利用體外產(chǎn)氣法研究3個品種柱花草與王草間的組合效應

張亞格 李 茂 周漢林* 胡 琳 李 韋 徐鐵山

(1.海南大學農(nóng)學院，?？?70100；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所，儋州571737)

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利用體外產(chǎn)氣法研究3個品種柱花草與王草間的組合效應

張亞格1,2李 茂2周漢林2*胡 琳1,2李 韋1,2徐鐵山2

(1.海南大學農(nóng)學院，海口570100；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所，儋州571737)

本試驗旨在利用體外產(chǎn)氣法研究3個品種柱花草與王草間的組合效應。將3個品種柱花草[熱研2號、20號、21號柱花草]與熱研4號王草分別以6個比例[0∶100、10∶90、20∶80、40∶60、50∶50、100∶0]組合，利用體外產(chǎn)氣技術，分析不同比例的組合對產(chǎn)氣量、產(chǎn)氣參數(shù)、體外干物質消化率(IVDMD)、氨態(tài)氮(NH3-N)和微生物蛋白(MCP)含量的影響，計算各組合的單項組合效應值和綜合組合效應值，進而篩選出各品種柱花草與王草的適宜比例。結果表明：1)熱研2號和20號柱花草與王草不同比例組合的快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量差異達到顯著水平(P<0.05)，快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量達到最大的組合比例分別為30∶70和50∶50。熱研2號柱花草∶王草、熱研21號柱花草∶王草分別為50∶50、40∶60時的IVDMD最高，與僅有王草做底物時差異顯著(P<0.05)。熱研2號柱花草∶王草、熱研20號柱花草∶王草為30∶70時MCP含量最高。NH3-N含量隨著柱花草比例的遞增出現(xiàn)先增高后降低的趨勢，各品種柱花草與王草組合均以30∶70時最高。2)3個品種柱花草與王草的綜合組合效應值均隨著柱花草比例的增大而呈現(xiàn)單峰型增長趨勢，其中熱研2號柱花草∶王草和熱研20號柱花草∶王草為30∶70時最高，熱研21號柱花草∶王草為20∶80時最高。綜合得出，在王草中添加適宜比例的柱花草能夠提高體外發(fā)酵的產(chǎn)氣量、IVDMD和MCP含量，提高瘤胃微生物活力，產(chǎn)生正組合效應；熱研2號、20號柱花草與王草均以30∶70組合效果最佳，熱研21號柱花草與王草以20∶80組合效果最佳。

柱花草；王草；體外產(chǎn)氣；組合效應

粗飼料是家畜生產(chǎn)的基本生產(chǎn)資料，粗飼料的品質對動物生長發(fā)育起著決定性的作用，利用牧草間的組合效應進行科學搭配，不僅可以提高牧草飼料的利用率、降低飼養(yǎng)成本，還能通過組合間的增益效應來提高家畜生產(chǎn)性能。柱花草是我國熱帶、亞熱帶地區(qū)重要的放牧和刈割兼用型豆科牧草[1]，具有營養(yǎng)價值豐富、適口性好等特點，自1962年首次由國外引進后，在我國南方地區(qū)得到廣泛種植，目前已審定品種12個[2]，其中熱研2號柱花草(S.guianensisSw. Reyan No. 2)是1991年由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所熱帶牧草研究中心選育出來的優(yōu)良品種，也是現(xiàn)今我國南方地區(qū)種植面積最廣、應用最為廣泛的品種，而熱研20號柱花草(S.guianensisSw. Reyan No. 20)和熱研21號柱花草(S.guianensisSw. Reyan No. 21)是2011年選育的抗炭疽病新品種[3-4]。熱研4號王草(Pennisetumpurpureum×P.americanumcv. Reyan No. 4)是一種優(yōu)質的熱帶刈割型禾本科牧草，具有產(chǎn)量高、抗逆性強、適口性好等特點，在我國南方各省已有大面積種植[5-6]。豆科牧草與禾本科牧草組合飼喂家畜一直以來都是畜牧生產(chǎn)實踐中常用到的組合方式，也是當前畜牧方面研究的熱點問題。由于柱花草屬于優(yōu)質豆科牧草且產(chǎn)量低于禾本科牧草，市場價格也往往較高，并且考慮到過量的飼喂豆科牧草容易引起反芻動物瘤胃臌脹病，本試驗中柱花草的添加量最高為50%。于騰飛等[7]利用體外瘤胃發(fā)酵法研究花生蔓與4種粗飼料間組合效應，結果表明花生蔓與青貯玉米秸、干玉米秸和羊草均以20∶80組合效果最好。柱花草和王草作為我國南方地區(qū)常見的優(yōu)質牧草，也常被農(nóng)戶混合飼喂，但其混合比例并未得到科學的指導。本試驗將熱研2號、20號和21號柱花草與熱研4號王草分別以0∶100、10∶90、20∶80、40∶60、50∶50、100∶0組合，利用體外產(chǎn)氣技術，分析不同比例的組合對產(chǎn)氣量、產(chǎn)氣參數(shù)、體外干物質消化率(IVDMD)、氨態(tài)氮(NH3-N)和微生物蛋白(MCP)含量的影響，計算各組合的單項組合效應值和綜合組合效應值，進而篩選出各品種柱花草與王草的最佳比例。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試植物為熱研2號、20號、21號柱花草與熱研4號王草(均為營養(yǎng)期)，于2015年8月24日采集于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所農(nóng)業(yè)部熱帶牧草種質圃。采集的植物樣本通過110 ℃殺青30 min后用65 ℃烘48 h，粉碎過40目篩制成樣品備測。瘤胃液取自3頭年齡和體重相近的成年海南黑山羊。

1.2 試驗設計

熱研2號、20號、21號柱花草干草粉分別與熱研4號王草干草粉以0∶100、10∶90、20∶80、40∶60、50∶50、100∶0組合進行體外產(chǎn)氣試驗，每種組合3個重復。

1.3 體外產(chǎn)氣試驗

體外產(chǎn)氣技術采用Zhao等[8]的培養(yǎng)液的配制方法和試驗方法。

緩沖液Ⅰ：23.5 g Na2HPO4·12H2O、12.5 g NaHCO3和11.5 g NH4HCO3溶于400 mL蒸餾水中；緩沖液Ⅱ：23.5 g NaCl、28.5 g KCl、6.0 g MgCl2·6H2O、2.63 g CaCl2·2H2O溶于1 000 mL蒸餾水中；混合培養(yǎng)液：取400 mL緩沖液Ⅰ和50 mL緩沖液Ⅱ混合，然后加入蒸餾水，使這種混合的緩沖液終體積達到500 mL。緩沖液Ⅰ和混合培養(yǎng)液現(xiàn)用現(xiàn)配。

選擇3頭年齡和體重相近的成年海南黑山羊，安裝永久性瘤胃瘺管，在晨飼(09:00)前抽取瘤胃液，經(jīng)4層紗布過濾，量取312.5 mL過濾后的瘤胃液于預先加入了1 000 mL蒸餾水并在38 ℃水浴中預熱的真空容器中，然后加入250 mL預先配制好并在38 ℃水浴中預熱的混合培養(yǎng)液，并持續(xù)通入CO2約10 min。稱取按不同比例混合好的草粉干樣0.2 g，倒入提前稱好質量的尼龍袋(3 cm×5 cm)中，綁緊后放入注射器前端。取30 mL瘤胃液-緩沖液的混合液加到每一個注射器中，排凈空氣，使其保持真空狀態(tài)，并封閉注射器口，記錄活塞的位置，并在38 ℃的水浴搖床中培養(yǎng)。本試驗設計在發(fā)酵開始后2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72 h讀取這11個時間點的產(chǎn)氣量，產(chǎn)氣量為相應時間點的活塞的位置讀數(shù)減去其初始位置讀數(shù)和空白產(chǎn)氣量(空白注射器中加入30 mL瘤胃液-緩沖液和1個空的尼龍袋，與試驗注射器同時培養(yǎng)讀數(shù))。

1.4 測定指標與方法

測定不同比例混合好的草粉干物質(DM)、粗蛋白質(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF)、有機物(OM)含量，參照張麗英[9]的方法。體外產(chǎn)氣試驗末期(72 h)測定人工瘤胃液NH3-N及MCP含量，NH3-N含量測定采用凱氏定氮法[10]，MCP含量測定采用三氯醋酸(TCA)沉淀蛋白質法[11-12]。

1.5 相關計算公式

1.5.1 IVDMD

IVDMD(%)=[(樣本質量-殘渣質量)/

樣本質量]×100。

1.5.2 體外發(fā)酵參數(shù)

將各樣品不同時間點的產(chǎn)氣量代入由?rskov等[13]提出的以下模型：

GP=a+b(1-e-ct)。

式中：GP為t時間點的產(chǎn)氣量(mL)；a為飼料快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量(mL)；b為慢速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量(mL)；c為b的速率常數(shù)(mL/h)；a+b為潛在產(chǎn)氣量(mL)。

根據(jù)非線性最小二乘法原理，求出a、b、c。

1.5.3 組合效應值

單項組合效應(single-factor associative effects,SFAE)值的計算采用以下公式：

單項組合效應值=(實測值-加權估算值)/

加權估算值。

綜合組合效應(synthetically associative effects,AEs)值的計算采用以下公式：

綜合組合效應值(%)={[(GP實測值/GP加權

估算值)×SUBGP/(SUBGP+SUBWCP)+

(MCP實測值/MCP加權估算值)×SUBMCP/

(SUBGP+SUBMCP)]-1×100}[7]。

式中：實測值為樣品某一指標實測值；加權估算值=A飼料某一指標實測值×A飼料配比(%)+B飼料某一指標實測值×B飼料配比(%)；SUBGP為用于生成氣體所需的飼料底物樣品質量(mg)，SUBGP=2.27(mg/mL)×產(chǎn)氣量(mL)，2.27為每生成1 mL氣體平均所需的飼料底物樣品數(shù)量[14]；SUBMCP為用于生成MCP所需的飼料底物樣品質量(mg)，SUBMCP=MCP(mg)/0.625，其中0.625為MCP干物質中蛋白質的含量[15]。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用Excel 2003對數(shù)據(jù)進行整理，并采用SAS 9.3軟件包進行統(tǒng)計分析，用平均值±標準誤表示測定結果，用Duncan氏法對各測定數(shù)據(jù)進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 不同比例柱花草與王草組合的體外產(chǎn)氣特性

3個品種柱花草與王草按不同比例組合對體外產(chǎn)氣特性的影響見表1。不同品種柱花草與王草的不同比例組合間產(chǎn)氣量、慢速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量、潛在產(chǎn)氣量和慢速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量的速率常數(shù)之間差異均不顯著(P>0.05)，其中產(chǎn)氣量與潛在產(chǎn)氣量的變化規(guī)律基本一致；熱研2號和20號柱花草與王草不同比例組合的快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量差異達到顯著水平(P<0.05)，快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量達到最大的組合比例分別為30∶70和50∶50，熱研21號柱花草∶王草為10∶90時快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量達到最大，但各比例間差異未達顯著水平(P>0.05)。

表1 不同比例柱花草與王草組合的體外產(chǎn)氣特性

續(xù)表1項目Items比例Proportion產(chǎn)氣量Gasproduction/mL24h48h72h產(chǎn)氣參數(shù)Gasproductionparametersa/mLb/mLa+b/mLc/(mL/h)體外干物質消化率IVDMD/%微生物蛋白MCP/(mg/mL)氨態(tài)氮NH3-N/(mg/dL)熱研20號柱花草∶王草S.guianensisSw.ReyanNo.20∶kinggrass0∶10025.17±8.0034.50±6.3340.17±5.78-3.73±1.81b47.87±6.5844.14±7.040.05±0.0365.27±7.731.42±0.07cd49.71±7.99bc10∶9023.00±0.0031.50±0.5038.00±2.83-6.48±1.14b47.24±1.6940.76±2.830.04±0.0071.67±1.041.06±0.43d66.71±1.54a20∶8020.50±2.5028.50±3.5035.00±2.00-2.50±1.91ab41.17±2.1738.66±2.580.03±0.0166.73±2.722.04±0.26bc61.18±4.30ab30∶7029.67±8.5036.67±8.5042.33±8.65-0.79±1.99ab44.80±8.6944.01±7.210.04±0.0171.89±4.393.16±0.41a71.44±6.22a40∶6027.33±3.3034.00±2.4539.33±2.50-2.64±0.15ab42.85±3.2540.21±3.350.05±0.0171.16±0.922.13±0.34bc62.36±7.16ab50∶5028.50±1.5038.50±4.5044.00±5.662.59±3.07a44.70±7.9547.29±4.880.03±0.0068.04±4.412.45±0.55ab68.50±1.77a100∶022.00±2.0828.00±2.0830.67±1.25-2.50±2.10ab34.71±1.7632.21±2.120.05±0.0073.82±5.211.30±0.55cd42.64±2.37c熱研21號柱花草∶王草S.guianensisSw.ReyanNo.21∶kinggrass0∶10025.17±8.0034.50±6.3340.17±5.78-3.73±1.8147.87±6.5844.14±7.040.05±0.0365.27±7.73b1.42±0.0749.71±7.99bc10∶9023.00±4.0833.00±3.2736.33±4.11-0.65±1.8442.06±5.0941.41±3.260.03±0.0171.98±5.24ab1.70±0.4554.55±2.63abc20∶8025.33±4.0335.00±2.4540.67±3.09-3.51±1.0047.60±2.2344.10±1.650.04±0.0174.23±3.26ab1.75±0.6253.39±8.93abc30∶7019.50±1.5029.50±2.5034.50±2.50-2.36±1.8739.07±5.2236.71±3.360.04±0.0069.14±4.19ab1.56±0.8067.27±4.08a40∶6026.00±4.0833.00±1.6335.33±0.47-6.26±1.8644.26±2.2738.00±0.460.05±0.0175.23±4.35a2.03±0.4663.68±0.40ab50∶5025.33±4.5033.33±5.9138.00±4.97-1.86±2.3741.36±7.3639.51±5.700.04±0.0072.36±4.47ab2.30±0.7458.71±11.08abc100∶016.11±7.4320.78±4.3423.11±4.70-2.41±2.9626.14±17.0723.74±14.130.05±0.0170.58±2.12ab0.87±0.2244.03±0.22c

a:快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量；b:慢速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量；a+b:潛在產(chǎn)氣量；c：慢速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量的速率常數(shù)。同一項目、同列數(shù)據(jù)肩標相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

a: gas production of rapidly fermented fraction; b: gas production of slowly fermented fraction; a+b: potential gas production; c: rate constant of gas production of slowly fermented fraction. In the same column, values of the same item with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

柱花草與王草組合的IVDMD均高于僅有王草，其中熱研2號柱花草∶王草、熱研21號柱花草∶王草分別為50∶50、40∶60時的IVDMD最高，與僅有王草做底物時差異顯著(P<0.05)，熱研21號柱花草與王草各比例組合間IVDMD差異不顯著(P>0.05)。熱研2號柱花草∶王草、熱研20號柱花草:王草為30∶70時MCP含量最高，熱研2號柱花草∶王草為30∶70時顯著高于50∶50時(P<0.05)，熱研20號柱花草∶王草為30∶70顯著高于0∶100、10∶90、20∶80、40∶60、100∶0時(P<0.05)；熱研21號柱花草∶王草為50∶50時MCP含量最高，但與其他比例間差異不顯著(P>0.05)。NH3-N含量隨著柱花草比例的遞增出現(xiàn)先增高后降低的趨勢，各品種柱花草與王草組合均以30∶70時最高。

2.2 不同比例柱花草與王草的組合效應值

不同比例柱花草與王草的組合效應值見表2。從單項組合相應指數(shù)來看，柱花草與王草不同比例的組合大部分為正組合效應，其中熱研2號柱花草∶王草和熱研20號柱花草∶王草為30∶70時MCP的組合效應值最高，熱研2號柱花草∶王草為30∶70時顯著高于50∶50時(P<0.05)，熱研20號柱花草∶王草為30∶70時顯著高于10∶90、20∶80、40∶60時(P<0.05)。從綜合組合相應指數(shù)來看，3個品種柱花草與王草的綜合組合效應值呈現(xiàn)了較為統(tǒng)一的規(guī)律性，都是隨著柱花草比例的增大而呈現(xiàn)單峰型增長趨勢，其中熱研2號柱花草∶王草和熱研20號柱花草∶王草為30∶70時綜合組合效應值最高，分別為1.44和1.55，熱研21號柱花草∶王草為20∶80時綜合組合效應值達到最高，為1.37。

表2 不同比例柱花草與王草的組合效應值

3 討 論

3.1 不同比例柱花草與王草組合的體外產(chǎn)氣特性

體外發(fā)酵產(chǎn)氣量的多少取決于牧草中可發(fā)酵有機物的含量和反芻動物瘤胃微生物對有機物的分解能力[16]，牧草中營養(yǎng)成分的組成和質量決定了可發(fā)酵有機物的含量，而瘤胃微生物活力取決于瘤胃能氮平衡的程度。本試驗中3個品種柱花草與王草各組合產(chǎn)氣量最大的比例分別為40∶60、50∶50和20∶80，與潛在產(chǎn)氣量的變化趨勢基本對應，其中熱研20號柱花草∶王草為50∶50時產(chǎn)氣量和潛在產(chǎn)氣量均高于另外2個品種；熱研2號柱花草:王草、熱研20號柱花草∶王草、熱研21號柱花草∶王草快速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量最大的比例分別為30∶70、50∶50和10∶90，慢速發(fā)酵部分產(chǎn)氣量則均為100∶0時最高，王草作為禾本科牧草，其碳水化合物含量通常高于豆科牧草，而產(chǎn)氣量主要來源于植物中碳水化合物的發(fā)酵[17]，當加入柱花草后，潛在產(chǎn)氣量的升高說明在王草基礎飼糧中添加柱花草能提高山羊瘤胃微生物發(fā)酵性能。飼糧中可發(fā)酵碳水化合物和氮源的供應，即能氮平衡的程度，決定了飼料在瘤胃中的消化率[18]，本試驗中添加柱花草的組合IVDMD均高于僅有王草，說明添加柱花草后補充了氮源，促進了山羊瘤胃中的能氮平衡，因而提高了山羊瘤胃的消化率。

山羊瘤胃微生物的數(shù)量和種類與消化率、生長發(fā)育息息相關，因為瘤胃作為反芻動物所特有的消化器官，其作用主要是對牧草中淀粉、纖維等有機物進行消化，尤其是對一些難降解的纖維物質，瘤胃微生物能夠把粗纖維分解成碳水化合物和低級脂肪酸，將植物性蛋白質及NH3-N轉化成MCP，將淀粉轉化成糖等供山羊消化吸收。MCP能提供反芻動物蛋白質需要的40%～80%，是最主要的氮源供應者[19]。MCP含量的多少反映了培養(yǎng)體系中微生物種群的數(shù)量、活力及其利用NH3-N的能力[20]。本試驗中，熱研2號柱花草∶王草、熱研20號柱花草∶王草、熱研21號柱花草:王草MCP含量最高的比例分別為30∶70、30∶70和50∶50，說明在這些比例的組合下微生物的數(shù)量、活力達到最佳狀態(tài)。

瘤胃液中NH3-N是蛋白質降解和MCP合成的中間產(chǎn)物，因此瘤胃液中NH3-N含量是衡量瘤胃微生物氮代謝的一個重要指標，而瘤胃液中NH3-N含量過高或過低都不利于微生物的生長繁殖[21]。研究表明，瘤胃液適宜NH3-N含量為3.3～8.0 mg/dL[22]，實際上NH3-N含量在1～76 mg/dL變化[23]，本試驗中NH3-N含量為42.64～71.44 mg/dL，屬于正常變化范圍，但高于適宜范圍，原因可能在于培養(yǎng)時間的不同，試驗測定樣液均是72 h最終發(fā)酵后的瘤胃液，由于體外產(chǎn)氣發(fā)酵裝置的局限性，容器內容物不能外移，造成發(fā)酵終產(chǎn)物積累使得瘤胃微生物的生存環(huán)境發(fā)生改變導致大量微生物死亡，細菌溶菌、纖毛蟲自溶等釋放出氨。

3.2 不同比例柱花草與王草的組合效應值

柱花草作為豆科牧草，其在蛋白質含量上的優(yōu)勢大于禾本科牧草，而王草屬于山羊常用禾本科粗飼料，具有高產(chǎn)和高能量等特性，本試驗將兩者進行一定比例的組合，不但表現(xiàn)了各自的優(yōu)勢還得到了相應的增益效果，促進了飼料間的能氮平衡，使之產(chǎn)生正組合效應。單項組合效應值顯示，產(chǎn)氣量只有熱研2號柱花草∶王草為20∶80、50∶50和熱研20號柱花草∶王草為20∶80時產(chǎn)生負組合效應，IVDMD只有熱研20號柱花草∶王草為50∶50時為負組合效應，MCP為熱研2號柱花草∶王草為50∶50和熱研20號柱花草∶王草為10∶90時產(chǎn)生負組合效應，綜合組合效應值均為正組合效應。單項組合效應無法全面反映飼料利用情況，因而計算其綜合組合效應值。蘇海涯[24]研究表明，綜合組合效應值計算方法綜合考慮了產(chǎn)氣量與MCP含量的影響，用來評定桑葉與3種餅粕間的組合效應在變化趨勢上更有規(guī)律性也更為合理。根據(jù)綜合組合效應結果，熱研2號、20號和21號柱花草與王草的最佳組合比例分別為30∶70、30∶70、20∶80。劉庭玉[25]通過體外法研究牧草的組合效應，發(fā)現(xiàn)豆科牧草與禾本科牧草之間的組合存在著明顯的正組合效應，其中苜蓿:黑麥草為60∶40、苜蓿∶沙打旺∶狼尾草為40∶40∶20這2個配方顯著改善了育肥羔羊生產(chǎn)性能和屠宰性能。孫國強等[26]利用體外瘤胃發(fā)酵法研究全株玉米青貯與花生蔓間的組合效應，發(fā)現(xiàn)當花生蔓添加量低于50%時，其24 h產(chǎn)氣量和IVDMD均為正組合效應，最終得出全株玉米青貯與花生蔓以70∶30的比例組合最佳，與本試驗結果相近。

4 結 論

① 在王草中添加適宜比例的柱花草能夠提高體外發(fā)酵的產(chǎn)氣量、IVDMD和MCP含量，提高瘤胃微生物活力，產(chǎn)生正組合效應。

② 熱研2號、20號柱花草與王草均以30∶70組合效果最佳，熱研21號柱花草與王草以20∶80組合效果最佳。

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*Corresponding author, professor, E-mail: zhouhanlin8@163.com

(責任編輯 王智航)

A Study on Associative Effects of Three Cultivars of Stylosanthes with King Grass UsinginVitroGas Production Technique

ZHANG Yage1,2LI Mao2ZHOU Hanlin2*HU Lin1,2LI Wei1,2XU Tieshan2

(1.CollegeofAgriculture,HainanUniversity,Haikou570100,China; 2.TropicalCropsGeneticResourcesInstitute,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Danzhou571737,China)

This experiment was carried out to investigate the associative effects of three cultivars of stylosanthes with king grass usinginvitrogas production technique. Three cultivars of stylosanthes (S.guianensisSw. Reyan No. 2,S.guianensisSw. Reyan No. 20 andS.guianensisSw. Reyan No. 21) were combined withPennisetumpurpureum×P.americanumcv.Reyan No. 4 (king grass) in different proportions (0∶100, 10∶90, 20∶80, 40∶60, 50∶50 and 100∶0), respectively. The effects of combinations at different proportions on gas production, gas production parameters,invitrodry matter digestibility (IVDMD), and ammonia nitrogen (NH3-N) and microbial protein (MCP) contents were analyzed usinginvitrogas production technique. The single-factors associative effects value and synthetically associative effects value of each combination were calculated to select the best proportions. The results showed as follows: 1) significant differences were found in gas production of rapidly fermented fraction among different proportions of combinations ofS.guianensisSw. Reyan No. 2 andS.guianensisSw. Reyan No. 20 with king grass (P<0.05), which reached the highest at proportions of 30∶70 and 50∶50, respectively. IVDMD reached the highest whenS.guianensisSw. Reyan No. 2∶king grass andS.guianensisSw. Reyan No. 20∶king grass were 50∶50 and 40:60, respectively, and were significantly different from that of king grass only (P<0.05). MCP content reached the highest whenS.guianensisSw. Reyan No. 2∶king grass andS.guianensisSw. Reyan No. 20∶king grass were 30∶70. NH3-N content tended to be firstly increased and then decreased with the increase of stylosanthes proportion, and all of the combinations reached the highest at 30∶70. 2) Synthetically associative effects value of three cultivars of stylosanthes with king grass all showed unimodal increase with the increase of stylosanthes proportion, and reached the highest whenS.guianensisSw. Reyan No. 2∶king grass andS.guianensisSw. Reyan No. 20∶king grass were 30∶70, andS.guianensisSw. Reyan No. 21∶king grass was 20∶80. In conclusion, the supplementation of proper stylosanthes in king grass can improve gas production, IVDMD, MCP content and ruminal microbial activity, and acts positively associative effects; the effects are the best whenS.guianensisSw. Reyan No. 2∶king grass andS.guianensisSw. Reyan No. 20∶king grass andS.guianensisSw. Reyan No. 21∶king grass are 30∶70, 30∶70 and 20∶80, respectively.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(12)：3828-3835]

stylosanthes; king grass;invitrogas production; associative effects

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.12.015

2016-05-27

中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院基本科研業(yè)務費(1630032015044)；國家重點基礎研究發(fā)展計劃課題(2014CB138706)

張亞格(1992—)，女，山西永濟人，碩士研究生，從事動物營養(yǎng)與飼料科學研究。E-mail: zhangyage1992@163.com

*通信作者：周漢林，研究員，碩士生導師，E-mail: zhouhanlin8@163.com

S816.5

A

1006-267X(2016)12-3828-08