大鱗鲃的人工繁殖及體色變異分析

丁辰龍，藺玉華，王宣朋，姜愛蘭，覃寶利

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院宿遷農(nóng)科所，江蘇 宿遷 223800）

大鱗鲃的人工繁殖及體色變異分析

丁辰龍，藺玉華，王宣朋，姜愛蘭，覃寶利

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院宿遷農(nóng)科所，江蘇 宿遷 223800）

為了促進(jìn)引進(jìn)大鱗鲃的苗種擴(kuò)繁和種質(zhì)資源保護(hù)，在江蘇北部地區(qū)進(jìn)行了3齡大鱗鲃的池塘養(yǎng)殖和全人工繁殖.催產(chǎn)藥物包括4 μg/kg的促黃體釋放激素、2 mg/kg的馬來酸地歐酮和1.8 mg/kg的絨毛膜促性腺激素，干法人工授精.孵化桶內(nèi)微流水孵化，水溫23～25℃，48～70 h內(nèi)受精卵破膜.3齡親魚的產(chǎn)卵量為2.81×104～5.42×104，平均授精率為93.2%，平均孵化率為80.6%.從1 d仔魚養(yǎng)至30 d夏花苗，成活率約為66.1%.野生大鱗鲃引進(jìn)后，從第1代至第3代個(gè)體的生長(zhǎng)指標(biāo)和體色等性狀發(fā)生變化.第2代（白色）和第3代（紅色）的體色變異種數(shù)量均小于群體的0.3%，第3代不同體色個(gè)體的體質(zhì)量、體長(zhǎng)和頭長(zhǎng)等均存在顯著差異，依次為黑灰色＞黃色＞紅色，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）.

大鱗鲃；人工繁殖；養(yǎng)殖；體色變異

大鱗鲃（Barbus capito）屬于鯉科（Cyprinidae）、鲃亞科（Barbinae）、鲃屬（Barbus）.該魚原產(chǎn)于烏茲別克斯坦的阿姆河，為野生種[1].與我國的鲃?lì)愻~相比，大鱗鲃具有廣溫性、肉質(zhì)鮮美、生長(zhǎng)速度快、抗逆性強(qiáng)、耐鹽堿等優(yōu)良特性.鑒于我國內(nèi)陸鹽堿水域廣闊，魚類養(yǎng)殖種類單一，本課題組藺玉華于2003年將大鱗鲃引入國內(nèi).目前，大鱗鲃的鹽堿池塘養(yǎng)殖生物學(xué)、生理學(xué)、營養(yǎng)學(xué)及遺傳學(xué)等方面的研究已有報(bào)道[2-9]，野生魚的人工繁殖也有文獻(xiàn)記載[10-11].大鱗鲃的人工繁殖和池塘養(yǎng)殖已取得階段性進(jìn)展，在黑龍江、天津、內(nèi)蒙古、河北、山東、四川、江蘇等地區(qū)均有淡、咸水池塘養(yǎng)殖.由于大鱗鲃以高檔名貴魚類進(jìn)入市

場(chǎng)，因此漁民獲得了較大的經(jīng)濟(jì)效益.大鱗鲃的人工繁殖目前尚未形成一套成熟的技術(shù)體系，在親魚培育、催產(chǎn)方法、受精卵孵化等方面仍存在諸多問題，如人工繁殖魚苗的孵化率和苗種成活率較低，這在很大程度上困擾著大鱗鲃的規(guī)模化生產(chǎn)，滿足不了市場(chǎng)需求.此外，由于大鱗鲃引進(jìn)的原始種數(shù)量有限，群體的近親繁殖將會(huì)導(dǎo)致種群優(yōu)良性狀退化.

本研究報(bào)道了淡水池塘養(yǎng)殖大鱗鲃的親魚培育、催產(chǎn)、孵化、苗種培育等相關(guān)技術(shù)，以及野生大鱗鲃繁殖后代的生長(zhǎng)及體色變化.研究結(jié)果可為完善大鱗鲃人工繁殖技術(shù)、保護(hù)現(xiàn)有種質(zhì)資源提供科學(xué)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

親魚取自江蘇省宿遷市農(nóng)業(yè)科學(xué)院養(yǎng)殖基地3齡以上的大鱗鲃，該魚為野生苗種經(jīng)過池塘馴化、養(yǎng)殖、繁殖后的苗種培育成的親魚，屬于第2代親魚.雄魚體長(zhǎng)34.0～43.5 cm，體質(zhì)量0.50～1.26 kg；雌魚體長(zhǎng)42.0～46.4 cm，體質(zhì)量1.00～1.85 kg.

1.2 方法

1.2.1 親魚挑選

4月下旬，挑選體表鱗片完整無病、成熟度較好的親魚.雄魚輕壓其生殖孔有乳白色精液流出，精液入水即散.雌魚一般較雄性個(gè)體大，腹部膨大，生殖孔紅潤而突出，呈喇叭筒狀.

1.2.2 人工催產(chǎn)和受精

5月初，當(dāng)水溫穩(wěn)定在20～22℃時(shí)，從暫養(yǎng)池中挑選親魚進(jìn)行人工催產(chǎn).注射藥物為寧波生物制藥三廠生產(chǎn)的促黃體釋放激素類似物（LRH-A2）、馬來酸地歐酮（DOM）和絨毛膜促性腺激素（HCG），3種藥物混合注射.注射劑量為：4 μg/kg的LRH-A2+2 mg/kg的DOM+1.8 mg/kg的HCG.雌魚采用胸鰭腹腔2次注射，第1次僅注射1 μg/kg的LRH-A2，10～12 h后注射第2針（3種藥物混合）.雄魚注射劑量減半，僅1次.親魚催產(chǎn)后將雌、雄魚分開，放在暫養(yǎng)圓槽內(nèi)待產(chǎn)，圓槽直徑2.0 m，高0.5 m.以水泵循環(huán)流水刺激催產(chǎn)親魚和增氧，利用加熱裝置循環(huán)水調(diào)試水溫為23～25℃.催產(chǎn)后，在藥物效應(yīng)時(shí)間為10～18 h時(shí)檢查待產(chǎn)親魚.

采用干法授精：親魚催產(chǎn)后，在藥物效應(yīng)時(shí)間10～18 h時(shí)，每隔1～2 h檢查雌魚生殖孔，輕輕擠壓腹部，發(fā)現(xiàn)有卵粒流出，立即干法授精.人工授精后，立即將受精卵倒入孵化桶，微流水孵化.

1.2.3 受精卵孵化過程

圓柱孵化桶孵化：受精卵倒入圓柱孵化桶內(nèi)，每桶放置約1.5萬粒卵.孵化桶直徑15 cm，高40 cm，置于裝滿清水的孵化槽中，使用過濾器反沖式微流水孵化.孵化槽內(nèi)的水每天更換2～3次.孵化水溫為23～25℃，48～70 h破膜孵化出魚苗.當(dāng)孵化桶內(nèi)有10% 的魚苗出膜時(shí)，將桶內(nèi)魚胚倒入平面槽.

椎體孵化桶孵化：將受精卵放入椎體孵化桶內(nèi)，每桶放置約6～10萬粒卵.椎體孵化桶的體積為109.4 L（外徑95.0 cm，內(nèi)徑66 cm，高96.0 cm），使用微流水孵化.孵化水溫也是23～25℃，56 h左右時(shí)有魚苗出膜.將孵出的仔魚不斷移出孵化桶，倒入圓槽內(nèi)，繼續(xù)進(jìn)行魚苗培育.

1.2.4 懷卵量、成熟系數(shù)計(jì)算方法

隨機(jī)取8尾雌魚和5尾雄魚，分別測(cè)定體長(zhǎng)和體質(zhì)量.對(duì)測(cè)定魚體進(jìn)行解剖，稱量性腺質(zhì)量.取性腺中段1 g，放在培養(yǎng)皿內(nèi)計(jì)數(shù)，計(jì)算總懷卵量和雌、雄魚的成熟系數(shù)，即性腺質(zhì)量與體質(zhì)量之比.

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

采用SigmaPlot 11.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理.用One-way ANOVA分析數(shù)據(jù)差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)采用算術(shù)平均值±SD.

2 結(jié)果與分析

2.1 大鱗鲃產(chǎn)卵量及孵化率

大鱗鲃3齡親魚的生長(zhǎng)和性腺發(fā)育狀況如表1所示，產(chǎn)卵量和孵化率等如表2所示.

表1 大鱗鲃?dòng)H魚的生長(zhǎng)和性腺發(fā)育情況Tab.1 Conditions of growth and gonad of parental Barbus capito

由表1可以看出，蘇北地區(qū)池塘養(yǎng)殖的大鱗鲃3齡時(shí)，雌性和雄性的性腺均已成熟.雌魚的懷卵量達(dá)

到（7.54±5.35）萬粒，成熟系數(shù)為11.3%；雄魚的性腺質(zhì)量也達(dá)到了（15.2±5.02）g，成熟系數(shù)為1.55%.雌魚的體質(zhì)量、全長(zhǎng)均大于雄魚，性腺質(zhì)量更是遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過雄魚.

表2 大鱗鲃產(chǎn)卵量、受精率與孵化率Tab.2 Fecundity，fertilization rate and hatching rate of Barbus capito

由表2可以看出，3齡大鱗鲃雌魚的受精率能夠達(dá)到93.2%；孵化率達(dá)到80.6%.

2.2 仔魚培育及生長(zhǎng)

孵出第1天的仔魚沉臥于水底，體色為銀灰色，全長(zhǎng)（0.69±0.07）cm，靠卵黃囊的內(nèi)源性營養(yǎng)物質(zhì)生存.第4天仔魚上浮，此時(shí)為混合性營養(yǎng)，每天投喂1～2次豆?jié){.第4～6天時(shí)每天投喂蛋黃2～3次，投喂量1個(gè)蛋黃/10萬尾.第6天仔魚體內(nèi)卵黃囊消失，此時(shí)仔魚完成前期發(fā)育.仔魚第7天下塘，每天潑灑豆?jié){2次.魚苗下塘1周后，開始投喂人工顆粒餌料.土池培育15～20 d后，仔魚完成烏仔發(fā)育階段，隨后進(jìn)入夏花苗階段.魚種培育按照15尾/m2的密度進(jìn)行放養(yǎng).

魚苗養(yǎng)殖期間的體長(zhǎng)增加率和質(zhì)量增加率如表3所示.

表3 大鱗鲃魚苗生長(zhǎng)情況Tab.3 Growth of Barbus capito larvae

由表3可以看出，魚苗培養(yǎng)第3天時(shí)全長(zhǎng)僅為（0.86±0.04）cm，7天時(shí)放入土池飼養(yǎng)，全長(zhǎng)達(dá)到（1.06± 0.07）cm，培養(yǎng)第30天時(shí)全長(zhǎng)達(dá)到了（3.28±0.13）cm，即魚苗在培育的第1個(gè)月內(nèi)全長(zhǎng)增加了3.7倍，尤其是在后期，體長(zhǎng)增加率和質(zhì)量增加率都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過前期.魚苗在1～3 d的死亡率超過10%；3～7 d的死亡率小于11.3%；7～30 d的死亡率小于12.6%.從1 d仔魚養(yǎng)至30 d的夏花苗，魚苗成活率約為66.1%.

2.3 不同體色大鱗鲃的生長(zhǎng)

在同池魚塘飼養(yǎng)條件下，大鱗鲃在繼代培養(yǎng)中體色會(huì)出現(xiàn)變化，如圖1和圖2所示.

圖1 大鱗鲃體色的比較Fig.1 Comparison of body color of Barbus capito

圖2 大鱗鲃體色變異注釋圖Fig.2 Annotated map of body color genetic phenotypes of Barbus capito

由圖1和圖2可以看出，野生大鱗鲃雌魚和雄魚的體色有黑灰和黃色2種體色；人工繁殖的第1

代體色仍為黑灰和黃色；第2代出現(xiàn)了3種體色，即黑灰、黃和白色，白色為變異個(gè)體，出現(xiàn)率不超過群體的0.3%；第3代的1齡魚中出現(xiàn)了黑灰、黃和紅色3種體色，紅色為變異個(gè)體，出現(xiàn)率不超過群體的0.3%.

3種體色大鱗鲃的生長(zhǎng)狀況如表4所示.

表4 不同體色大鱗鲃生長(zhǎng)狀況Tab.4 Growth of juveniles and broodstock of Barbus capito with different body color

由表4可以看出，1齡大鱗鲃的3種體色中，黑灰色的大鱗鲃生長(zhǎng)狀況最好，其次是黃色大鱗鲃，紅色大鱗鲃的體質(zhì)量和體長(zhǎng)等方面均顯著小于其他2種體色的大鱗鲃，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）.4齡大鱗鲃中，白色大鱗鲃的長(zhǎng)勢(shì)最好；其次是黑灰色；黃色大鱗鲃的長(zhǎng)勢(shì)最差.

3 討論與結(jié)論

野生大鱗鲃從國外引進(jìn)后，在北京房山地區(qū)水泥池的流水中進(jìn)行馴化和養(yǎng)殖，個(gè)體的性成熟時(shí)間為5～6 a[10-11].本研究的親魚全部為蘇北地區(qū)純?nèi)斯し敝车牡?代大鱗鲃，在土池中養(yǎng)殖，個(gè)體性成熟為3 a，比野生魚的性成熟提早2 a.由于野生魚引進(jìn)時(shí)數(shù)量有限，因此以往對(duì)大鱗鲃的研究中未出現(xiàn)親魚懷卵量的數(shù)據(jù)，也未對(duì)人工繁殖技術(shù)的關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行詳細(xì)報(bào)道.本研究在大鱗鲃?dòng)H魚的催產(chǎn)藥物劑量、注射方法、孵化設(shè)備等方面進(jìn)行了全面闡述.

耿龍武等[10]和徐偉等[11]的研究中，大鱗鲃仔魚在培養(yǎng)的第4天開始吃食時(shí)直接下塘培育，魚苗的成活率未做詳細(xì)報(bào)道.本課題組近年來的養(yǎng)殖實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，上浮后的仔魚應(yīng)在室內(nèi)繼續(xù)培育，第7天下塘培育為宜.因?yàn)榇篦[鲃不同于青、草、鰱、鳙4大家魚，其親魚懷卵量?jī)H為家魚的1/10～1/5，同家魚比較，大鱗鲃的游動(dòng)緩慢，仔魚體質(zhì)弱，抗逆能力差，若過早進(jìn)入池塘，成活率很低.本研究中大鱗鲃魚苗在不同生長(zhǎng)階段的死亡率為：1～3 d內(nèi)，＞10%；3～7 d內(nèi)，＜11.3%；7～30 d內(nèi)，＜12.6%.從1 d仔魚培養(yǎng)至30 d的夏花苗，大鱗鲃的成活率約為66.1%，在養(yǎng)殖魚類中處于偏低水平，如低于云南光唇魚苗77.1%的成活率[12].

本課題組藺玉華于2003年引進(jìn)野生大鱗鲃1齡魚種100尾，體色為黑灰色和黃色2種.繼代養(yǎng)殖表明，大鱗鲃的子1代為黑灰色和黃色.魯翠云等[13]采用微衛(wèi)星標(biāo)記法分析了大鱗鲃養(yǎng)殖群體第1代的遺傳結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)第1代群體尚未受到選擇的影響，保持了豐富的稀有等位基因，第1代群體處于中度多態(tài)性水平，PIC為0.428 1，大于0.25而小于0.50，遺傳多樣性較好，具備進(jìn)一步生產(chǎn)及選育優(yōu)良種質(zhì)的潛力.第2代除了黑灰色和黃色外，出現(xiàn)了白色魚，其數(shù)量小于的群體0.3%，3種體色魚之間的生長(zhǎng)狀況略有差異，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），白色魚是自然選擇繁殖群體的變異.第3代除了黑灰色和黃色外，還出現(xiàn)了紅色魚，其數(shù)量也小于群體的0.3%.通過F檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，紅色魚的生長(zhǎng)指標(biāo)顯著低于其他2種體色的大鱗鲃，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明遺傳性狀出現(xiàn)了退化.產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因可能是近親繁殖、等位基因發(fā)生變化，也可能是雜合基因發(fā)生重組，具體原因還需要利用現(xiàn)代分子生物學(xué)手段進(jìn)行檢測(cè)和分析.

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（責(zé)任編校 紀(jì)翠榮）

Complete artificial propagation and analysis on variation of body color in Barbus capito

DING Chenlong，LIN Yuhua，WANG Xuanpeng，JIANG Ailan，QIN Baoli
（Suqian Institute of Agricultural Sciences，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Suqian 223800，Jiangsu Province，China）

To promote the seedling propagation and germplasm resources protection of introduced Barbus capito，the complete artificial propagation of 3-year-old Barbus capito in ponds in Northern Jiangsu was conducted.The hormones adopted as oxytocin drugs included 4 μg/kg LRH-A2，2 mg/kg DOM and 1.8 mg/kg HCG.Artificial dry fertilization was used and fry incubated by incubation barrels with low speed running water.When the water temperature ranged between 23-25℃，the embryonic development took 48-70 h.The spawning of 3-year-old individual ranged from 2.81×104to 5.42×104，and the fertilization rate and hatching rate were about 93.2% and 80.6% respectively.The surviving rate was about 66.1% when the 1-dayold larvas were cultivated to be the 30-day-old summer fingerlings.After the wild Barbus capito was introduced，the phenotypes such as growth indexes and body color changed since the first generation to the third generation of the artificial propagation.The second generation（white）and third generation（red）had mutants on body color，both of which accounted for less than 0.3% of the group.The body weight，the body length and the head length of third generation appeared significant differences among individuals of three body colors（P＜0.05），i.e.black grey＞yellow＞red.

Barbus capito；artificial propagation；breeding；variation of body color

Q178.1

A

1671-1114（2016）05-0060-05

2016-03-10

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資助項(xiàng)目（CX（15）1015）.

丁辰龍（1977—），男，副研究員，主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖方面的研究.

藺玉華（1950—），女，研究員，主要從事魚類生理和毒理方面的研究.