青風(fēng)藤配方顆粒的制備及與傳統(tǒng)湯劑的比較

趙帆帆，王嬌嬌，李麗麗，李建晨,哈 婧

(河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院，河北石家莊 050018)

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青風(fēng)藤配方顆粒的制備及與傳統(tǒng)湯劑的比較

趙帆帆，王嬌嬌，李麗麗，李建晨,哈 婧

(河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院，河北石家莊 050018)

為了研究青風(fēng)藤配方顆粒制備工藝以及對青風(fēng)藤配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑進(jìn)行定性定量比較，運(yùn)用正交試驗(yàn)方法，采用干法制粒，以出膏率、青藤堿含量為指標(biāo)，優(yōu)選青風(fēng)藤配方顆粒制備工藝；采用薄層色譜法進(jìn)行定性比較；以青藤堿為對照品，采用高效液相色譜法進(jìn)行定量比較。青風(fēng)藤配方顆粒最佳制備工藝如下：提取2次，加水量18倍(第1次加水量為10倍，第2次加水量為8倍)，各煎煮1.0 h。TLC結(jié)果顯示，配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑化學(xué)成分的類型無明顯差異。5批青風(fēng)藤配方顆粒青藤堿含量分別為1.56%，1.58%，1.31%，1.20%和1.78%；5批青風(fēng)藤傳統(tǒng)湯劑青藤堿含量分別為0.94%，0.96%，0.85%，0.82%和1.02%。青風(fēng)藤配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中化學(xué)成分的類型基本相同，但青藤堿含量差異較大。

化學(xué)分析；青風(fēng)藤；配方顆粒；傳統(tǒng)湯劑；青藤堿

單味中藥配方顆粒是以中藥材飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代制藥技術(shù)提取、濃縮、干燥、制粒、包裝而成的顆粒劑，使用時按處方量調(diào)劑后熱開水沖兌即可，具有服用、攜帶、貯藏、運(yùn)輸方便，溶解迅速，免煎易服，生產(chǎn)自動化，條件恒定等優(yōu)點(diǎn)[1-5]。與傳統(tǒng)湯劑相比，中藥配方顆粒雖然有一些優(yōu)勢，但在發(fā)展過程中也存在一些問題[6-17]。例如：單味配方顆粒與傳統(tǒng)復(fù)方合煎湯劑是否等效；中藥配方顆粒在尚無統(tǒng)一國家標(biāo)準(zhǔn)的情況下，如何控制其質(zhì)量及服用劑量等。這些問題都制約著配方顆粒的發(fā)展，解決這些問題成為推動其發(fā)展的關(guān)鍵。本文通過正交試驗(yàn)，對配方顆粒的制備工藝以及配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑的定性定量比較進(jìn)行研究，分析二者之間的差異，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

青風(fēng)藤為防己科植物青藤和毛青藤的干燥藤莖[18]，始載于宋代《圖經(jīng)本草》，具有祛濕、通經(jīng)絡(luò)、利小便的功效，用于風(fēng)濕性及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)腫大、四肢疼痛麻木等癥的治療。其中，青藤堿等生物堿成分為祛風(fēng)止痛的主要有效成分[19]。目前，臨床上使用的青風(fēng)藤制劑主要有注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑及復(fù)方顆粒劑等劑型[20-23]。將青風(fēng)藤配方顆粒作為一種新型的中藥飲片應(yīng)用于臨床，有必要對其進(jìn)行深入的研究和探討。本實(shí)驗(yàn)通過正交試驗(yàn)，確定青風(fēng)藤配方顆粒的最佳制備工藝，對青風(fēng)藤配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑不同極性的化學(xué)成分進(jìn)行薄層色譜(TLC)比較，并按照2015版《中華人民共和國藥典》“青風(fēng)藤”項(xiàng)下的含量測定方法對青藤堿含量進(jìn)行比較，為青風(fēng)藤配方顆粒的推廣提供實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

島津LC-2010A HT高效液相色譜儀；AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司提供)；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司提供)；Merck硅膠60 F254薄層板(德國Merck公司提供)；電熱恒溫水浴鍋(上海勝啟儀器儀表有限公司提供)。

甲醇(色譜純)，磷酸二氫鈉(優(yōu)級純)，水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司提供)，其他試劑均為分析純。青藤堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110774-200507)。

1.2 樣品

5批青風(fēng)藤藥材均購買于河北安國東方藥城，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)研究院段吉平老師鑒定為毛青藤。樣品來源為河南(QFT-001，QFT-002)、湖北(QFT-003，QFT-004)、江蘇(QFT-005)。

1.3 配方顆粒的制備

分別稱取5批青風(fēng)藤50 g，以水為提取溶劑，從加水量、提取時間、提取次數(shù)、出膏率、是否加入輔料及輔料加入量等方面進(jìn)行工藝考察，并通過正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝條件。綜合考慮出膏率、轉(zhuǎn)移率、生產(chǎn)成本、能耗等因素，確定最優(yōu)工藝條件如下：浸泡1 h，提取次數(shù)2次，加水量分別為10倍、8倍，提取時間各1 h，不加輔料。合并2次濾液，減壓濃縮至干，采用干法制粒得到青風(fēng)藤配方顆粒。

1.4 傳統(tǒng)湯劑的制備

參照《中藥煎劑質(zhì)量評定標(biāo)準(zhǔn)》，分別稱取5批青風(fēng)藤50 g，浸泡30 min，提取2次，分別加水至浸過藥面2 cm(加水量約為6倍和4倍)，提取時間分別為30 min和25 min，不加輔料。合并2次濾液，減壓濃縮至干，采用干法制粒得到青風(fēng)藤傳統(tǒng)湯劑顆粒。

1.5 薄層色譜定性比較

分別稱取青風(fēng)藤配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑顆粒2 g，加入25 mL乙醇，加熱回流1 h，過濾，將濾液蒸干，加入1 mL乙醇溶解殘?jiān)?，作為供試品溶液。另取青藤堿對照品，加入乙醇制成1 mL含1 mg青藤堿的溶液，作為對照品溶液。分別吸取上述2種溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(體積比為2∶4∶3∶1)為展開劑，置于用濃氨水試液預(yù)飽和20 min的展缸內(nèi)展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，日光下觀察斑點(diǎn)數(shù)量及顏色深淺。

1.6 青藤堿的含量測定

1.6.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，美國安捷倫科技公司提供)；流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(0.005 mol/L磷酸氫二鈉溶液，以0.005 mol/L磷酸二氫鈉調(diào)節(jié)pH值至8.0，再用體積分?jǐn)?shù)為1%的三乙胺調(diào)節(jié)pH值至9.0，二者體積比為55∶45)；檢測波長為262 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為室溫；進(jìn)樣量為5 μL。

1.6.2 對照品溶液的制備

取青藤堿對照品19.8 mg，精密稱定，加入甲醇制成1 mL含0.5 mg青藤堿的溶液，作為對照品溶液。

1.6.3 供試品溶液的制備

精密稱取青風(fēng)藤配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑顆粒約0.5 g，置于具塞錐形瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇20 mL，稱定質(zhì)量。超聲20 min，放冷，再稱定質(zhì)量。用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.6.4 色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按照“1.6.1”條件進(jìn)樣檢測，青藤堿的保留時間為8.543 min，理論塔板數(shù)大于5 000，分離度良好。青藤堿對照品、青風(fēng)藤配方顆粒及青風(fēng)藤傳統(tǒng)湯劑的高效液相色譜圖見圖1。

圖1 青風(fēng)藤HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of Caulis Sinomenii

2 結(jié)果與討論

2.1 配方顆粒制備工藝的篩選

本實(shí)驗(yàn)從提取次數(shù)A、加水量B、提取時間C共3個水平，通過正交試驗(yàn)優(yōu)選制備工藝條件，實(shí)驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果見表1—表3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果分析Tab.2 Results of orthogonal experiment

注：正交試驗(yàn)中提取次數(shù)與加水量的關(guān)系如下：若A=1，B1=12倍水，B2=18倍水，B3=24倍水；若A=2，B1=5倍水和7倍水，B2=10倍水和8倍水，B3=13倍水和11倍水；若A=3，B1=5倍水、4倍水和3倍水，B2=8倍水、6倍水和4倍水，B3=10倍水、8倍水和6倍水。

表3 出膏率方差分析Tab.3 Analysis of the variance of the ratio of extraction

表2直觀分析的結(jié)果表明，各因素的影響效果依次為A>B>C，優(yōu)選方案為A3B3C2。由于目前無法權(quán)重出膏率和青藤堿含量對于提取條件哪個影響更大，因此引入了“轉(zhuǎn)移率”概念(轉(zhuǎn)移率=有效成分含量×出膏率)，為進(jìn)一步深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

為了更好地應(yīng)用于未來的工業(yè)化生產(chǎn)，本文僅就出膏率對提取條件的影響進(jìn)行了簡單分析。出膏率方差分析結(jié)果表明，提取次數(shù)的影響最大，具有顯著性差異，加水量和提取(煎煮)時間無顯著性差異。在出膏率、青藤堿含量及轉(zhuǎn)移率無明顯差異時，應(yīng)綜合考慮生產(chǎn)成本、人工、能耗等因素，最終建議選擇A2B2C2，即提取2次，加水量18倍(第1次加水量為10倍、第2次加水量為8倍)，各煎煮1.0 h。

2.2 薄層條件的篩選

若選用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(四者體積比為2∶4∶2∶1)于10 ℃放置的上層溶液作為展開劑，會發(fā)現(xiàn)原點(diǎn)較深；若將展開劑極性調(diào)大，甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水的體積比為2∶4∶3∶1，色譜斑點(diǎn)數(shù)量增多且清晰，展開效果較好。因此本實(shí)驗(yàn)最終選擇甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(四者體積比為2∶4∶3∶1)為展開劑。薄層色譜圖見圖2，其中1，2，3，4，5為配方顆粒；7，8，9，10，11為傳統(tǒng)湯劑。

圖2 青風(fēng)藤配方顆粒、傳統(tǒng)湯劑薄層色譜圖Fig.2 TLC of formula granules and traditional decoction of Caulis Sinomenii

結(jié)果顯示青風(fēng)藤配方顆粒供試品溶液與傳統(tǒng)湯劑供試品溶液斑點(diǎn)數(shù)量、色澤深淺基本一致，兩者化學(xué)成分種類無顯著差異。

2.3 樣品含量測定

按供試品溶液配制方法分別配制配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑供試品溶液各5份。精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 μL，按照“1.6.1”條件進(jìn)樣測定，計算青藤堿的含量，結(jié)果見表4。

表4 青風(fēng)藤配方顆粒、傳統(tǒng)湯劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Experimental results of formula granules and traditional decoction ofCaulisSinomenii

3 結(jié) 論

1)對青風(fēng)藤配方顆粒制備工藝進(jìn)行了篩選，綜合考慮出膏率、轉(zhuǎn)移率、生產(chǎn)成本、能耗等因素，確定了青風(fēng)藤配方顆粒的最佳制備工藝：浸泡1.0 h，提取次數(shù)2次，加水量分別為10倍、8倍，提取時間各1.0 h，不加輔料。從源頭出發(fā)降低了制劑成本，為解決中藥配方顆粒價格比傳統(tǒng)飲片高的問題提供實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)。

2)對青風(fēng)藤配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑進(jìn)行了比較分析，采用薄層色譜定性比較了不同極性的化學(xué)成分。結(jié)果表明，青風(fēng)藤配方顆粒供試品溶液與傳統(tǒng)湯劑供試品溶液顯示相同斑點(diǎn)，兩者化學(xué)成分種類無顯著差異。

3)采用高效液相色譜法比較了青藤堿的含量，5批青風(fēng)藤配方顆粒青藤堿平均含量為1.49%，5批青風(fēng)藤傳統(tǒng)湯劑青藤堿平均含量為0.92%。結(jié)果表明，青風(fēng)藤配方顆粒青藤堿含量大于傳統(tǒng)湯劑青藤堿的含量，為解決中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑化學(xué)成分和療效差異問題提供了實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)。

4)國家應(yīng)綜合分析各地配方顆粒的應(yīng)用現(xiàn)狀，建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，解決中藥配方顆粒質(zhì)量監(jiān)管等問題。只有解決了這些問題，才能加快中藥配方顆粒在中國的發(fā)展步伐。

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Preparation of formula granules ofCaulisSinomeniiand comparison between formula granules and traditional decoction ofCaulisSinomenii

ZHAO Fanfan， WANG Jiaojiao， LI Lili， LI Jianchen， HA Jing

(School of Chemical and Pharmaceutical Engineering, Hebei University of Science and Technology, Shijiazhuang, Hebei 050018, China)

In order to study the preparation ofCaulisSinomeniiformula granules and conduct qualitative and quantitative comparison of formula granules and traditional decoction, by adopting dry granulating and taking the ratio of extraction and the contents of sinomenine as indexes, the paper uses the orthogonal test method to prepareCaulisSinomeniiformula granules. TLC is used for qualitative comparison, and HPLC is used for quantitative comparison withSinomenineas reference substance. The results show that the best preparation of formula granules is adding 18 times water(the first added amount is 10 times, and the second added amount is 8 times) and extracting 2 times for 1.0 hour respectively. The sinomenine contents of 5 group of formula granules are 1.56%, 1.58%, 1.31%, 1.20% and 1.78%. The sinomenine contents of the 5 group of trdaditional decoction ofCaulisSinomeniiare 0.94%, 0.96%, 0.85%, 0.82% and 1.02%. The result shows that the chemical constituents of the formula granules and the traditional decoction are similar, but the contents of sinomenine are different.

chemical analysis;CaulisSinomenii; formula granules; traditional decoction;Sinomenine

1008-1534(2016)06-0479-05

2016-07-23;

2016-10-08；責(zé)任編輯：張士瑩

河北省食品藥品監(jiān)督管理局科技項(xiàng)目(ZD2015025)

趙帆帆(1992—)，女，河北石家莊人，碩士研究生，主要從事中藥制劑方面的研究。

哈 婧教授。E-mail：hajing02@163.com

R283；

A

10.7535/hbgykj.2016yx06007

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