復(fù)發(fā)性翼狀胬肉中VEGF表達(dá)情況的臨床研究

鄭蘭育

復(fù)發(fā)性翼狀胬肉中VEGF表達(dá)情況的臨床研究

鄭蘭育①

目的：探討VEGF在原發(fā)性翼狀胬肉組織、復(fù)發(fā)性翼狀胬肉組織和正常球結(jié)膜組織中的表達(dá)情況。方法：選取2015年4月-2016年4月無(wú)錫第二人民醫(yī)院眼科的翼狀胬肉患者胬肉病理組織共40例作為試驗(yàn)組，其中原發(fā)性翼狀胬肉30例，復(fù)發(fā)性翼狀胬肉10例，另選取正常球結(jié)膜組織10例作為對(duì)照組。采用HE染色的方法觀察正常球結(jié)膜、原發(fā)性翼狀胬肉患者和復(fù)發(fā)性翼狀胬肉患者的組織學(xué)形態(tài)，比較三種組織形態(tài)差異。采用免疫組化方法對(duì)各組標(biāo)本進(jìn)行染色，利用IPP圖像軟件系統(tǒng)測(cè)定標(biāo)本中VEGF表達(dá)情況的平均光密度值，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：30例原發(fā)性翼狀胬肉患者的VEGF表達(dá)值為（0.0082±0.0004），10例正常球結(jié)膜患者VEGF表達(dá)值為（0.0037±0.0016），10例復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者VEGF表達(dá)值為（0.0232±0.0014），將三組測(cè)量結(jié)果通過(guò)非參數(shù)秩和檢驗(yàn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=240.211，P<0.01）。復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者VEGF表達(dá)值比原發(fā)組翼狀胬肉患者增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），原發(fā)組翼狀胬肉VEGF表達(dá)值與正常組VEGF表達(dá)值相比增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論：VEGF在復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者中高表達(dá)，表明VEGF參與了翼狀胬肉疾病的復(fù)發(fā)過(guò)程。

復(fù)發(fā)性翼狀胬肉； 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

First-author’s address：Wuxi NO.2 People’s Hospital，Wuxi 214000，China

翼狀胬肉是眼科常見的疾病，羅中伶等[1]調(diào)查東莞市橫瀝鎮(zhèn)40歲及以上戶籍人口翼狀胬肉的患病率為24.85%，其在臨床上表現(xiàn)為瞼裂部球結(jié)膜組織侵襲性生長(zhǎng)至角膜的偽肉組織，病變多數(shù)發(fā)于鼻側(cè)，侵犯角膜緣后進(jìn)一步增大，病情嚴(yán)重者可越過(guò)瞳孔區(qū)而遮蓋患者視野。復(fù)發(fā)性翼狀胬肉患者，胬肉組織常常充血發(fā)炎，再次手術(shù)復(fù)發(fā)率進(jìn)一步增加，給患者的工作和生活帶來(lái)許多麻煩，本試驗(yàn)通過(guò)比較原發(fā)性翼狀胬肉、復(fù)發(fā)性翼狀胬肉、正常球結(jié)膜組織中VEGF表達(dá)情況，探討VEGF在翼狀胬肉發(fā)生、發(fā)展以及復(fù)發(fā)過(guò)程中的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2015年4月-2016年4月無(wú)錫第二人民醫(yī)院診斷為翼狀胬肉，并經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)明確為胬肉組織40例為試驗(yàn)組，男11例，女29例，年齡39～79歲，平均（60.60±10.07）歲。原發(fā)性翼狀胬肉30例，男7例，女23例，年齡38～77歲；復(fù)發(fā)翼狀胬肉10例，男4例，女6例，年齡40～67歲；選取行斜視矯正術(shù)患者球結(jié)膜組織作為對(duì)照組（標(biāo)本采集均取得患者同意），男3例，女7例，年齡38～69歲。三組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。所有入選患者術(shù)前均排除眼外傷史，排除眼部活動(dòng)性病史。所有入選患者均取得患者本人同意，并經(jīng)由本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1　三組一般資料比較（±s）

表1　三組一般資料比較（±s）

組別年齡（歲）長(zhǎng)入角膜緣范圍（mm）充血情況病程（年）對(duì)照組（n=10）　57.60±12.050無(wú)-原發(fā)性翼狀胬肉（n=30）　64.20±12.652.90±0.58較輕10.50±2.87復(fù)發(fā)性翼狀胬肉（n=10）56.08±8.423.10±0.35較明顯　3.69±2.97

1.2方法 實(shí)驗(yàn)所需的儀器由無(wú)錫第二人民醫(yī)院病理科提供，抗VEGF單克隆抗體由北京中衫金橋生物公司提供，即用型SABC試劑盒購(gòu)自上海博正生物公司。術(shù)前0.03%聚維酮碘眼部沖洗，術(shù)中取下的胬肉組織，經(jīng)20%福爾馬林，固定6～8 h，切片后進(jìn)行相關(guān)HE染色和免疫組化染色。

1.3測(cè)量 采用image-proplus進(jìn)行圖像分析，對(duì)VEGF陽(yáng)性區(qū)域進(jìn)行光密度測(cè)量，比較試驗(yàn)組和對(duì)照組陽(yáng)性區(qū)域光密度值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，三組VEGF表達(dá)值比較采用非參數(shù)K-S檢查進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HE染色 鏡下見球結(jié)膜主要由上皮層和基質(zhì)層構(gòu)成，上皮層以非角化的復(fù)層鱗狀上皮組織為主，基質(zhì)層以疏松的結(jié)締組織為主，基質(zhì)層中見少量毛細(xì)血管、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞，見圖1。翼狀胬肉上皮層增生顯著，基質(zhì)層見大量纖維血管組織，同時(shí)伴大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，見圖2。復(fù)發(fā)性翼狀胬肉組織較原發(fā)性翼狀胬肉組織增生厚度更加明顯，炎性細(xì)胞數(shù)量更多，基質(zhì)層的毛細(xì)血管雜亂排列，見圖3。

圖1　正常結(jié)膜組織

圖2　原發(fā)性翼狀胬肉

圖3　復(fù)發(fā)性翼狀胬肉

2.2免疫組化染色 VEGF的陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域表現(xiàn)為棕黃色顆粒沉著于翼狀胬肉的上皮細(xì)胞層及血管內(nèi)皮細(xì)胞，而在結(jié)膜組織陽(yáng)性表達(dá)部位僅見于上皮基底層細(xì)胞有輕微表達(dá)，見圖4～6。30例原發(fā)性翼狀胬肉患者的VEGF表達(dá)值為0.0082±0.0004，10例正常球結(jié)膜患者VEGF表達(dá)值為0.0037±0.0016，10例復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者VEGF表達(dá)值為0.0232±0.0014，將三組測(cè)量結(jié)果通過(guò)非參數(shù)秩和檢驗(yàn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（F=240.211，P<0.01）。復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者VEGF表達(dá)值比原發(fā)組翼狀胬肉患者增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P<0.01），原發(fā)組翼狀胬肉VEGF表達(dá)值與正常組VEGF表達(dá)值相比增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

圖4　正常結(jié)膜組織免疫組化VEGF表達(dá)情況

圖5　原發(fā)性翼狀胬肉患者VEGF表達(dá)情況

圖6　復(fù)發(fā)性翼狀胬肉患者VEGF表達(dá)情況

3　討論

在翼狀胬肉患者病理組織中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有調(diào)整控制血管組織形成的作用[2-3]，這種細(xì)胞因子可以使血管通透性進(jìn)一步增加，導(dǎo)致血漿及血細(xì)胞滲漏，同時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子還起到增加血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行遷移、游走以及新生血管組織形成的作用[4]。本文的研究與以往的研究相同，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在翼狀胬肉中的表達(dá)程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于在正常的球結(jié)膜部位[5]，這可以充分說(shuō)明血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子參與了翼狀胬肉發(fā)病過(guò)程[6]，目前血管內(nèi)皮細(xì)胞因子主要有主要發(fā)現(xiàn)三種類型的受體[7]，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子只有在受體VEGFR-2相互結(jié)合后才可以起到增加血管壁的通透性的作用，同時(shí)可以通過(guò)觀察VEGFR-2在不同組織中的不同表達(dá)程度來(lái)間接判斷該組織的血管新生能力，文獻(xiàn)[8]研究表明血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有誘導(dǎo)血管組織及纖維細(xì)胞組織增殖的作用，翼狀胬肉主要是由血管組織和纖維組織構(gòu)成，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在翼狀胬肉中的高表達(dá)進(jìn)一步證明了這種觀點(diǎn)。在復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)程度明顯高于原發(fā)性翼狀胬肉組，由此筆者推測(cè)復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者血管新生能力高于原發(fā)性翼狀胬肉患者，血管內(nèi)皮細(xì)胞因子可能參與了翼狀胬肉的復(fù)發(fā)過(guò)程，正常球結(jié)膜組織在病理情況下血管內(nèi)皮細(xì)胞的高表達(dá)促進(jìn)了結(jié)膜組織的增生以及新生血管組織的形成[9]，在復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者中基質(zhì)層含有更多的新生血管組織，而新生血管的產(chǎn)生與組織損傷、缺血后自我修復(fù)密切相關(guān)，由此筆者推測(cè)翼狀胬肉術(shù)后復(fù)發(fā)的這部分患者可能與術(shù)后異常增多的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子相關(guān)。

在本研究中與其他已有的報(bào)道中都可以發(fā)現(xiàn)在翼狀胬肉患者上皮下組織中含有較多的新生血管成分，這種新生血管成分在復(fù)發(fā)性翼狀胬肉患者中表現(xiàn)更為突出，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子是當(dāng)前引起組織新生血管形成的較強(qiáng)的細(xì)胞因子，它可以使微血管組織的通透能力明顯增加，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞組織發(fā)生分裂能，同時(shí)使組織因子產(chǎn)生增加，血管內(nèi)皮細(xì)胞因子在病變組織中的含量可以應(yīng)用于判斷該組織新生生血管活性的指標(biāo)，復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者血管內(nèi)皮細(xì)胞因子的表達(dá)值增高，可以反映出復(fù)發(fā)組翼狀胬肉患者血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力較強(qiáng)[10]，這同時(shí)也證明再次行翼狀胬肉手術(shù)后其復(fù)發(fā)率可能進(jìn)一步增加，再次行翼狀胬肉手術(shù)前必須加強(qiáng)抗感染時(shí)間，必要時(shí)予以聯(lián)合應(yīng)用抗代謝增殖藥物[11-13]，復(fù)發(fā)性翼狀胬肉組織局部注射抗VEGF藥物治療可能是一種較好的選擇[14-15]。

[1]羅中伶，張立新，朱國(guó)平，等.東莞市橫瀝鎮(zhèn)40歲及以上人群翼狀胬肉患病率調(diào)查[J].國(guó)際眼科雜志，2014，14（7）：1292-1294.

[2] Hoyama E，Viveiros M M H，Shiratori C，et al.Expression of vascular endothelial growth factor（VEGF） in macrophages，fibroblasts，and endothelial cells in pterygium treated with 5-Fluorouracil[J].Seminars in Ophthalmology，2015，30（3）：1-6.

[3] Poenaru Sava M G，Raica M L，Cimpean A M.VEGF mRNA assessment in human pterygium： a new scope for a future hop[J]. Ophthalmic Research，2014，52（3）：130-135.

[4] Kim K W，Park S H，Wee S W，et al.Overexpression of angiogenin in pterygium body fibroblasts and its association with proliferative potency[J].Investigative Ophthalmology & Visual Science，2013，54（9）：6355-6362.

[5]彭暢，蔣正軒，梁坤，等.翼狀胬肉中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮抑素的表達(dá)以及新生血管生成情況[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，49（5）：645-648.

[6] Ribatti D.The crucial role of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in angiogenesis：a historical review[J]. British Journal of Haematology，2005，128（3）：303-309.

[7] Gebhardt M，Mentlein R，Schaudig U，et al.Differential expression of vascular endothelial growth factor implies the limbal origin of pterygia[J].Ophthalmology，2005，112（6）：1023-1030.

[8] Livezeanu C，Cr?i?oiu M M，M?nescu R，et al.Angiogenesis in the pathogenesis of pterygium[J].Romanian Journal of Morphology and Embryology，2011，52（3）：837-844.

[9]宋寅偉.翼狀胬肉新生血管形成機(jī)制及其治療的研究進(jìn)展[J].中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志，2012，30（2）：172-175.

[10]李永平，朱哲，張文忻，等.翼狀胬肉纖維組織起源于間充質(zhì)干細(xì)胞的證據(jù)[J].中國(guó)組織工程研究，2008，28（34）：6771-6775.

[11]夏朝霞，楊筱曦，馮志貞，等.抑制翼狀胬肉術(shù)后血管增生免疫納米微球VEGF McAb-PLA（Tet）-NP的制備方法研究[J].中華眼科醫(yī)學(xué)雜志：電子版，2016，6（3）：124-129.

[12]鄭嵐.翼狀胬肉切除聯(lián)合平陽(yáng)霉素沖洗預(yù)防翼狀胬肉復(fù)發(fā)[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（23）：4701-4702.

[13]景聰榮，白石，焦建慈.翼狀胬肉切除聯(lián)合絲裂霉素C及羊膜移植手術(shù)對(duì)預(yù)防翼狀胬肉復(fù)發(fā)作用臨床觀察[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2010，12（26）：100.

[14]劉祎，沙翔垠，彭娟，等.Avastin對(duì)翼狀胬肉成纖維細(xì)胞增殖的影響[J].眼科新進(jìn)展，2014，34（9）：813-816.

[15] Mak R K，Chan T C Y，Marcet M M，et al.Use of antivascular endothelial growth factor in the management of pterygium[J].Acta Ophthalmologica， 2016，94（4）：1-8.

Clinical Research of the Expression of VEGF in Recurrent Pterygium/

ZHENG Lan-yu.//
Medical Innovation of China，2016，13（30）：039-042

Objective：To investigate the expression of VEGF in primary pterygium，recurrent pterygium and normal conjunctiva.Method：From April 2015 to April 2016，40 cases of pterygium in Wuxi NO.2 People’sHospital were selected as the experimental group，including 30 cases of primary pterygium，10 cases of recurrent pterygium，another 10 cases of normal conjunctival tissue were selected as control group.HE staining was used to observe the histological morphology of normal conjunctiva，primary pterygium patients and recurrent pterygium patients，and to compare the differences between the three groups.The samples were stained with immunohistochemical method. The average light density of VEGF expression was measured by IPP image software system， and the SPSS 17 software was used for statistical analysis.Result：30 cases of primary pterygium was VEGF expression value of（0.0082±0.0004），10 cases of normal conjunctiva in patients with VEGF expression value of（0.0037±0.0016），10 cases of recurrence of pterygium patients the expression of VEGF was（0.0232±0.0014），three groups of measurement results by nonparametric rank sum test，the difference was statistically significant（F=240.211，P<0.01）.The expression of VEGF in patients with pterygium recurrence group than primary pterygium were significantly increased，the difference was statistically significant（P<0.01），primary pterygium group and normal group VEGF expression values of VEGF expression values increased，the difference was statistically significant（P<0.01）.Conclusion：VEGF was highly expressed in the recurrent group，which indicated that VEGF is involved in the recurrence of pterygium.

Recurrent pterygium； Vascular endothelial grow factor

①江蘇省無(wú)錫市第二人民醫(yī)院 江蘇 無(wú)錫 214000

鄭蘭育

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.30.010

（2016-06-28） （本文編輯：郎威）