金屬還原酶FreB2對(duì)煙曲霉鐵吸收及氧化壓力應(yīng)答的影響

王偉偉 ， 吳翠嬌*， 趙 巍， 張姍姍， 王 斌

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院 組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，山東 青島 266071；2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院 微生物學(xué)教研室，山東 青島 266071)

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金屬還原酶FreB2對(duì)煙曲霉鐵吸收及氧化壓力應(yīng)答的影響

王偉偉1， 吳翠嬌1*， 趙 巍2*， 張姍姍1， 王 斌2

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院 組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，山東 青島 266071；2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院 微生物學(xué)教研室，山東 青島 266071)

利用構(gòu)建的煙曲霉金屬還原酶基因(AFUA-1G00350，F(xiàn)reB2)缺失突變株，對(duì)煙曲霉金屬還原酶基因FreB2功能進(jìn)行初步研究，為揭示該基因與煙曲霉的致病關(guān)系提供依據(jù)。比較野生株和基因缺失突變株在AMM和無(wú)鐵AMM液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)高鐵還原酶的活性，繪制不同時(shí)間野生株和基因缺失突變株在AMM和無(wú)鐵AMM液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)高鐵還原酶活性曲線。利用Real-Time PCR方法分析SreA、SidA、FetC、FtrA和FreB這些與鐵的吸收相關(guān)基因的mRNA的表達(dá)量變化。測(cè)定野生株和基因缺失突變株對(duì)氧化壓力的敏感性及胞內(nèi)活性氧物質(zhì)含量。不論在AMM液體培養(yǎng)基中還是在無(wú)鐵AMM液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，突變株高鐵還原酶的活性都明顯高于野生株高鐵還原酶活性。與野生株相比培養(yǎng)60 h時(shí)，突變株SreA、SidA、FetC、FtrA和FreB這些與鐵的吸收相關(guān)基因的表達(dá)量出現(xiàn)明顯上調(diào)。氧化壓力敏感性實(shí)驗(yàn)顯示，基因缺失突變株對(duì)H2O2的敏感性顯著增強(qiáng)，同時(shí)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)含量明顯增多。金屬還原酶基因FreB2在煙曲霉鐵吸收及氧化壓力應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮作用；煙曲霉與鐵吸收相關(guān)基因之間存在功能互補(bǔ)效應(yīng)。

煙曲霉；金屬還原酶；Real-Time PCR；活性氧物質(zhì)

煙曲霉是最常見(jiàn)的通過(guò)空氣傳播的條件致病菌[1]。鐵是微生物必須的微量元素，鐵離子的氧化還原特性使其能夠作為許多關(guān)鍵酶類的輔助因子參與細(xì)胞內(nèi)一系列重要的代謝過(guò)程[2-3]。鐵離子濃度與煙曲霉的生長(zhǎng)和致病性密切相關(guān)[4]。煙曲霉菌從宿主體內(nèi)獲得鐵的能力是其致病性的重要條件[5]。在人體內(nèi)，鐵通常以乳鐵蛋白或載鐵蛋白的形式存在，且哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)有通過(guò)限制鐵的可利用率來(lái)抵抗微生物感染的機(jī)制，因此形成了天然的低鐵環(huán)境[6-7]。為從宿主獲得鐵這種微量元素，煙曲霉形成了兩種鐵吸收途徑，包括高親和性鐵吸收系統(tǒng)(RIA)和轉(zhuǎn)鐵載體吸收系統(tǒng)，這兩種系統(tǒng)在菌體處于缺鐵環(huán)境時(shí)都被誘導(dǎo)表達(dá)[8]。在轉(zhuǎn)鐵載體吸收系統(tǒng)中，兩種轉(zhuǎn)鐵載體fusarinine C (FcS)和triacetylfusarinine C (TAFC)在鳥(niǎo)氨酸單氧酶的作用下被合成[9]。FcS和TAFC負(fù)責(zé)收集細(xì)胞外的鐵離子，然后被轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)[10]。在RIA系統(tǒng)中，質(zhì)膜上的金屬還原酶等先將不溶性Fe3+還原為可溶性的Fe2+[11]，然后Fe2+被高親和性轉(zhuǎn)鐵載體和鐵氧化還原酶蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)[12-13]。因此，金屬還原酶還原過(guò)程是煙曲霉RIA系統(tǒng)攝取鐵關(guān)鍵的第一步。目前已知在這兩種鐵吸收系統(tǒng)中起作用的基因見(jiàn)表1。

煙曲霉共有15種編碼金屬還原酶的基因，但目前對(duì)這些基因功能和結(jié)構(gòu)的分析很少[14]。僅有FreB一種基因被證實(shí)在煙曲霉鐵缺乏時(shí)和鐵的吸收相關(guān)[11]。本研究選取金屬還原酶基因AFUA-1G00350進(jìn)行研究,并將其命名為FreB2。

表1 煙曲霉鐵吸收相關(guān)基因

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 煙曲霉野生菌株Af293(W2)為美國(guó)辛辛納提大學(xué)病理和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)系Judith C Rhodes教授惠贈(zèng)；金屬還原酶基因FreB2缺失突變菌株(ΔFreB2)為本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建。

1.1.2 培養(yǎng)基 曲霉菌基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基(AspergillusMinimal Medium，AMM)，AMM固體平板，YG培養(yǎng)基的配制見(jiàn)文獻(xiàn)[15]。無(wú)鐵AMM除不加鐵鹽外與AMM培養(yǎng)基相同。

1.1.3 主要試劑及儀器 Bathophenanthroline disulphonate(BPS，美國(guó)Sigma公司)；PCR相關(guān)試劑(大連寶生物工程有限公司)；FermentasTaq2×Mix(MBI公司)；trizol(日本TaKaRa公司)；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京全式金公司)；熒光定量染料(北京康為世紀(jì)公司)；二氯熒光素(DCFH-DA,美國(guó)Sigma公司)；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；酶標(biāo)儀(Tecan SUNRISE，瑞士)；熒光顯微鏡(Olypums DP80，日本)；羅氏Lightcycler 96 qPCR儀(瑞士Roche公司)。

1.2 方法

1.2.1 Fe2+濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別向100 μL 2 mmol/L BPS溶液中加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 μL 濃度為1 mmol/L的FeSO4溶液，然后加入無(wú)菌雙蒸水使溶液總體積達(dá)200 μL。37 ℃避光孵育1 h后于535 nm波長(zhǎng)下測(cè)定溶液吸光值。根據(jù)不同 Fe2+濃度對(duì)應(yīng)的吸光值繪制Fe2+濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出Fe2+濃度與對(duì)應(yīng)吸光值之間的函數(shù)關(guān)系。

1.2.2 金屬還原酶活性測(cè)定 采用Nyhus等[16]文章中使用的方法，將W2和ΔFreB2菌株的孢子以1.0×106個(gè)/mL濃度分別接種于100 mL AMM和無(wú)鐵AMM液體培養(yǎng)基，200 r/min、37 ℃恒溫?fù)u床震蕩培養(yǎng)。在接種12、24、36、48、60、72 h時(shí)測(cè)量高鐵還原酶活性。測(cè)量時(shí)取包含等量菌體的1 mL菌液，12 000 r/min、4 ℃離心10 min，吸出500 μL上清，將剩余500 μL菌液混勻。分別向上清和菌液中加入250 μL 4 mmol/L BPS和250 μL 4 mmol/L HEDTA-Fe3+。37 ℃避光孵育1 h后在535 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。根據(jù)Fe2+濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出Fe2+濃度。金屬還原酶活性：(nmol Fe2+/mL/h)=(c菌液Fe2+-c上清Fe2+)/ t。

c：從Fe2+濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的Fe2+濃度，t：加入BPS和HEDTA-Fe3+后的孵育時(shí)間。

1.2.3 Real-time PCR法檢測(cè)鐵吸收相關(guān)基因的表達(dá) 將W2和ΔFreB2菌株的孢子以1.0×106個(gè)/mL濃度分別接種于5 mL AMM和5 mL無(wú)鐵AMM液體培養(yǎng)基，300 r/min、37 ℃恒溫?fù)u床震蕩培養(yǎng)。60 h時(shí)收集并干燥菌體，采用液氮研磨法破碎菌體后加trizol提取總RNA?？俁NA用反轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以cDNA為模版擴(kuò)增。擴(kuò)增引物均由上海生工生物工程有限公司設(shè)計(jì)和合成。內(nèi)參為GAPDH，內(nèi)參引物為上海生工生物工程有限公司合成，引物序列見(jiàn)表2。反應(yīng)參數(shù)：95 ℃預(yù)變性1 min；95 ℃ 15 s，56 ℃ 15 s，72 ℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。以雙ΔCt法計(jì)算各組基因與內(nèi)參的比值。

表2 本研究所用引物

1.2.4 氧化壓力敏感性測(cè)定 采用5倍稀釋法用無(wú)菌雙蒸水依次將W2和ΔFreB2菌株的孢子濃度調(diào)整為4×105、8×104、1.6×104、3.2×103、6.4×102個(gè)/μL。分別向以上5個(gè)濃度的W2和ΔFreB2菌株孢子懸液中加入等體積H2O2，使H2O2終濃度分別為100、200、300、400、500 mmol/L，對(duì)照組將H2O2改為等體積PBS, 30 ℃孵育30 min。取5 μL處理后的各濃度W2和ΔFreB2菌株孢子懸液進(jìn)行點(diǎn)板實(shí)驗(yàn)，點(diǎn)板所用培養(yǎng)基為AMM固體培養(yǎng)基。待點(diǎn)板菌液完全滲透后將各平板于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)48～72 h，觀察各菌株生長(zhǎng)情況。

1.2.5 活性氧物質(zhì)含量測(cè)定 將W2和ΔFreB2菌株的孢子以4.0×105個(gè)/mL濃度接種于YG液體培養(yǎng)基，混勻后以每孔200 μL接入96孔板，30 ℃培養(yǎng)12 h。用PBS清洗2次，分別加入濃度為100、200 mmol/L的H2O2200 μL/孔，30 ℃恒溫孵育30 min后用PBS清洗2次，加入40 μmol/L DCFH-DA 50 μL/孔，37 ℃恒溫避光孵育30 min，PBS清洗2次后置于熒光顯微鏡下觀察。在熒光檢測(cè)過(guò)程中選擇多個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，分別記錄總細(xì)胞數(shù)(N)和綠色熒光細(xì)胞數(shù)(Nf)，以此計(jì)算活性氧物質(zhì)(ROS)陽(yáng)性細(xì)胞的百分率(%)：

ROS陽(yáng)性細(xì)胞百分率(%)=(Nf/N)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 Fe2+濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線

繪制 Fe2+濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，得出Fe2+濃度(x)與吸光值(y)之間的函數(shù)關(guān)系式為y=0.047 6x-0.007 4。

圖1 二價(jià)鐵濃度與吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 金屬還原酶活性

不同時(shí)間點(diǎn)和不同培養(yǎng)基培養(yǎng)的W2和ΔFreB2菌體內(nèi)，金屬還原酶活性不同。無(wú)鐵AMM培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，ΔFreB2菌株在12～72 h間金屬還原酶活性始終高于W2，且和W2菌株一樣在36 h左右達(dá)到峰值。AMM培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，在24～72 h間ΔFreB2菌株金屬還原酶活性高于W2，在60 h左右活性達(dá)到峰值(見(jiàn)圖2)。

2.3 與鐵吸收相關(guān)基因的mRNA表達(dá)變化

由圖3可見(jiàn)，無(wú)論在無(wú)鐵AMM培養(yǎng)基還是AMM培養(yǎng)基中，與W2菌株相比，ΔFreB2菌株與鐵吸收相關(guān)基因MirB、SreA、SidA、FetC、FreB的表達(dá)量都出現(xiàn)上調(diào)，差異有顯著性。

圖2 不同菌株各時(shí)間點(diǎn)金屬還原酶活性曲線Fig.2 The curve of metalloreductase activity of different strains over time

2.4 對(duì)氧化壓力的敏感性

由圖4可知，在AMM固體平板培養(yǎng)下，對(duì)照組W2菌株與ΔFreB2菌株生長(zhǎng)情況無(wú)明顯差異。而將W2菌株和ΔFreB2菌株孢子分別用不同濃度H2O2處理后，W2和ΔFreB2菌株的生長(zhǎng)都受到不同程度的影響，但ΔFreB2菌株與W2菌株相比生長(zhǎng)缺陷更明顯，特別是H2O2濃度為100和200 mmol/L處理組。當(dāng)H2O2濃度升為300、400和500 mmol/L時(shí)，W2和ΔFreB2菌株的生長(zhǎng)都受到明顯影響。ΔFreB2菌株與W2菌株相比，對(duì)H2O2的敏感性增強(qiáng)。

圖3 與鐵吸收相關(guān)基因的mRNA表達(dá)變化

2.5 活性氧物質(zhì)含量

研究結(jié)果顯示，未用H2O2處理時(shí)W2菌株和ΔFreB2菌株胞內(nèi)均無(wú)明顯的ROS產(chǎn)生現(xiàn)象，沒(méi)有表現(xiàn)出熒光，如圖5A。H2O2處理后ΔFreB2菌株中ROS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多(圖5D)。在100 mmol/L H2O2處理組(圖5B)，ΔFreB2菌株ROS陽(yáng)性細(xì)胞率為60%～70%，而W2菌株ROS陽(yáng)性細(xì)胞率只有20%左右。在200 mmol/L H2O2處理組(圖5C)，W2菌株和ΔFreB2菌株相比100 mmol/L H2O2處理組ROS陽(yáng)性細(xì)胞率均有所升高，W2菌株為50%～60%，ΔFreB2菌株達(dá)到95%以上，ΔFreB2菌株ROS陽(yáng)性細(xì)胞率仍明顯高于W2菌株。

圖4 W2菌株和ΔFreB2菌株對(duì)氧化壓力的敏感性測(cè)定

Fig.4 The sensitivity of W2 and ΔFreB2 strains to oxidative stress

A：對(duì)照組；B：100 mmol/L H2O2處理組；C：200 mmol/L H2O2處理組；D：300 mmol/L H2O2處理組；E：400 mmol/L H2O2處理組；F：500 mmol/L H2O2處理組

A： untreated control；B：100 mmol/L H2O2treatment；C：200 mmol/L H2O2treatment；D：300 mmol/L H2O2treatment；E：400 mmol/L H2O2treatment；F：500 mmol/L H2O2treatment

圖5 W2菌株和ΔFreB2菌株胞內(nèi)活性氧物質(zhì)測(cè)定

3 討 論

鐵離子作為人體必需的營(yíng)養(yǎng)元素之一，是煙曲霉在宿主體內(nèi)定殖、擴(kuò)散及侵染等過(guò)程的重要決定因素。在對(duì)本金屬還原酶基因FreB2的初步研究中發(fā)現(xiàn)，僅敲除該金屬還原酶基因FreB2，突變株菌落及菌絲生長(zhǎng)狀況與野生型相比無(wú)明顯變化[17]。本研究檢測(cè)出ΔFreB2菌株金屬還原酶活性比野生株高，且在無(wú)鐵AMM中，野生株和ΔFreB2突變株金屬還原酶活性峰值較AMM出現(xiàn)早。推測(cè)其原因可能是FreB2的缺失導(dǎo)致了其他鐵吸收相關(guān)基因表達(dá)的改變。因此，選取了幾個(gè)目前已知具有重要功能的鐵吸收相關(guān)基因，檢測(cè)其表達(dá)量。熒光定量PCR結(jié)果顯示，相同培養(yǎng)條件下，突變株鐵吸收相關(guān)基因如MirB、FetC、SidA、FreB的表達(dá)量均出現(xiàn)明顯上調(diào)。由此得出可能是FreB2的缺失引起了突變株其他金屬還原酶如FreB等表達(dá)量的升高。而這些鐵吸收相關(guān)基因又受無(wú)鐵環(huán)境誘導(dǎo)，所以導(dǎo)致金屬還原酶基因在無(wú)鐵AMM中的表達(dá)早于AMM。同時(shí)該結(jié)果也表明煙曲霉與鐵吸收相關(guān)基因之間存在著一定的協(xié)同作用?；蛟S這也是導(dǎo)致初步研究該基因功能時(shí)突變株菌落及菌絲生長(zhǎng)狀況與野生型相比無(wú)明顯變化的原因。

煙曲霉的氧化壓力應(yīng)答機(jī)制是該病原真菌在各種環(huán)境壓力條件下存活并正常生長(zhǎng)代謝的重要保障。H2O2作為常用的凋亡誘導(dǎo)劑能夠誘導(dǎo)真菌凋亡，細(xì)胞受氧化壓力刺激后產(chǎn)生的ROS也可參與多種信號(hào)途徑的活化，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[18-19]。已有報(bào)道，外源氧化劑存在的條件下細(xì)胞內(nèi)DNA的損傷可能與細(xì)胞內(nèi)可利用的鐵離子濃度有關(guān)[2-3]。因?yàn)殍F離子能夠與細(xì)胞內(nèi)的氧化成分如過(guò)氧化氫發(fā)生芬頓反應(yīng)，產(chǎn)生氧自由基，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[2-3]。本研究發(fā)現(xiàn)，ΔFreB2菌株對(duì)氧化壓力的敏感性及ROS陽(yáng)性細(xì)胞率均高于野生株。分析其原因，可能是由于表達(dá)量增多的其他高鐵還原酶將更多的Fe3+還原成Fe2+，進(jìn)而與過(guò)氧化氫發(fā)生芬頓反應(yīng)，造成胞內(nèi)ROS含量的上升，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

本研究結(jié)果表明，煙曲霉金屬還原酶基因FreB2與鐵的吸收相關(guān)，且與鐵吸收相關(guān)基因之間存在功能互補(bǔ)效應(yīng)；該基因在氧化壓力應(yīng)答過(guò)程中也發(fā)揮重要的作用。至于該金屬還原酶是如何參與氧化壓力應(yīng)答過(guò)程以及鐵吸收相關(guān)基因之間具體的相互作用機(jī)制則還需要后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明。

[1] Nyhus JK, Wilborn TA, Jacobson SE. Pathogenesis ofAspergillusfumigatusin Invasive Aspergillosis[J]. Clinical Microbiology Reviews,2009, 22(3): 447-465.

[2] Meneghini R.Iron homeostasis, oxidative stress,and DNA damage[J]．Free Radic Biol Med,1997,23(5):783-792.

[3] Theil EC, Goss DJ. Living with Iron (and Oxygen): Questions and Answers about Iron Homeostasis[J]. Chemical Reviews,2009, 109(10): 4568-4579.

[4] Kaplan CD, Kaplan J. Iron Acquisition and Transcriptional Regulation[J]. Chemical Reviews,2009, 109(10): 4536-4552.

[5] Schrettl M, Bignell E, Kragl C, et al. Distinct Roles for Intra-and Extracellular Siderophores duringAspergillusfumigatusInfection[J]. Plos Pathogens,2007, 3(9): 1195-1207.

[6] Zhang YT, Wu JY, Xin ZT, et al.Aspergillusfumigatustriggers innate immune response via NOD1 signaling in human corneal epithelial cells[J]. Experimental Eye Research,2014, 127: 170-178.

[7] Weinberg ED. Iron availability and infection[J]. Biochimica Et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects,2009, 1790(7): 600-605.

[8] Schrettl M, Kim HS, Eisendle M, et al. SreA-mediated iron regulation inAspergillusfumigatus[J]. Molecular Microbiology,2008, 70(1): 27-43.

[9] Schrettl M, Bignell E, Kragl C, et al. Siderophore Biosynthesis But Not Reductive Iron Assimilation Is Essential forAspergillusfumigatusVirulence[J]. Journal of Experimental Medicine,2004, 200(9): 1213-1219.

[10]Haas H, Eisendle M, Turgeon BG. Siderophores in fungal physiology and virulence[J].Phytopathology,2008, 46(46):149-187.

[11]Blatzer M, Binder U, Haas H. The metalloreductase FreB is involved in adaptation ofAspergillusfumigatusto iron starvation[J]. Fungal Genetics and Biology,2011, 48(11): 1027-1033.

[12]Hassett FR, Yuan SD, Kosman JD. Spectral and Kinetic Properties of the Fet3 Protein from Saccharomyces cerevisiae, a Multinuclear Copper Ferroxidase Enzyme[J]. Biological Chemistry,1998, 274(36): 23274-23282.

[13]Kosman DJ. Redox Cycling in Iron Uptake, Efflux, and Trafficking[J]. Journal of Biological Chemistry,2010, 285(35): 26729-26735.

[14]Nierman WC, Pain A, Anderson MJ, et al. Genomic sequence of the pathogenic and allergenic filamentous fungusAspergillusfumigatus[J]. Nature,2005, 438(7071): 1151-1156.

[15]Cove DJ. The induction and repression of nitrate reductase in the fungusAspergillusnidulans[J]. Biochim Biophys Acta,1966, 113(1): 51-56.

[16]Nyhus JK, Wilborn TA, Jacobson SE. Ferric Iron Reduction by Cryptococcus neoformans[J].Infection and Immunity,1997,65(2): 434-438.

[17]牛倩倩. 煙曲霉金屬還原酶基因敲除及初步功能分析[D]. 青島：青島大學(xué), 2013.

[18]Gourlay CW, Du W, Ayscough KR．Apoptosis in yeast-mechanisms and benefits to a unicellular organism[J]. Mol Microbiol,2006,62(6):1515-1521.

[19]Eisenberg T, Buttner S, Kroemer G, et al. The mitochondrial pathway in yeast[J]. Apoptosis，2007,12(5):1011-1023.

The Effects of Metalloreductase FreB2 on the Uptake of Iron and Response to Oxidative Stress inAspergillusfumigatus

WANG Wei-wei1, WU Cui-jiao1, ZHAO Wei2, ZHANG Shan-shan1, WANG Bin2

(1.Dept.ofHistol. &Embryol., 2.Dept.ofMicrobiol.,MedicalColl.QingdaoUni.,Qingdao266071)

The function of a metalloreductase gene FreB2 ofAspergillusfumigatuswas initially studied by the establishment of metalloreductase gene (AFUA-1G00350, FreB2) deletion mutant strain ofA.fumigatus, in order to explore the pathogenic relation ofA.fumigatusand the gene to provide foundation. The metalloreductase activity of wild type strain and gene deletion strain ofA.fumigatuswere compared in AMM and iron free AMM medium liquid during their growth for the activity of metalloreductase, and draw the metalloreductase activity curve of the wild type strain and gene deletion strain in AMM and iron free AMM liquid medium during their growth. Using Real-Time PCR to analyze the mRNA expression variation of SreA, SidA, FetC, FtrA, and FreB these related genes to iron assimilation was significantly up regulated. The sensitivity to oxidation stress experiment showed that the sensitivity of gene deletion mutant strain to H2O2was significantly strengthened, at the same time the intracellular active oxygen substance significantly increased. Metalloreductase FreB2 played role during the process of iron assimilation and oxidation stress response ofA.fumigatus; therefore, there existed a functionally mutual complementary effect onA.fumigatusand iron assimilation related genes.

Aspergillusfumigatus; metalloreductase; real-time PCR; ROS

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30840014)；教育部留學(xué)回國(guó)基金和山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2010CM011)

王偉偉 女，碩士研究生。研究方向?yàn)榧?xì)胞生物學(xué)。E-mail：weiweiw0212@126.com

* 通訊作者。吳翠嬌 女，博士,碩士生導(dǎo)師。研究方向?yàn)榻M織學(xué)與胚胎學(xué)。Tel:0532-83780060, E-mail：wucjzr@163.com

2015-12-23；

2016-01-05

Q756；R379.6

A

1005-7021(2016)02-0008-06

10.3969/j.issn.1005-7021.2016.02.002

趙巍 女，博士,碩士生導(dǎo)師。研究方向?yàn)槲⑸飳W(xué)。Tel:0532-83780059, E-mail：qduzhaowei@163.com