二步擦拭轉(zhuǎn)移聯(lián)合硅珠法提取高度污染檢材DNA 2例

鐘大軍，王學(xué)為，余江

（1.麗水市公安司法鑒定中心，浙江麗水 323000；2.麗水市蓮都區(qū)檢察院技術(shù)科，浙江麗水 323000）

二步擦拭轉(zhuǎn)移聯(lián)合硅珠法提取高度污染檢材DNA 2例

鐘大軍1，王學(xué)為1，余江2

（1.麗水市公安司法鑒定中心，浙江麗水 323000；2.麗水市蓮都區(qū)檢察院技術(shù)科，浙江麗水 323000）

法醫(yī)遺傳學(xué)；事故，交通；DNA污染；二步擦拭轉(zhuǎn)移法；硅珠法

1 案例

1.1 簡(jiǎn)要案情

案例1：某日凌晨2：00左右，在某國(guó)道汽車(chē)西站路段發(fā)現(xiàn)一名老年婦女因頭頸部嚴(yán)重碾壓傷死亡，民警通過(guò)視頻監(jiān)控摸排，找到兩輛肇事嫌疑車(chē)輛。經(jīng)仔細(xì)觀察發(fā)現(xiàn)，在其中一輛廂式貨車(chē)右后輪內(nèi)側(cè)有一處污泥混雜的疑似人體血跡。

案例2：某木材廠內(nèi)發(fā)現(xiàn)一男子疑似被車(chē)輛撞擊死亡，無(wú)現(xiàn)場(chǎng)目擊證人，現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩輛轉(zhuǎn)運(yùn)木材的推土汽車(chē)為肇事嫌疑車(chē)輛。經(jīng)仔細(xì)觀察發(fā)現(xiàn)，其中一輛車(chē)左前輪外側(cè)緣有疑似人體血斑痕跡，表面黏附大量木屑。

為明確上述兩案中的肇事嫌疑車(chē)輛，需對(duì)案件現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)存在高度污染的疑似生物檢材進(jìn)行法醫(yī)DNA分型檢驗(yàn)。

1.2 檢驗(yàn)過(guò)程與結(jié)果

采用生物物證專(zhuān)用提取棉簽（公安部二所研發(fā)），通過(guò)二步擦拭轉(zhuǎn)移法對(duì)提取部位進(jìn)行擦拭。經(jīng)金標(biāo)抗人血紅蛋白（FOB，北京芬格爾安科技有限責(zé)任公司）檢測(cè)，按硅珠法提取DNA[1]。采用Identifiler?Plus試劑盒（美國(guó)AB公司），在9700型PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)AB公司）上參照試劑盒說(shuō)明書(shū)完成PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物在3130xl型遺傳分析儀（美國(guó)AB公司）上進(jìn)行毛細(xì)管電泳。

兩起案件中，待檢檢材均獲得了D8S1179、D21S11、D7S820等15個(gè)基因座特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，且分型結(jié)果與相應(yīng)死者完全一致，為甄別肇事車(chē)輛提供了關(guān)鍵證據(jù)。

2 討論

隨著我國(guó)機(jī)動(dòng)車(chē)數(shù)量和人口數(shù)量的增加，交通事故已成為當(dāng)今社會(huì)的重大問(wèn)題之一。道路交通事故中涉嫌車(chē)輛上物證的DNA檢驗(yàn)，在事故認(rèn)定中起著重要的作用。但是，由于交通事故中檢材往往會(huì)被反復(fù)碾壓，或黏附灰塵等污染物，故獲取的檢材常為微量、嚴(yán)重污染檢材，DNA分型易受現(xiàn)場(chǎng)檢材提取方法的影響[2]。因此，建立科學(xué)的污染檢材DNA提取方法對(duì)交通事故相關(guān)案件極為重要。本研究采用二步擦拭轉(zhuǎn)移法提取現(xiàn)場(chǎng)檢材，經(jīng)硅珠法提取DNA后，成功地獲得了兩起交通事故中高度污染的微量生物檢材的STR分型結(jié)果，確定了肇事車(chē)輛。

二步擦拭轉(zhuǎn)移法是一種常用的現(xiàn)場(chǎng)微量生物檢材提取方法，在指印等微量生物檢材的現(xiàn)場(chǎng)提取中已有較好的應(yīng)用[3-4]。使用二步擦拭轉(zhuǎn)移法提取交通事故現(xiàn)場(chǎng)高度污染的微量生物檢材時(shí)，應(yīng)注意以下細(xì)節(jié)：（1）推薦使用生物物證專(zhuān)用提取棉簽，檢出率較普通醫(yī)用棉簽略高，且使用方便；（2）棉簽的濕度適中，避免過(guò)分濕潤(rùn)；（3）擦拭時(shí)避免來(lái)回擦拭，盡可能往一個(gè)方向擦拭；（4）擦拭時(shí)力度適中，太輕或太重都會(huì)導(dǎo)致檢出率的降低，力度以棉簽頭稍彎曲為宜；（5）擦拭范圍集中在噴濺位置，擴(kuò)大擦拭范圍會(huì)增加雜質(zhì)，導(dǎo)致檢出率降低。

對(duì)于存在嚴(yán)重污染的現(xiàn)場(chǎng)生物檢材，除在現(xiàn)場(chǎng)提取時(shí)盡可能減少污染物對(duì)棉簽的黏附外，后續(xù)DNA提取方法是獲得相對(duì)高質(zhì)量模板DNA的另一關(guān)鍵。硅珠法較傳統(tǒng)的Chelex-100法，更能去除大部分雜質(zhì)、PCR抑制物等[5]，能獲得較為完整的STR分型譜帶。本文兩起案例采用二步擦拭轉(zhuǎn)移聯(lián)合硅珠法提取DNA，均獲得了較為理想的法醫(yī)DNA分型效果，對(duì)交通事故中高度污染生物檢材的DNA分型有一定的借鑒意義。

[1]Sweet D，Lorente M，Lorente JA，et al.An improved method to recover saliva from human skin：the double swab technique[J].J Forensic Sci，1997，42（2）：320-322.

[2]劉海耀，康朝彥.淺談交通事故法醫(yī)學(xué)物證檢材的勘驗(yàn)與提取[J].廣東公安科技，2015，（3）：60-61，63.

[3]張懷才，劉松，李佑英，等.手套印DNA檢驗(yàn)在偵查破案中的應(yīng)用[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（1）：59.

[4]紀(jì)中華.交通事故中汗?jié)撝赣NA檢驗(yàn)[J].刑事技術(shù)，2015，40（2）：162-163.

[5]聶勝潔，景強(qiáng)，李建京，等.PCR-STR技術(shù)在交通事故鑒定中的應(yīng)用[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2001，17（1）：32-34.

（本文編輯：張素華）

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DF795.2

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10.3969/j.issn.1004-5619.2016.06.029

1004-5619（2016）06-0479-02

2016-09-26）

鐘大軍（1975—），男，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)病理學(xué)及法醫(yī)臨床學(xué)鑒定、交通事故法醫(yī)病理學(xué)研究；E-mail：1169345301@qq.com