高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定養(yǎng)陰生津片中黃芪甲苷含量

張火旺，蔡勇科，吳志國(guó)，鄭　惠

（1.廣東省河源市藥品檢驗(yàn)所，廣東 河源　517000；　2.河源市中醫(yī)院，廣東 河源　517000）

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定養(yǎng)陰生津片中黃芪甲苷含量

張火旺1，蔡勇科2，吳志國(guó)1，鄭惠2

（1.廣東省河源市藥品檢驗(yàn)所，廣東 河源517000；2.河源市中醫(yī)院，廣東 河源517000）

目的 建立測(cè)定養(yǎng)陰生津片中黃芪甲苷含量的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLC-ELSD）。方法 色譜柱為Inertsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（32∶68），流速為1.0 mL／min，柱溫為35℃，ELSD檢測(cè)器漂移管溫度為60℃，載氣（空氣）流速為2.0 L／min。結(jié)果 黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.496 8～9.936 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.64%，RSD為0.22%（n=6）。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、靈敏、穩(wěn)定、準(zhǔn)確，無(wú)其他成分干擾，可作為養(yǎng)陰生津片的質(zhì)量控制方法。

養(yǎng)陰生津片；黃芪甲苷；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法

養(yǎng)陰生津片由黃芪、麥冬、地黃、天花粉、山藥、枸杞子、石膏、石斛、牡丹皮、黃連、茯苓、（北）五味子、紅參13味中藥組方，具有滋補(bǔ)肝腎、生津止渴、益氣降糖的功效，適用于成年人輕、中型非胰島依賴性糖尿病。原注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)（粵藥制字Z20070697）只有顯微特征和黃芪的薄層色譜鑒別，尚無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目。黃芪甲苷是方中主藥黃芪的活性物質(zhì)［1-3］。為有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，擬采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)（HPLC-ELSD）法測(cè)定養(yǎng)陰生津片中黃芪甲苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；Chromachem蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國(guó) ESA公司）；CP225D型電子天平（梅特勒公司）；SB2200型超聲處理器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

乙腈（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；水為超純水；黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)為110781-201515，供含量測(cè)定用，含量為100%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；養(yǎng)陰生津片（河源市中醫(yī)院自制，批號(hào)分別為 20150401，20150604，20150302）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件［4］

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱Inertsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0 mL／min；柱溫：35℃；漂移管溫度：60℃；載氣流速：2.0 L／min；進(jìn)樣量：20 μL。峰面積對(duì)數(shù)方程定量。

2.2溶液制備

對(duì)照品溶液：稱取黃芪甲苷對(duì)照品12.42 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作為黃芪甲苷對(duì)照品貯備液。

供試品溶液：取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約6 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取7 h，提取液回收甲醇至干，殘?jiān)铀?5 mL，微熱使溶解，用乙醚輕搖洗滌2次，每次20 mL，水溶液再用水飽和的正丁醇振搖提取6次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次40 mL，正丁醇回收溶液至干，殘?jiān)眉状既芙?，定容?0 mL容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按處方工藝取缺黃芪的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄HPLCELSD圖譜。結(jié)果在對(duì)照品溶液色譜主峰處，供試品溶液有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此色譜峰，表明陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1　HPLC-ELSD色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品貯備液1，5，10，15，20 μL，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)數(shù)（A）為縱坐標(biāo)、黃芪甲苷對(duì)照品質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)（C）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)數(shù)方程，得回歸方程A=1.451 5C+3.867 8，r=0.999 8（n=5）。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.496 8～9.936 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為 20 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.18%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密吸取同一批樣品，制備供試品溶液，依法進(jìn)樣6次，測(cè)定含量。結(jié)果的 RSD為0.83%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，每隔2 h進(jìn)樣測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果黃芪甲苷含量的 RSD為0.71%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)為20150401，黃芪甲苷含量為0.231 2 mg／g）適量，置索氏提取器中，分別加入2.2項(xiàng)下黃芪甲苷對(duì)照品貯備液（黃芪甲苷含量為0.363 4 g／L）1，2，3 mL，依法制得供試品溶液。精密吸取供試品溶液6份，各20 μL，注入高效液相色譜議，測(cè)定，計(jì)算黃芪甲苷的回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測(cè)定

取3批養(yǎng)陰生津片，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)3批樣品所測(cè)得結(jié)果，暫定養(yǎng)陰生津片中黃芪甲苷的含量標(biāo)準(zhǔn)為每1 g含黃芪甲苷不得低于0.10 mg。

表2　3批樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3　討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃芪甲苷的含量測(cè)定方法有比色法［5］、示差折光檢測(cè)器法［6］、薄層掃描法［7］、高效液相色譜法和HPLC-ELSD法［8-15］等。本研究中選用ELSD法對(duì)養(yǎng)陰生津片中的黃芪甲苷進(jìn)行定量測(cè)定，結(jié)果準(zhǔn)確。

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Content Determination of AstragalosideⅣ Yangyin Shengjin Tabletsby HPLC-ELSD

Zhang Huowang1，Cai Yongke2，Wu Zhiguo1，Zheng Hui2
（1.Heyuan Institute for Drug Control，Heyuan，Guangdong，China517000；2.Heyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Heyuan，Guangdong，China517000）

ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for the content determination of astragalosideⅣin Yangyin Shengjin Tablets.MethodsTheHPLC-ELSD method was adopted and the Inertsil C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase was acetonitrile-water（32∶68）.The flow rate was 1.0 mL／min.The column temperature was 35℃ The drift tube temperature of ELSD detector was 60℃，and the carrier gas（air）flow rate was 2.0 L／min.ResultsThe linear range of astragalosideⅣ was 0.496 8-9.936 0 μg.The average recovery rate was 99.64%，RSD was 0.22%（n=6）.ConclusionThe method is simple，sensitive，stable and accurate，which can be used for the quality control of Yangyin Shengjin Tablets.

YangyinShengjin Tablets；astragalosideⅣ；HPLC-ELSD

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）20-0053-03

張火旺（1974-），男，廣東河源人，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電子信箱）zhw1011＠163.com。

（2016-07-13）