176例成人急性髓細(xì)胞白血病免疫表型分析及其與療效、復(fù)發(fā)關(guān)系的研究

宋 斌，陳 雁，吳修偉，常 娟，周 璐，張榮耀，李章志，張 霞，章正華，萬楚成

（十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院血液科，湖北十堰442000）

176例成人急性髓細(xì)胞白血病免疫表型分析及其與療效、復(fù)發(fā)關(guān)系的研究

宋 斌，陳 雁，吳修偉，常 娟，周 璐，張榮耀，李章志，張 霞，章正華，萬楚成

（十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院血液科，湖北十堰442000）

目的 探討成人急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）免疫表型的特點(diǎn)及其與療效、復(fù)發(fā)的關(guān)系。方法 選擇2013年2月至2014年2月期間在我院血液科進(jìn)行治療的176例成年AML患者進(jìn)行免疫表型檢測(cè)，隨訪觀察24個(gè)月，記錄復(fù)發(fā)的數(shù)據(jù)。結(jié)果 176例AML患者中髓系特異性抗原主要陽(yáng)性表達(dá)依次為CD13（165例、93.75%）、CD117（115例、65.34%）、CD33（109例、61.93%）、MPO（81例、46.02%）、CD64（51例、28.98%）；造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原主要陽(yáng)性表達(dá)依次為CD38（122例、69.32%）、HLA-DR（94例、53.41%）、CD34（85例、48.30%），在176例AML患者中伴有淋系抗原陽(yáng)性表達(dá)的有79例，主要為CD56（58例、32.95%）、CD7（31例、17.61%）。在176例患者中，123位患者化療1至2個(gè)療程后達(dá)到完全緩解，其中：HLA-DR、CD34、CD7、CD19等4個(gè)抗原表達(dá)陽(yáng)性的患者的緩解率低于表達(dá)為陰性的患者（P＜0.05）；在24個(gè)月的隨訪觀察中，123例得到緩解的患者當(dāng)中25例出現(xiàn)復(fù)發(fā)，其中患者HLA-DR、CD34、CD7陽(yáng)性表達(dá)的患者復(fù)發(fā)比例高（P＜0.05）。結(jié)論 CD13、CD33、CD38等抗原在AML患者中表達(dá)較高，其中44.88%的患者伴有淋系抗原的表達(dá)；而患者具有CD7、CD34、CD56、HLA-DR表達(dá)陽(yáng)性后出現(xiàn)緩解的預(yù)期值相對(duì)較低，當(dāng)患者出現(xiàn)CD34、CD56、HLA-DR表達(dá)陽(yáng)性后增加其復(fù)發(fā)的概率。

AML； 免疫表型； 化療； 效果； 復(fù)發(fā)

急性髓細(xì)胞白血病（acute myeloid leukemia，AML）是血液科常見的惡性腫瘤，由于白血病的FAB分型主觀性較強(qiáng)，近年來流式細(xì)胞分析方法（flow cytometry，F(xiàn)CM）被廣泛應(yīng)用于白血病的檢測(cè)，白血病的免疫分型在臨床上得到明顯的重視，據(jù)報(bào)道［1］白血病的免疫表型與治療效果及預(yù)后之間存在一定的關(guān)聯(lián)，為此筆者對(duì)急性髓性白血病患者的免疫表型及其與療效、復(fù)發(fā)的關(guān)系進(jìn)行了針對(duì)性的研究。

材料和方法

1 對(duì)象與分組

選擇176例2013年2月至2014年2月期間在我院血液科進(jìn)行治療的成年AML患者作為研究對(duì)象，經(jīng)診斷所有患者均符合AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］，根據(jù)FAB分型，其中 5例為M0、6例為M1、80例為M2、31例為M3、18例為M4、35例為M5、1例為M6（以M2，M3，M5為最常見類型）。其中男性 93例，女性83例，中位年齡42.4（26～72）歲。所有患者均為初次接受治療。

2 儀器與試劑

Epics XL流式細(xì)胞儀，多甲藻葉綠素蛋白（Per CP）、紅蛋白（PE）、異硫氰酸熒光素（FITC），CD2、CD3、CD20等抗體（均購(gòu)買自美國(guó)Beckman Coulter公司）。

3 檢驗(yàn)方法

抽取骨髓液2mL，以肝素抗凝，于采樣后24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。試管中加入肝素抗凝骨髓液50μL及熒光標(biāo)記抗體各20μL，放在避光37℃孵育15min，之后加2mL紅細(xì)胞裂解液震蕩混勻，沉淀10min，離心棄去上清，利用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌沉淀物2次，加入15mLPBS，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。免疫分型參考標(biāo)準(zhǔn)［3］。

4 治療方案與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

AML患者采用含阿糖胞苷方式進(jìn)行化療，包括：阿糖胞苷、柔紅霉素（DA方案），阿糖胞苷、去甲氧柔紅霉素（IA方案）以及阿糖胞苷、吡柔比星（TA方案），以推薦的劑量進(jìn)行化療，治療2個(gè)療程。利用三氧化二砷、全反式維甲酸聯(lián)合化療治療M3型患者。以張之南等編寫的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［4］作為患者完全緩解的參考標(biāo)準(zhǔn)。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS16.0中文版，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 AML患者抗原表達(dá)及治療情況

以異常細(xì)胞群表面抗原陽(yáng)性超過20%為抗原陽(yáng)性表達(dá)，176例AML患者多種抗原呈陽(yáng)性表達(dá)（見表1），其中髓系特異性抗原主要陽(yáng)性表達(dá)依次為CD13（93.75%）、CD117（65.34%）、CD33（61.93%）、MPO（46.02%）、CD64（28.98%）；造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原主要陽(yáng)性表達(dá)依次為CD38（69.32%）、HLADR（53.41%）、CD34（48.30%），在176例AML患者中伴有淋系抗原陽(yáng)性表達(dá)的有79例，主要為CD56（32.95%）、CD7（17.61%）?；颊咴诨?個(gè)療程獲得緩解的有123人，緩解率為69.88%，123人中25人在2年的隨訪中出現(xiàn)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為20.32%。

表1 AML患者各類抗原表達(dá)情況（例）

2 髓系抗原表達(dá)與療效的關(guān)聯(lián)

主要的陽(yáng)性表達(dá)髓系特異性抗原對(duì)應(yīng)的緩解率分別是CD13+69.70%、CD13-72.73%；CD117+73.43%、CD117-68.85%；CD33+69.72%、CD33-70.15%；MPO+75.30%、MPO-65.26%；CD64+66.67%、CD64-71.20%。陽(yáng)性與陰性表達(dá)之間的

緩解率均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05，表2。

表2 主要的陽(yáng)性表達(dá)髓系特異性抗原與緩解的關(guān)聯(lián)

3 造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原表達(dá)與療效的關(guān)聯(lián)

主要的陽(yáng)性表達(dá)造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原對(duì)應(yīng)的緩解率分別是CD34+62.35%、CD34-79.12%；HLA-DR+60.64%、HLA-DR-80.49%；CD38+66.39%、CD38-77.77%，其中CD34與HLA-DR陽(yáng)性與陰性表達(dá)之間的緩解率存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，表3。

表3 主要的陽(yáng)性表達(dá)造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原與緩解的關(guān)聯(lián)

4 淋系抗原表達(dá)與療效的關(guān)聯(lián)

主要的陽(yáng)性表達(dá)淋系抗原對(duì)應(yīng)的緩解率分別是CD56+58.62%、CD56-75.42%；CD7+54.83%、CD7-73.10%，兩個(gè)抗原陽(yáng)性與陰性表達(dá)之間的緩解率均存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，表4。

表4 主要的陽(yáng)性表達(dá)淋系抗原與緩解的關(guān)聯(lián)

5 抗原陽(yáng)性與復(fù)發(fā)的關(guān)聯(lián)

在兩年的隨訪中，獲得緩解的123人中有25人復(fù)發(fā)，對(duì)陽(yáng)性與陰性表達(dá)之間的緩解率存在明顯差異的4個(gè)抗原進(jìn)行回顧分析，分類計(jì)算復(fù)發(fā)率，CD34+28.30%、CD34-14.28%；HLA-DR+28.07%、HLA-DR-13.63%；CD56+35.29%、CD56-14.60%；CD7+35.29%、CD7-17.92%，其中具有HLA-DR+、CD34+、CD56+表達(dá)的患者復(fù)發(fā)率更高，存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，表5。

表5 抗原陽(yáng)性與復(fù)發(fā)的關(guān)聯(lián)

討 論

白血病是造血干細(xì)胞發(fā)生高度異質(zhì)性病變的惡性克隆性疾病，是嚴(yán)重威脅我國(guó)成人及青少年的惡性腫瘤。檢測(cè)急性白血病的方法常用形態(tài)學(xué)檢查，這是最基本的分型方法，對(duì)判斷、識(shí)別白血病原始細(xì)胞的所屬類別、增生程度都具有較好的臨床價(jià)值，但是其診斷符合率常常不足60% ～80%［5-6］，免疫分型是通過分析細(xì)胞內(nèi)外表達(dá)的特殊抗原，對(duì)白血病細(xì)胞的來源和分化進(jìn)行精細(xì)分析，具有樣本分析準(zhǔn)確率高、速度快、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，近年來在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的診斷中得到了廣泛的應(yīng)用。

在本研究收集的樣本中，常見的髓系抗原表達(dá)為CD13（93.75%）、CD117（65.34%）、CD33（61.93%）、MPO（46.02%）、CD64（28.98%），與葛繁梅［7］的報(bào)道一致，與許曉東、鹿群先等［8-9］報(bào)道的CD33是AML患者最高表達(dá)的抗原不相符；而HLADR、CD38、CD34是造血干/祖細(xì)胞表面的標(biāo)記抗原，所有AML患者中有79例伴有淋系抗原陽(yáng)性表達(dá)（包括CD56、CD7），這與相關(guān)報(bào)道一致［10］?？紤]出現(xiàn)此類情況應(yīng)與樣本數(shù)量有關(guān)，樣本數(shù)量沒有足夠大時(shí)，偏差往往存在，總的來說，髓系抗原、造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原、淋系抗原陽(yáng)性表達(dá)符合文獻(xiàn)預(yù)期。

所有患者中，根據(jù)FAB分型，其中M2、3、5三種

類型患者的例數(shù)超過 20，以M3抗原表達(dá)做最高，CD13等髓系抗原的表達(dá)次之，而僅在淋系抗原和造血干細(xì)胞標(biāo)記抗原中CD38高表達(dá)，與其他分型差異較大［11］，這也從側(cè)面揭示M3型治療、預(yù)后與其他分型不同提供了佐證。相對(duì)來說，髓系抗原表達(dá)在各分型中，表達(dá)較為平均，而造血干/祖細(xì)胞標(biāo)記抗原尤其CD34、HLA-DR在分化程度相對(duì)較低的類型如M1、2、4型中表達(dá)較高，同時(shí)CD7、CD56等淋系抗原也擁有和干/祖細(xì)胞抗原相似的抗原，在M1、2、4型中表達(dá)較高。

在我們的研究中，我們觀察到表達(dá)較高的髓系抗原與治療效果之間并不存在明顯的關(guān)聯(lián)；而相對(duì)髓系抗原來說，表達(dá)較低的干/祖細(xì)胞抗原與淋系抗原，一旦陽(yáng)性表達(dá)，患者往往具有較差的緩解率與較高的復(fù)發(fā)率。以CD56為例，CD56是主要表達(dá)在NK細(xì)胞以及部分T細(xì)胞表面上的抗原，與細(xì)胞粘附有關(guān)聯(lián)，表達(dá)增高后，往往提示患者復(fù)發(fā)的可能性更高，與報(bào)道［12］的結(jié)果也類似，但是目前尚無大規(guī)模的臨床研究對(duì)此提供支持，因此這一觀點(diǎn)仍有爭(zhēng)議，也有研究認(rèn)為CD56陰性或陽(yáng)性表達(dá)與患者復(fù)發(fā)關(guān)聯(lián)較小，但王會(huì)芳等［13］也認(rèn)為CD56陽(yáng)性是分化較差的白血病類型。

根據(jù)我們?cè)谂R床中的實(shí)踐，研究人員傾向認(rèn)為，此類抗原往往表達(dá)不高，但是一旦表達(dá)也提示腫瘤變異程度可能更高，從而出現(xiàn)上述結(jié)果，但是也有可能與研究的方法、樣本數(shù)量或者治療方案的差異有關(guān)，需要進(jìn)一步大樣本的觀察。

總的來說，就我們的研究分析認(rèn)為，白血病的免疫分型與患者的治療效果及復(fù)發(fā)之間存在有一定的關(guān)聯(lián)，具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。

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［13］王會(huì)芳，蘇顯都，于彩霞，等.125例成人急性髓系白血病免疫表型特點(diǎn)分析.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，36（4）：363-367.

（潘子昂編輯）

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Phenotype Analysis in Adult Acute Myeloid Leukemia and Its Relationship with Remission/Recurrence

SONG Bin，CHEN Yan，WU Xiu-wei，CHANG Juan，ZHOU Lu，ZHANG Rong-yao，LI Zhang-zhi，ZHANG Xia，ZHANG Zheng-hua，WANG Chu-cheng
（Department of Hematology，Taihe Hospital Affiliated Hospital of Hubei Medical College，Shiyan 442 000，China）

Objective To investigate the immune phenotype characteristics of adultacute myeloid leukemia（AML）and its efficacy.Methods We selected 176 cases of adult AML patients who were admitted in our hospital hematology treatment from February 2013 to February 2014.Immunophenotyping was performed in all subjects and patients were followed up for 24 months.Results AML patients with positive expression in myeloid-specific antigen were CD13（165 Li，93.75%），CD117（115 Li，65.34%），CD33（109 Li，61.93%），MPO（81 cases，46.02%），CD64（51 cases，28.98%）.Hematopoietic stem and progenitor cell marker antigen expression of major／were CD38（122 Li，69.32%），HLA-DR（94 Li，53.41%），CD34（85，48.30%）.Lymphoid antigen expression was found in 79 cases out of 176 cases of AML patients，mainly for CD56（58 Li，32.95%），CD7（31 cases，17.61%）.123 patients with chemotherapy 1-2 rounds achieved complete remission.HLA-DR，CD34，CD7，CD19 positive expression rates were lower in complete remission patients（P＜0.05）.After 24 month follow-up，25out of 123 patients had recurrence.The patients with HLADR，CD34，CD7 expression had higher recurrent rate（P＜0.05）.Conclusion CD13，CD33，CD38 expressions were higher in AML patients，of which 44.88%patients had lymphoid antigen expression.The patients who had positive CD7，CD34，CD56 and HLA-DRwere less likely to go into remissions.The patients who had positive CD34，CD56 and HLA-DR expression were more likely to have recurrence.

AML； Phenotype； Chemotherapy； Effect； Relapse

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.028

2016-05-31；

2016-06-20