Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶表達(dá)差異研究

汪偉民 蔡煒龍 潘杰 許洪寶

Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶表達(dá)差異研究

汪偉民 蔡煒龍 潘杰 許洪寶

目的 探討Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的臨床意義。方法 選取112例胃癌患者手術(shù)切除的胃癌原發(fā)灶112例、轉(zhuǎn)移灶43例，應(yīng)用免疫組化染色方法，比較Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率，并分析其與臨床參數(shù)的相關(guān)性及對患者預(yù)后的影響。結(jié)果 Gankyrin在胃癌轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率高于原發(fā)灶（P＜0.05）。胃癌患者原發(fā)灶中Gankyrin表達(dá)陽性率與腫瘤較低的分化程度、較晚的TNM分期及腫瘤轉(zhuǎn)移均有關(guān)（均P＜0.05）。胃癌轉(zhuǎn)移患者轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中Gankyrin的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.58，P＜0.05）。胃癌患者及胃癌轉(zhuǎn)移患者中Gankyrin表達(dá)陽性者的預(yù)后較差。結(jié)論 Gankyrin在胃癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)與胃癌惡性程度有關(guān)，在轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率高于原發(fā)灶，對患者預(yù)后有一定的預(yù)測價值。

Gankyrin 胃癌 原發(fā)灶 轉(zhuǎn)移灶 臨床意義

胃癌為發(fā)病率與病死率均較高的消化道惡性腫瘤；我國更是胃癌高發(fā)區(qū)，大多數(shù)患者確診時已為中晚期胃癌，并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，失去根治手術(shù)機(jī)會，預(yù)后不佳。胃癌轉(zhuǎn)移是多個基因相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路協(xié)同的結(jié)果，其分子機(jī)制一直是抗腫瘤治療的研究熱點(diǎn)。Gankyrin作為一種惡性腫瘤分子標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)在宮頸癌[1]、乳腺癌[2]等腫瘤中高表達(dá)，且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但Gankyrin在胃癌組織中的表達(dá)情況及其與胃癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚未清楚；Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的臨床意義研究亦少見。本研究采用免疫組化染色方法，檢測Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)差異，探討其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2010年3月至2012年3月在本院行手術(shù)切除治療的胃癌患者112例，術(shù)前均未接受任何抗腫瘤治療。其中男78例，女34例；年齡34~73（51.8± 14.2）歲；術(shù)中切除胃癌原發(fā)灶及可疑的轉(zhuǎn)移灶。112例原發(fā)灶標(biāo)本術(shù)后病理學(xué)檢查均發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞，在可疑轉(zhuǎn)移灶中發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移5例，即胃癌轉(zhuǎn)移患者43例?；颊咝g(shù)后隨訪3年，記錄預(yù)后情況。

1.2 免疫組化染色 患者術(shù)中切除的胃癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶均經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋、切片及HE染色；切片經(jīng)HE染色觀察發(fā)現(xiàn)有胃癌細(xì)胞后，同一蠟塊再次切片、烘烤，經(jīng)二甲苯脫蠟、不同濃度梯度乙醇溶液水化、檸檬酸緩沖液抗原修復(fù)及正常山羊血清抗原封閉后，在切片上滴加Gankyrin抗體（美國Santa Cruz公司，按1∶50稀釋），室溫下放置4h，沖洗3次，滴加山羊抗兔二抗（北京中杉公司），室溫下靜置30min后再沖洗3次，DAB顯色、復(fù)染及封片。

1.3 結(jié)果判定 由2位副主任以上職稱病理科醫(yī)師閱片，按如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)或（和）細(xì)胞核染棕黃色或黃色為陽性，按光鏡下觀察到的著色強(qiáng)度計為0（無）、1（弱）、2（一般）、3（強(qiáng)）分；按著色細(xì)胞比例計為0（0%）、1（1%～25%）、2（26%～50%）、3（51%～75%）、4（76%～100%）分。兩項相加0分為陰性，1～2分為弱陽性，3～5分為陽性，＞5分為強(qiáng)陽性。本研究中表達(dá)陽性包括陽性、強(qiáng)陽性。

1.4 觀察指標(biāo) （1）比較Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率；（2）分析胃癌轉(zhuǎn)移患者轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中Gankyrin表達(dá)的相關(guān)性；（3）分析Gankyrin在胃癌原發(fā)灶中的表達(dá)陽性率與臨床參數(shù)（年齡、性別、胃癌分化程度、TNM分期、是否轉(zhuǎn)移）的關(guān)系；（4）估計胃癌患者與胃癌轉(zhuǎn)移患者的術(shù)后生存率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件；計數(shù)資料以構(gòu)成比表示，Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)陽性率比較采用χ2檢驗，在胃癌轉(zhuǎn)移灶與對應(yīng)原發(fā)灶中的表達(dá)相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)，在胃癌原發(fā)灶中的表達(dá)陽性率與臨床參數(shù)的關(guān)系分析采用Kruskal-Wallis檢驗；采用Kaplan-Meier法估計胃癌患者及胃癌轉(zhuǎn)移患者的術(shù)后生存率并繪制生存曲線，生存率的比較采用log-rank檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況比較 見圖1、表1。

圖1 Gank y r in在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)（a：原發(fā)灶；b：轉(zhuǎn)移灶；免疫組化染色，×400）

表1 Gank y r in在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率比較[例（%）]

由圖1可見，在原發(fā)灶中胃癌細(xì)胞質(zhì)或（和）細(xì)胞核陽性著色，同樣地，在轉(zhuǎn)移灶中也陽性著色。由表1可見，Gankyrin在胃癌轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率高于在原發(fā)灶中的表達(dá)陽性率（P＜0.05）。

2.2 43例胃癌轉(zhuǎn)移患者轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中Gankyrin表達(dá)的相關(guān)性 見表2。

表2 43例胃癌轉(zhuǎn)移患者轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中Gank y r in表達(dá)的相關(guān)性[例（%）]

由表2可見，43例胃癌轉(zhuǎn)移患者轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中Gankyrin的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.58，P＜0.05）。

2.3 112例胃癌患者原發(fā)灶中Gankyrin表達(dá)陽性率與臨床參數(shù)的關(guān)系 見表3。

表3 112例胃癌患者原發(fā)灶中Gank y r in表達(dá)陽性率與臨床參數(shù)的關(guān)系[例（%）]

由表3可見，胃癌患者原發(fā)灶中Gankyrin表達(dá)陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期及轉(zhuǎn)移均有關(guān)（均P＜0.05），而與患者性別、年齡均無關(guān)（均P＞0.05）。

2.4 胃癌患者及胃癌轉(zhuǎn)移患者的術(shù)后生存情況 術(shù)后隨訪3年，胃癌患者及胃癌轉(zhuǎn)移患者的術(shù)后生存曲線見圖2。

圖2 胃癌患者及胃癌轉(zhuǎn)移患者的術(shù)后生存曲線（a：胃癌患者；b：胃癌轉(zhuǎn)移患者；曲線由上至下分別為Gank y r in表達(dá)陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性）

由圖2可見，112例胃癌患者術(shù)后3年生存率為39.29%（44/112）；Gankyrin在胃癌原發(fā)灶中呈陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性表達(dá)的患者術(shù)后3年生存率分別為66.67%（14/21）、57.69%（15/26）、26.09%（12/46）、15.79%（3/19），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。43例胃癌轉(zhuǎn)移患者術(shù)后3年生存率為30.23%（13/43）；Gankyrin在胃癌轉(zhuǎn)移灶中呈陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性表達(dá)的患者術(shù)后3年生存率分別為100.00%（3/3）、83.33%（5/6）、16.67%（4/24）、10.00%（1/10），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

腫瘤轉(zhuǎn)移是患者病死的主要原因，由于胃癌轉(zhuǎn)移涉及多基因參與、多種因素相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控及多步驟的惡性生物學(xué)過程，其發(fā)生機(jī)制尚不明確，尚有待進(jìn)一步深入胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)研究。Gankyrin又名p28GANK，作為一種重要的腫瘤惡性進(jìn)展的分子標(biāo)志物，其在腫瘤轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的臨床意義研究還不深入。

本研究分析了Gankyrin在胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其在轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率高于在原發(fā)灶中的表達(dá)陽性率，這說明Gankyrin高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞惡性程度越高。這也與腫瘤轉(zhuǎn)移灶為高惡性生物學(xué)行為相一致，Gankyrin高表達(dá)會進(jìn)一步促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力，且發(fā)生轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞脫離胃癌原發(fā)灶，其生存環(huán)境發(fā)生變化，新的生存環(huán)境因素同樣會導(dǎo)致其高表達(dá)。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)胃癌轉(zhuǎn)移患者轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中Gankyri的表達(dá)呈正相關(guān)。這可能是由于轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶的同源性，轉(zhuǎn)移灶中的癌細(xì)胞由原發(fā)灶的脫離細(xì)胞定植并增殖、分化產(chǎn)生，因此轉(zhuǎn)移灶中癌細(xì)胞基因表達(dá)與原始細(xì)胞具有一致性，但由于新的生長環(huán)境促使其表達(dá)增強(qiáng)，會使癌細(xì)胞更具有更強(qiáng)的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。

本研究還發(fā)現(xiàn)胃癌患者原發(fā)灶中Gankyrin表達(dá)陽性率與較低的腫瘤分化水平、較晚的TNM分期及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。這說明Gankyrin與胃癌惡性進(jìn)展密切相關(guān)，可能是其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的重要因素。這一結(jié)果也與Gankyrin在肝癌[3]、食管癌[4]、結(jié)腸癌[5]及胰腺癌[6]等的研究中相類似，進(jìn)一步說明Gankyrin是一種重要的癌基因。

最后，本研究分析胃癌患者與胃癌轉(zhuǎn)移患者術(shù)后生存情況，發(fā)現(xiàn)不管是在胃癌患者中還是在胃癌轉(zhuǎn)移患者中，Gankyrin表達(dá)陽性均提示患者預(yù)后不良。這進(jìn)一步說明Gankyrin對腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的重要性。Gankyrin能夠增強(qiáng)MDM2泛素化水平，導(dǎo)致抑癌基因p53活性降低[7]，也可與Rb相結(jié)合并對其磷酸化，使Rb核外排失去抑制腫瘤生長的能力[8]。這些生物學(xué)行為與Gankyrin促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖密切相關(guān)，也可通過PI3KAKT-HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移[9]。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)Gankyrin在轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)陽性率高于原發(fā)灶，這對患者預(yù)后有一定的預(yù)測價值。

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Differential expression of gankyrin in primary and metastatic gastric cancer and its clinical significance

WANG Weimin,CAI Weilong,PAN Jie,et al.Department of General Surgery,Huzhou Central Hospital,Huzhou 313000，China

【 Abstract】 Objective To investigate the d ifferential exp ression of gankyrin in p rimary and metastatic gastric cancer tissues and its c linical significance. Methods Immunohistochem ical staining was used to detec t the exp ression of gankyrin in p rimary and metastatic gastric cancer tissue,and its c linical significance was analyzed. Results Higher exp ression of gankyrin in p rimary gastric cancer tissues was significantly associated w ith lower differentiation,advanced TNM stage and metastasis(P＜0.05).The exp ression of gankyrin inmetastases was significantly higher than that in p rimary tumor(P＜0.05),and significantly correlated with that in matched p rimary gastric cancer tissues(r=0.58,P＜0.05).Higher exp ression of gankyrin in both the p rimary tumor and metastases was associated with poor survivalof patients(P＜0.05). Conclusion Gankyrin is highly exp ressed in p rimary and metastatic gastric cancer tissues,which is c losely correlated w ith the degree ofmalignancy and poor p rognosis.

Gankyrin Gastric cancer Primary lesion Metastases Clinicalsignificance

2015-12-16）

（本文編輯：李媚）

313000 湖州市中心醫(yī)院普外科

許洪寶，E-mail：xu hong b ao212@163.com