寬葉獨(dú)行菜不同極性部位對鼠胃腸動力及MTL和GAS的影響

孫士浩++都玉蓉++祁得勝++林鵬程

摘要：為明確寬葉獨(dú)行菜（Lepidium latifolium L.）提取物中促胃腸動力的有效部位，在小鼠腹腔注射硫酸阿托品的方法制造胃腸動力障礙模型，測定胃內(nèi)色素殘留率和小腸推進(jìn)比，并檢測血漿胃動素（MTL）和血漿胃泌素（GAS）的含量。結(jié)果表明，正丁醇部位對小鼠胃內(nèi)色素殘留率的影響與模型對照組比較有顯著差異，水提取部位、乙酸乙酯部位有極顯著差異；水提取部位對小腸推進(jìn)比的影響與模型對照組比較有顯著差異，乙酸乙酯部位有極顯著差異；水提取部位、正丁醇部位對小鼠MTL含量影響與模型對照組比較有顯著差異，乙酸乙酯部位有極顯著差異，乙酸乙酯部位對小鼠GAS含量的影響與模型對照組比較有顯著差異。初步判斷乙酸乙酯部位為寬葉獨(dú)行菜促胃腸動力的有效部位，其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：寬葉獨(dú)行菜（Lepidium latifolium L.）；極性部位；胃腸動力；血漿胃動素（MTL）；血漿胃泌素（GAS）

中圖分類號：S567.23+9；R915 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）18-4790-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.039

寬葉獨(dú)行菜（Lepidium latifolium L.）屬十字花科多年生草本植物，又稱大辣辣、止痢草，在中國主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、西藏、青海等地，世界各地均有分布，生在村旁、田邊、山坡及鹽化草甸，海拔1 800～ 4 250 m；全草入藥，有清熱燥濕作用，治菌痢、腸炎[1]。試驗用寬葉獨(dú)行菜不同極性部位提取物比較其對小鼠胃排空、腸推進(jìn)的作用，并觀察其對血漿胃動素、胃泌素的影響，旨在為寬葉獨(dú)行菜進(jìn)一步的研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

昆明種小鼠70只，體重（20±2） g，雌雄兼用，試驗動物生產(chǎn)許可證號為SC×K（青）2005-0001，由青海省地方病預(yù)防控制所動物中心提供；寬葉獨(dú)行菜采自青海省格爾木市大格勒鄉(xiāng)。

藥品和試劑：藍(lán)色葡聚糖2000（西寧寶信生物科技有限公司）；多潘立酮片（嗎丁啉）（西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批次：H109100003）；肝素鈉（山東東營愛博生物制品有限公司生產(chǎn)，批號：12100613）；大鼠胃動素（MTL）ELISA檢測試劑盒（96 T）、大鼠胃泌素（GAS）ELISA檢測試劑盒（96 T）（上海雅浦生物科技有限公司）。

儀器：RE-52B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；高速離心機(jī)，上海醫(yī)分儀器制造有限公司；752型紫外可見分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；YP15KN型電子天平，上海精密科學(xué)有限公司；離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)分儀器制造有限公司；酶標(biāo)儀Xmark Microplate Spectrophotometer，上海研域?qū)嶒炇以O(shè)備有限公司；HW-1000超級恒溫水浴鍋，成都泰盟軟件有限公司；高精度微量加樣器（0.5～10 μL、2～20 μL、20～200 μL），大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.2 方法

1.2.1 寬葉獨(dú)行菜不同極性部位的制備 將寬葉獨(dú)行菜全草陰干并粉碎后，用水提取2次（料液比1∶12，80 ℃，1 h），合并提取液，減壓濃縮后得到黑褐色黏稠的浸膏，此為水提取部位。取水提取部位浸膏溶于適量純水中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取2次，合并同一部位濾液，減壓濃縮，得到浸膏分別為石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位。

由于寬葉獨(dú)行菜的半數(shù)致死量為LD50=500 g/kg[2]，且通過預(yù)試驗的結(jié)果得出1/20LD50即給予20 g小鼠0.5 g/d生藥為最佳給藥劑量，故將所得各部位浸膏配制成1 mL含1.67 g生藥材的溶液，放置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 動物分組與給藥 將70只小鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，雌雄各半，分別為空白對照組（生理鹽水）、模型對照組（阿托品）、陽性對照組（阿托品+嗎丁啉）、受試藥物組Ⅰ（阿托品+水提取部位）、受試藥物組Ⅱ（阿托品+石油醚部位）、受試藥物組Ⅲ（阿托品+乙酸乙酯部位）、受試藥物組Ⅳ（阿托品+正丁醇部位）。

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后稱重并開始灌胃給藥，由試驗動物與人的體表面積比等效劑量換算表[3]進(jìn)行換算，陽性對照組給嗎丁啉混懸液（0.8 mg/mL），受試藥物組Ⅰ給水提取部位溶液（283 mg/mL），受試藥物組Ⅱ給石油醚部位溶液（7 mg/mL），受試藥物組Ⅲ給乙酸乙酯部位溶液（4.3 mg/mL），受試藥物組Ⅳ給正丁醇部位溶液（5 mg/mL），空白組和模型組給生理鹽水，均按0.3 mL/20 g灌胃，灌胃前將各部位藥物水浴加熱至37 ℃并混勻，每天灌胃1次，連續(xù)5 d后禁食不禁水24 h。于第七天正常灌胃藥物后，對除空白組外的各組小鼠均腹腔注射硫酸阿托品（0.02 mg/20 g），空白組腹腔注射等體積的生理鹽水[4]，20 min后對所有小鼠均灌服0.3 mL藍(lán)色葡聚糖2000淀粉糊狀物，30 min后脫頸處死小鼠。取主動脈血0.5 mL，注入含肝素鈉的離心管中，混勻，4 ℃，3 000 r/min離心30 min，取上清液，置-20 ℃下保存；之后剖開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門后，迅速從賁門處至回腸末端分離胃腸，取出后放于實驗臺上，剪掉全胃并將所有腸段自然拉直鋪平。用4 mL純水將胃內(nèi)殘留物充分洗于10 mL離心管中，以 4 000 r/min離心20 min，取上清液在波長620 nm處測其吸光度，求其各組平均值；另取3支離心管均放入0.3 mL葡聚糖藍(lán)2 000淀粉糊狀物，加入4 mL純水后相同條件下離心，取上清液測定的吸光度，將3支離心管的吸光度的平均值作為標(biāo)準(zhǔn)值，胃內(nèi)色素殘留率=（各試驗組胃內(nèi)色素殘留物吸光度平均值/標(biāo)準(zhǔn)值）×100%。同時，量取自幽門切跡至藍(lán)色葡聚糖2000淀粉糊狀物到達(dá)處為藍(lán)色葡聚糖2000推進(jìn)距離，測量自幽門切跡至回盲部的距離為小腸全長小腸推進(jìn)比=（藍(lán)色葡聚糖2000推進(jìn)距離/小腸全長）×100%[5]。取待測血漿，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明操作，檢測血漿MLT及GAS含量。結(jié)果均用x±s表示，數(shù)據(jù)用SPSS18.0軟件中的LSD-t檢驗進(jìn)行處理，以α=0.05為檢驗水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 寬葉獨(dú)行菜不同極性部位對胃排空、腸推進(jìn)的影響

在對小鼠胃內(nèi)色素相對殘留率的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型對照組比較，石油醚部位無明顯效果，陽性對照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有顯著差異（P<0.05），其中，陽性對照、水提取部位、乙酸乙酯部位的胃內(nèi)色素殘留率達(dá)到極顯著水平（P<0.01）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位與水提取部位差異不顯著（P>0.05），正丁醇部位差異顯著（P<0.05），石油醚部位差異極顯著（P<0.01）。

在小腸推進(jìn)比的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型組比較，石油醚部位無明顯效果，陽性對照、水提取部位、乙酸乙酯部位均有顯著差異（P<0.05），其中，乙酸乙酯部位達(dá)到極顯著水平（P<0.01）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位差異不顯著（P>0.05），水提取部位差異顯著（P<0.05），石油醚部位差異極顯著（P<0.01），如表1所示。

2.2 寬葉獨(dú)行菜不同極性部位對胃腸激素的影響

在血漿胃動素（MTL）含量的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型組比較，陽性對照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有顯著差異（P<0.05），其中，乙酸乙酯部位達(dá)到極顯著水平（P<0.01）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位差異不顯著（P>0.05），水提取部位和正丁醇部位差異顯著（P<0.05），石油醚部位差異極顯著（P<0.01）。

在血漿胃泌素（GAS）含量的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型組比較，乙酸乙酯部位有顯著差異（P<0.05）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位有顯著差異（P<0.05），其余各部位組有極顯著差異（P<0.01），如表2所示。

3 討論

近年來，人們的飲食結(jié)構(gòu)及生活規(guī)律發(fā)生了顯著的改變，致使胃腸動力障礙性疾病成為消化系統(tǒng)中發(fā)病率最高的疾病之一，嚴(yán)重影響人們的身體健康和生活質(zhì)量。目前就胃腸動力障礙性疾病的發(fā)病機(jī)制沒有統(tǒng)一的認(rèn)識，盡管在部分領(lǐng)域有一定的研究進(jìn)展，但不能說明胃腸動力障礙性疾病確切的發(fā)病機(jī)制[6]。

機(jī)體的胃排空與腸推進(jìn)率是反映胃腸運(yùn)動綜合功能的一項重要指標(biāo)，也是最為直觀和有效的研究方法[7]；MTL被公認(rèn)為啟動胃腸收縮活動的腦腸肽，在消化間期呈周期性釋放，通過作用于腸道神經(jīng)系統(tǒng)中的胃動素神經(jīng)元，觸發(fā)胃腸道消化間期移行性復(fù)合運(yùn)動（Migrating motor complex，MMC）Ⅲ相的發(fā)生，引起胃大幅度的收縮和小腸節(jié)律性的蠕動[8]；GAS主要由胃竇部G細(xì)胞分泌，有松弛幽門括約肌、促進(jìn)胃腸運(yùn)動的作用[9]；功能性消化不良（FD）患者血漿MTL濃度明顯低于正常人、血漿GAS水平變化明顯，一般認(rèn)為胃腸激素水平的變化可能是FD型胃腸運(yùn)動功能障礙的原因[10]。

阿托品是一種M膽堿受體阻斷劑，其通過抑制乙酰膽堿的釋放降低胃腸道平滑肌的興奮性，從而降低平滑肌蠕動的幅度和頻率[11]。本研究采用腹腔注射阿托品造胃腸動力障礙模型，并以小鼠胃排空與腸推進(jìn)率、血漿MTL、GAS水平為考察指標(biāo)，旨在篩選寬葉獨(dú)行菜提取物中促胃腸動力作用的有效部位。試驗結(jié)果表明，模型組在胃排空、腸推進(jìn)及MTL、GAS方面與空白組比較均有顯著差異，說明阿托品致胃腸動力障礙模型建立成功。其提取物中水提取部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能使小鼠胃排空加快，且水提取部位和乙酸乙酯部位效果最為顯著，在小腸推進(jìn)速率方面，乙酸乙酯部位可顯著增強(qiáng)小鼠小腸推進(jìn)率，故推測乙酸乙酯部位促胃腸運(yùn)動的作用機(jī)理可能是通過對抗阿托品對M膽堿受體的阻斷，增加胃腸道乙酰膽堿分泌來實現(xiàn)的，其確切作用機(jī)制需進(jìn)一步研究證實；小鼠血漿胃動素（MTL）和胃泌素（GAS）的水平，初步確定了乙酸乙酯部位在胃腸激素方面具有良好的改善作用，其對胃腸動力的促進(jìn)作用可能與其可提高M(jìn)TL水平有關(guān)。關(guān)于寬葉獨(dú)行菜的國內(nèi)外最新文獻(xiàn)中，大多研究其化學(xué)成分和抗寒、抗鹽等特性[12，13]，對該屬植物在藥用方面的文獻(xiàn)也僅限于中藥典籍記載和少量研究報道，其促進(jìn)胃腸運(yùn)動及治療胃腸動力障礙性疾病方面的研究還未見報道，因此，本研究結(jié)果為能充分利用這一資源，開發(fā)促胃腸動力中藥新藥奠定了良好的前期基礎(chǔ)，其藥效成分和藥理機(jī)制還需進(jìn)一步研究和探討。

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