豬偽狂犬病不同疫苗免疫程序的免疫效果研究

吳志金，吳丹，韋政，何宏宇，楊海，孫龍，伍少欽

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場，廣西南寧530317）

豬偽狂犬病不同疫苗免疫程序的免疫效果研究

吳志金，吳丹，韋政，何宏宇，楊海，孫龍，伍少欽

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場，廣西南寧530317）

為尋找更好的疫苗和探索最佳的免疫程序，應(yīng)對當(dāng)前豬偽狂犬病的嚴(yán)峻防疫形勢，研究選取不同疫苗組合以不同劑量、不同頻次在生產(chǎn)豬群中開展免疫對比試驗，通過中和抗體滴度評判免疫效果。結(jié)果顯示，在偽狂犬病活苗免疫的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)免疫1針滅活苗，能顯著提高豬只的中和抗體水平，其效果要比再次免疫活苗的效果好，而且增加滅活苗免疫的次數(shù)可以增強(qiáng)這種效果，但在免疫次數(shù)相同的情況下，增加免疫劑量并不能明顯提高免疫效果，經(jīng)典的Bartha株疫苗對偽狂犬病經(jīng)典毒株和國內(nèi)分離到的變異毒株均有效果。研究可為豬場選擇更好的疫苗和制定確實有效的免疫程序提供參考。

豬偽狂犬病；免疫程序；疫苗；中和抗體；變異毒株

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的以發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎為主要特征的一種烈性傳染病[1]。豬是PRV的天然貯存者和傳播者[2]，感染PRV后可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，肥育豬呼吸困難、生長停滯等，是危害養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。通過基因缺失疫苗的廣泛應(yīng)用，我國豬偽狂犬病曾得到有效控制。但從2011年開始，我國許多地區(qū)出現(xiàn)了新的豬偽狂犬病疫情，一些原本陰性的規(guī)模化豬場也紛紛轉(zhuǎn)陽，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。研究者們在不同地區(qū)分離到了新的PRV流行毒株，經(jīng)研究，這些新的毒株與之前流行的毒株有一定程度的抗原變異[3-6]。

廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場是我國首批獲得農(nóng)業(yè)部疫控中心認(rèn)證的“豬偽狂犬病凈化示范場”，公司自2005年完成豬偽狂犬病凈化以來，一直維持豬偽狂犬病陰性。為了更好地應(yīng)對日益嚴(yán)峻的防疫形勢，尤其是PRV變異毒株的流行，維持凈化成果，我們以中和抗體滴度為免疫效果評價指標(biāo)，選取不同疫苗組合以不同劑量、不同頻次于2014年7月至2015年5月在豬場生產(chǎn)豬群開展免疫對比試驗，以期尋找更好的疫苗和最佳的免疫程序。

1 材料和方法

1.1 疫苗和試驗動物

選取3種疫苗，分別為M活苗、H滅活苗和J滅活苗，M和H苗所用毒株均為經(jīng)典毒株Bartha株，J苗為國內(nèi)某地區(qū)分離株滅活菌的中試產(chǎn)品；試驗豬只均從豬場生產(chǎn)豬群隨機(jī)選取，各個試驗所選豬只批次相同。

1.2 試驗方法

本研究選取不同疫苗組合以不同劑量、不同頻次開展了一系列免疫對比試驗，試驗方案如下。

1.2.1 不同免疫劑量對比試驗1選擇妊娠60 d左右不同胎次的母豬，分為兩組，A組連續(xù)免疫3次2頭份M活苗，B組連續(xù)免疫3次1頭份同批號的M活苗，每次免疫間隔2周，于第3次免疫后2周采集血清-20℃保存。

1.2.2 后備豬加強(qiáng)免疫試驗3隨機(jī)挑選約60頭后備豬，按品種各半分為兩組，在215日齡免疫1頭份M活苗后4周，A組注射生理鹽水作為對照組，B組加免1頭份H滅活苗作為試驗組，免疫后4周分別采集血清-20℃保存。

1.2.3 不同免疫次數(shù)對比試驗2隨機(jī)挑選約60頭后備豬，分為兩組，所有豬只免疫2頭份M活苗，A組3周后加強(qiáng)免疫1頭份H滅活苗，4周后采集血清保存；B組間隔3周連續(xù)免疫2次1頭份H滅活苗，4周后采集血清保存。

1.2.4 肥育豬使用不同疫苗二免對比試驗隨機(jī)挑選60頭肥育豬，分為兩組，于12周齡免疫1頭份M活苗后4周，A組加免1頭份M活苗，B組加免1頭份H滅活苗，4周后分別采集血清-20℃保存。

1.2.5 肥育豬使用不同廠家疫苗二免對比試驗隨機(jī)挑選90頭肥育豬，分為3組，于12周齡免疫1頭份M活苗后4周，A組加免1頭份M活苗，B組加免1頭份J滅活苗，C組加免1頭份H滅活苗，4周后分別采集血清-20℃保存。

1.3 樣品檢測

采集的試驗豬只血清被送往國內(nèi)不同的3家高?？蒲性核謩e使用經(jīng)典的Bartha毒株和研究所分離到的PRV變異毒株（N5B等）進(jìn)行細(xì)胞中和試驗，檢測血清中和抗體滴度，評判免疫效果。

2 結(jié)果

2.1 不同免疫劑量對比試驗

從檢測結(jié)果看（表1），在免疫次數(shù)相同情況下，增加免疫劑量并不能提高免疫效果。

表1 不同免疫劑量對比試驗中和抗體檢測結(jié)果

2.2 后備豬加強(qiáng)免疫試驗

后備豬加強(qiáng)免疫試驗中和抗體檢測結(jié)果見表2，在活苗免疫的基礎(chǔ)上加強(qiáng)免疫滅活苗，可以明顯提高免疫后的中和抗體滴度，且免疫產(chǎn)生的中和抗體對PRV經(jīng)典株和國內(nèi)分離的變異株均有效。

2.3 不同免疫次數(shù)對比試驗從檢測結(jié)果可以看出（表3），增加滅活苗免疫的次數(shù)能夠提高中和抗體滴度，尤其是針對變異株。滅活苗的使用，對經(jīng)典株和國內(nèi)新分離的變異毒株都有較好保護(hù)作用。

2.4 肥育豬使用不同疫苗二免對比試驗

從表4的檢測數(shù)據(jù)可以看出，肥育豬在活苗免疫的基礎(chǔ)上，使用滅活苗加強(qiáng)免疫比活苗加強(qiáng)免疫獲得的中和抗體水平高很多。

2.5 肥育豬使用不同廠家疫苗二免對比試驗

試驗結(jié)果表明（表5），肥育豬在活苗免疫的基礎(chǔ)上，使用H滅活苗做二免要比用M活苗好，使用J滅活苗作二免的效果不太理想。

表2 后備豬加強(qiáng)免疫試驗中和抗體檢測結(jié)果

表3 不同免疫次數(shù)對比試驗中和抗體檢測結(jié)果

表4 肥育豬使用不同疫苗二免對比試驗結(jié)果

表5 肥育豬使用不同廠家疫苗二免對比試驗檢測結(jié)果

3 討論

2011年以前，由于PRV gE基因缺失疫苗的廣泛應(yīng)用，豬偽狂犬病在我國得到了比較好的控制。但從2011年開始，我國多數(shù)地區(qū)相繼暴發(fā)PR疫情，許多原本PR陰性的規(guī)?；i場也不能幸免。有研究指出，此次流行的PRV毒株與經(jīng)典毒株相比，多個基因有較大的變異，毒力也更強(qiáng)，且現(xiàn)有的商品化疫苗對其感染的保護(hù)力相對更差[7]。面對如此嚴(yán)峻的防疫形勢，有必要進(jìn)一步篩選更好的疫苗和探索最佳的免疫程序，降低豬群遭受外來變異PRV侵襲的可能。

在本研究中，通過不同免疫程序的對比試驗發(fā)現(xiàn)，在偽狂犬病活苗免疫的基礎(chǔ)上，加免1針滅活苗，能顯著提高豬只的中和抗體水平，其效果要比加免活苗的效果好，而且增加滅活苗免疫的次數(shù)可以增強(qiáng)這種效果，但在免疫次數(shù)相同的情況下，增加免疫劑量并不能明顯提高免疫效果。不同廠家生產(chǎn)的PRV疫苗，盡管毒株相同，但其最終誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體水平可能會相差很遠(yuǎn)，這和疫苗毒的傳代代次、抗原含量、抗原質(zhì)量及佐劑等多個因素有關(guān)。研究中選用的PRV疫苗毒株有經(jīng)典Bartha株和變異毒株，其誘導(dǎo)的中和抗體對經(jīng)典毒株和國內(nèi)分離到的變異毒株均有效果，這和劉芳等[8]的研究結(jié)果相符，但Luo等[7]和趙鴻遠(yuǎn)等[9]的研究則表明現(xiàn)有的經(jīng)典毒株疫苗對變異株不能提供完全的免疫保護(hù)，到底新的流行毒株抗原性是否發(fā)生變異尚有待進(jìn)一步研究。

[1]殷震，劉景華.動物病毒學(xué)[M].第2版.北京：科學(xué)出版社，1997：700-713.

[2]斯特勞B E，阿萊爾S D，蒙加林W L，等.豬病學(xué)[M].第8版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2000：195-196.

[3]An T Q,Peng J M,Tian Z J,et al.Pseudorabies Virus Variant in Bartha-K61-Vaccinated Pigs,China,2012[J].Emerging Infectious Diseases,2013,19：1749-1755.

[4]童武，張青占，鄭浩，等.免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病病毒的分離和鑒定[J].中國動物傳染病學(xué)報，2013，21（3）：1-7.

[5]彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn)，等.豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2013，35（1）：1-4.

[6]吳云飛，朱玲，徐志文，等.偽狂犬病病毒四川株的分離鑒定及增殖特性[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2013，43（6）：557-564.

[7]Luo Y Z,Li N,Cong X,et al.Pathogenicity and genomic characterization of a pseudorabies virus variant isolated from bartha-k61-vaccinated swine population in china[J].Veterinary Microbiology,2014,174(1-12)：107-115.

[8]劉芳，薛輝，秦樹英，等.廣西豬偽狂犬病病毒的分離鑒定及gE基因序列分析[J].養(yǎng)豬，2014（5）：105-108.

[9]趙鴻遠(yuǎn)，彭金美，安同慶，等.豬偽狂犬病病毒變異株的分離鑒定及其gE基因的分子特征[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2014， 36（7）：506-509.

（編輯：郭玉翠）

今年“地球超載日”再次提前到來

【美國趣味科學(xué)網(wǎng)站8月12日報道】題：2015年“超載日”：地球如今正式進(jìn)入“赤字”狀態(tài)

今天是“地球超載日”：在這一時刻，人類對自然資源的消耗量超出了地球生產(chǎn)和再生自然資源的能力。

就像失去了尾巴的壁虎，我們的地球可以自愈：它可以讓植物再生長，可以恢復(fù)魚類資源，重新吸收空氣中的碳，讓干凈的水重回湖泊、河流和地下蓄水層。但這些過程需要時間。

自文明發(fā)祥以來，地球補(bǔ)充資源的速度快于人類消耗資源的速度。然而，根據(jù)世界自然基金會發(fā)布的《地球生命力報告》，我們最終跨過了那條看不見的界線。

從1970年開始，我們每年從地球獲取的資源比其可以恢復(fù)的更多。自那以后，我們消耗資源的速度與地球資源再生的速度之間的差距日漸擴(kuò)大，從裂縫變成鴻溝。第一個“地球超載日”于當(dāng)年12月底降臨。今年，它于8月13日到來。

溫室氣體排放和糧食生產(chǎn)是“超載”的首要原因，此外還有氣候變化。作為“回報”，它引發(fā)了連鎖反應(yīng)：氣候變化催生極端天氣，極端天氣又造成糧食安全問題，最終導(dǎo)致政治和社會沖突。

要解決糧食危機(jī)有兩個基本戰(zhàn)略—緩解和適應(yīng)。在前一個戰(zhàn)線上，世界自然基金會正與一些世界上最大的糧食生產(chǎn)商、貿(mào)易商、消費(fèi)者品牌和零售商合作，使糧食生產(chǎn)更有效率，利用更少的土地、水和能源，同時釋放更少的廢物和溫室氣體。

世界自然基金會幫助創(chuàng)建了多種重要大宗商品的標(biāo)準(zhǔn)與認(rèn)證體系，包括糖、棕櫚油、大豆、野生魚類和養(yǎng)殖魚類。該機(jī)構(gòu)還努力為牛肉建立類似體系。

這些舉措再加上其他努力，可以幫助我們減少糧食對環(huán)境的影響，將“地球超載日”延后，直到我們再次在地球力所能及的范圍內(nèi)生活。

適應(yīng)是個獨(dú)特的挑戰(zhàn)，我們也在追求新的解決辦法。11月，世界自然基金會將與美國進(jìn)步研究中心合作舉辦模擬及演習(xí)“糧食連鎖反應(yīng)”。在這兩天里，來自全世界的數(shù)十位決策者、科學(xué)家、食品公司高管及其他利益相關(guān)方將齊聚華盛頓，解決假設(shè)出現(xiàn)的糧食短缺危機(jī)及其產(chǎn)生的副作用。

我們也許不知道下次糧食短缺將是什么情況，但科學(xué)證據(jù)和歷史證據(jù)告訴我們，糧食危機(jī)將會到來—它們將愈發(fā)嚴(yán)重且持續(xù)更長時間。我們還知道，基于數(shù)十年的發(fā)展軌跡，“地球超載日”明年將更早到來，而后年會比明年還早。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2015-08-14）

S858.28

A

1002-1957(2016)01-0105-03

2016-01-05

吳志金（1988-），男，江西鷹潭人，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，碩士，研究方向為畜禽傳染病的診斷與防治.E-mail：xiesanshao1988@163.com

伍少欽（1975-），男，浙江瑞安人，高級獸醫(yī)師，碩士，主要從事規(guī)?；i場健康養(yǎng)殖、常見豬病的控制與凈化研究. E-mail：wsqin326@126.com