免疫透射比濁法多點非線性校準在脂蛋白(a)測定中的應用

張漢園，曹風華，王 斌

(江蘇省鎮(zhèn)江市中西醫(yī)結合醫(yī)院檢驗科 212003)

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·論 著·

免疫透射比濁法多點非線性校準在脂蛋白(a)測定中的應用

張漢園，曹風華，王 斌

(江蘇省鎮(zhèn)江市中西醫(yī)結合醫(yī)院檢驗科 212003)

非線性校準； 脂蛋白(a)； 免疫透射比濁法

隨著全自動生化分析儀技術日趨完善，免疫透射比濁法正逐漸成熟，應用越來越廣泛。免疫透射比濁法中抗原抗體的結合需要經(jīng)過3個階段，導致吸光度變化與被測物水平變化呈非線性關系[1]。多點非線性校準是采用多個水平的標準物質(zhì)在特定波長下，測定出各自的吸光度值，采用不同水平和所測吸光度值之間的關系，繪制成非線性曲線[2]。脂蛋白(a)作為心腦血管疾病的獨立危險因素指標，需選擇較可靠的檢測方法，以保證結果的準確性[3]。本院Beckman AU680生化儀上有2種多點非線性校準方法：Y=aX2+bX+c和Spline曲線。本研究旨在建立更準確地體現(xiàn)免疫透射比濁法測定脂蛋白(a)整個反應過程的最佳曲線，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取臨床患者血清標本200例，另采用4個標準定值血清(由試劑廠商提供)。

1.2 儀器與試劑 檢測儀器為Beckman AU680型全自動生化分析儀。脂蛋白(a)檢測試劑盒及配套標準品均由萬泰生物技術有限公司提供。

2 結 果

2.1Y=aX2+bX+c和Spline曲線圖 見圖1、2(拍攝于AU680生化分析儀操作電腦)。

圖1 Y=aX2+bX+c曲線

2.2 2組數(shù)據(jù)對比 見表1、2。

2.3 結果分析 2個曲線圖充分反映2種非線性多點校準方法間的差異。從AU680自動生化分析儀的多點非線性校準中得知，Spline計算公式為Y=anX3+bnX2+cn+dn，采用最小二乘法的三次曲線擬合而成，可得出光滑曲線，也能將測定誤差擬合到曲線中，屬于函數(shù)逼近的范圍。Spline曲線將每個轉折點的數(shù)據(jù)作為非線性曲線的1個數(shù)據(jù)點，充分滿足統(tǒng)計數(shù)據(jù)中的數(shù)值。Y=aX2+bX+c曲線2次函數(shù)的擬合曲線，屬于線性或很近似線性的計算方法，其盡量滿足統(tǒng)計數(shù)據(jù)中的數(shù)值，在非線性分析中應用十分廣泛。

2個表格顯示了實際臨床應用中所得數(shù)據(jù)的不同之處。采用Y=aX2+bX+c曲線時，0～100 mg/L組、>400～600 mg/L、>600～800 mg/L組的脂蛋白(a)測定值比Spline曲線所得值高；>100～200 mg/L組和>200～400 mg/L組的脂蛋白(a)測定值卻恰恰相反，采用Spline曲線所得值較高。4個標準定值血清在2種多點定標方式條件下分別進行測定，Spline曲線的測定值更接近靶值；而Y=aX2+bX+c曲線所得值中，>100～200 mg/L組和>200～400 mg/L組所得值偏低，>600～800 mg/L組所得值偏高，這與表1臨床患者血清標本結果一致。

圖2 Spline曲線

表1 血清脂蛋白(a)對比

表2 4個標準定值血清脂蛋白(a)對比

3 討 論

國內(nèi)外已有電泳法、散射和透射免疫比濁法等多種方法測定脂蛋白(a)，其中免疫透射比濁法快速、準確、精密，且適合于各種類型生化自動分析儀，特別適用于大批量標本的測定[4]，本研究擬在現(xiàn)有試劑盒基礎上，對標準方式作進一步探討。免疫透射比濁法反應體系中，待測成分作為抗原出現(xiàn)，與反應體系中的相應抗體發(fā)生反應，形成抗原-抗體復合物。同時，試劑中的聚乙二醇可消除抗原-抗體蛋白的水化層，加速抗原-抗體復合物的形成，增加其穩(wěn)定性。通過儀器進行透射光強度測定，可取得水平和吸光度數(shù)據(jù)的相關關系。由于抗原與抗體結合過程中吸光度與水平間不呈線性關系，標準曲線擬合即為使用數(shù)學方法體現(xiàn)上述相關關系，其關鍵在于選擇擬合曲線類型，需要根據(jù)標準水平和吸光度值，建立1條曲線，使所有點在總體上盡量接近[5]。

此前的生化分析儀比色系統(tǒng)基于朗伯-比爾定律，校準曲線往往為直線，不具備非線性擬合能力。而現(xiàn)代全自動生化分析儀功能相當完善，其校準曲線擬合功能齊全，往往具備多種數(shù)學函數(shù)方程供非線性擬合時使用[6]，如線性函數(shù)、多項式函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對數(shù)函數(shù)、樣條函數(shù)、多參數(shù)的對數(shù)值對數(shù)函數(shù)等[7]。測定結果的準確與否很大程度上取決于是否采用適當?shù)那€擬合。采用合適的曲線擬合，能大大改善檢驗結果的準確性。

本研究結果顯示，Spline曲線更客觀，能更準確地體現(xiàn)免疫透射比濁法測定脂蛋白(a)的整個反應過程。脂蛋白(a)水平升高與冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生有著密切的關系，是當前心、腦血管疾病極有價值的危險性預測指標[8]，需選擇較可靠的檢測方法，以保證結果的準確性。有研究建立芯片電泳分離血清脂蛋白及其亞型的方法并初步探討其臨床應用價值，結果表明基于納米技術的芯片電泳可快速、簡便地測定脂蛋白及其亞型[9],對評價心、腦血管疾病的危險因素,實現(xiàn)對冠狀動脈粥樣硬化的早期檢測、預防及有效制訂防治策略具有重大意義[10]。

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Application of immune transmission turbidimetry multipoint nonlinear calibration in lipoprotein(a) determination

ZHANGHanyuan,CAOFenghua,WANGBin

(DepartmentofClinicalLaboratory,ZhenjiangMunicipalHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,Zhenjiang,Jiangsu212003,China)

nonlinear calibration; lipoprotein(a); immune transmission turbidimetry

張漢園，女，主任技師，主要從事臨床生物化學方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.016

A

1673-4130(2016)22-3137-03

2016-04-17

2016-06-23)