腫瘤細胞凋亡，DcR3可能還通過影響腫瘤組織的血供和營養(yǎng)狀態(tài)，從而影響腫瘤組織的生長和侵襲能力。但其具體機制還有待以后進一步研究。

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(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2016.06.013

325000 浙江溫州，溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院放化療科(張文熠、林偉)，胃腸外科(余樂杰)

張文熠，Email: zesir_mark@163.com

2016-03-14)