病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)殘留量超標(biāo)原因的研究

張建偉，楊紅梅

(江蘇省常州市中心血站 213004)

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·論 著·

病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)殘留量超標(biāo)原因的研究

張建偉，楊紅梅△

(江蘇省常州市中心血站 213004)

目的 探討亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活后亞甲藍(lán)殘留量結(jié)果范圍及其原因。 方法 采用固相萃取法，檢測不同規(guī)格的病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)殘留量，并分析亞甲藍(lán)殘留量超標(biāo)的原因。結(jié)果 統(tǒng)計分析不同規(guī)格病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)殘留量，結(jié)果有差異。結(jié)論 根據(jù)亞甲藍(lán)殘留量超標(biāo)存在的原因采取相應(yīng)措施，加強(qiáng)制備過程中關(guān)鍵控制點的監(jiān)測，減少亞甲藍(lán)殘留量超標(biāo)現(xiàn)象，保證輸血安全。

亞甲藍(lán)； 固相萃??； 殘留量； 病毒滅活血漿

輸血技術(shù)是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不可缺少的手段，但輸血時有感染相關(guān)傳染性病毒的風(fēng)險，因此，對血液病毒進(jìn)行滅活是保障臨床安全輸血的措施之一。目前，采供血機(jī)構(gòu)為降低臨床輸血感染病毒的風(fēng)險，增加輸血安全性，一般采用亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿中的病毒[1-2]。亞甲藍(lán)滅活血漿病毒有效水平為1.0～5.0 μmol/L(即亞甲藍(lán)釋放量)。滅活病毒后使用一次性病毒滅活過濾器濾除亞甲藍(lán)，使最大殘留量不超過0.3 μmol/L(根據(jù)2012年版血站技術(shù)操作規(guī)程)，以保證大劑量輸血后亞甲藍(lán)在體內(nèi)累積不超標(biāo)，保證用血安全[3]；同時，亞甲藍(lán)殘留量過多將導(dǎo)致血漿外觀和色澤發(fā)生改變，不易被臨床醫(yī)院所接受。因此，嚴(yán)格控制并檢測血漿中亞甲藍(lán)殘留量有重要意義。本站按照2012年版血站技術(shù)操作規(guī)程，以固相萃取法對血漿中亞甲藍(lán)殘留量進(jìn)行萃取分離，采用F4040半自動生化儀檢測其水平，現(xiàn)將抽檢質(zhì)量結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本站2012～2015年共抽檢病毒滅活冰凍血漿462袋，抽檢規(guī)格包括75、100、125、150、175、200、250 mL。

1.2 儀器與試劑 F4040半自動生化分析儀購自Photometer，真空固相萃取裝置-隔膜真空泵購自天津市津騰實驗設(shè)備有限公司，Waters Oasis小柱(Waters Corporation Milford)購自Massachusetts USA公司，亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品購自Sigma公司，甲醇(色譜純)購自Sigma公司，冰醋酸(分析純)購自上海申博，亞甲藍(lán)測定試劑盒購自北京瑞爾達(dá)，Baso2000離心機(jī)購自臺灣貝索企業(yè)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的制備 亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取0.037 4 g標(biāo)準(zhǔn)品置100 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋定容至刻度，此水平為1.00×10-3mol/L。1.00 μmol/L亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取50 μL亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備液于50 mL容量瓶中用血漿稀釋定容至刻度。

1.3.2 測試樣品處理 將3 mL Waters Oasis小柱數(shù)支裝入固相萃取裝置上，用6 mL甲醇活化，每批3小柱加入1.00 μmol/L亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)工作液6 mL及1小柱0.30 μmol/L亞甲藍(lán)質(zhì)控液6 mL，其他各小柱加入6 mL待測血漿。萃取亞甲藍(lán)殘留量，后用30%甲醇6 mL清洗，隨后用含1%冰醋酸的甲醇溶液2 mL洗脫，將洗脫液離心(3 500 r/min)，取上清液作為樣品溶液。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 血漿中亞甲藍(lán)殘留量水平按照說明書公式進(jìn)行計算。

2 結(jié) 果

2.1 病毒滅活冰凍血漿亞甲藍(lán)殘留量區(qū)間分布 2012～2015年共質(zhì)量抽檢病毒滅活冰凍血漿462袋：亞甲藍(lán)殘留量0～<0.10 μmol/L有126袋，0.10～<0.20 μmol/L有191袋，0.20～<0.30 μmol/L有112袋，0.30～<0.40 μmol/L有30袋，≥0.4 μmol/L有3袋；0.30～<0.40 μmol/L的33袋中，金壇分站有11袋。按照2012年版血站技術(shù)操作規(guī)程，抽檢合格率大于或等需75%符合要求，而常州地區(qū)2012～2015年病毒滅活冰凍血漿亞甲藍(lán)殘留量總合格率為92.86%(429/462)，總不合格率為7.14%(33/462)，其中亞甲藍(lán)殘留量0.30～<0.40 μmol/L為90.90%(30/33)，≥0.4 μmol/L為9.10%(3/33)。

表1 不同規(guī)格與病毒滅活血漿亞甲藍(lán)殘留量的關(guān)系

續(xù)表1 不同規(guī)格與病毒滅活血漿亞甲藍(lán)殘留量的關(guān)系

表2 不同萃取小柱與亞甲藍(lán)殘留量的關(guān)系

2.2 不同規(guī)格與病毒滅活血漿亞甲藍(lán)殘留量的關(guān)系 2012～2015年常州地區(qū)病毒滅活冰凍血漿抽檢規(guī)格分別為75、100、125、150、175、200、250 mL，以檢測結(jié)果小于0.3 μmol/L為合格。7種規(guī)格的病毒滅活血漿亞甲藍(lán)殘留量測定結(jié)果中，規(guī)格為150 mL、175 mL和200 mL的病毒滅活血漿亞甲藍(lán)殘留量合格率較低，可能與本站根據(jù)血漿量選用相應(yīng)規(guī)格的一次性病毒滅活輸血過濾器材有關(guān)，見表1。

2.3 不同萃取小柱與亞甲藍(lán)殘留量的關(guān)系 取15例亞甲藍(lán)殘留量為0.30～<0.40 μmol/L標(biāo)本，分別采用Waters Oasis小柱和北京瑞爾達(dá)配套耗材小柱進(jìn)行固相萃取，后采用F4040半自動生化儀檢測其水平，平均測定3次。檢測結(jié)果表明， Waters Oasis小柱的吸附效果顯著好于北京瑞爾達(dá)小柱。見表2。

3 討 論

隨著亞甲藍(lán)光化學(xué)照射技術(shù)的發(fā)展，其相關(guān)應(yīng)用越來越廣泛，并被采供血機(jī)構(gòu)中廣泛采用。但是，過多的亞甲藍(lán)進(jìn)入人體內(nèi)會對機(jī)體產(chǎn)生一定毒性作用。因此，控制過濾前血漿亞甲藍(lán)的水平及過濾后亞甲藍(lán)殘留量成為重要質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[5-6]。

本站使用一次性病毒滅活濾器有2種規(guī)格，即01B和02B。01B對應(yīng)的血漿量為170 mL及170 mL以下，02B對應(yīng)的血漿量為170 mL以上；容量為170 mL左右的病毒滅活冰凍血漿亞甲藍(lán)殘留量超標(biāo)現(xiàn)象更為嚴(yán)重，建議廠家針對容量150～200 mL，生產(chǎn)1.5B規(guī)格的一次性病毒滅活濾器，可以有效減少亞甲藍(lán)殘留量帶來的潛在風(fēng)險。本研究結(jié)合采供血機(jī)構(gòu)血液質(zhì)量抽檢標(biāo)準(zhǔn)及本站病毒滅活冰凍血漿抽檢情況，亞甲藍(lán)殘留量偏高原因可能有：(1)工作人員責(zé)任性不強(qiáng)造成。根據(jù)血漿量應(yīng)選用相應(yīng)規(guī)格的一次性病毒滅活輸血過濾器材。本站使用1B和2B規(guī)格。1B對應(yīng)的血漿量為170 mL及170 mL以下；2B對應(yīng)的血漿量為170 mL以上。工作人員在血漿稱重分類時掌握不嚴(yán)，可能將170 mL及170 mL以下血漿袋放入170 mL以上的筐內(nèi)。此外，凈化室戳漿時，可能將1B的病毒滅活輸血過濾器材錯拿成2B。(2)光照結(jié)束后未及時過濾。有統(tǒng)計顯示，分別在光照結(jié)束后0 h、2 h、3 h進(jìn)行過濾比較，亞甲藍(lán)殘留會逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。(3)一次性病毒滅活輸血過濾器材本身存在質(zhì)量問題，光照結(jié)束，擠壓光照袋啟動過濾后，使含亞甲藍(lán)的血漿經(jīng)過濾器自然流入血漿儲存袋，當(dāng)出現(xiàn)過濾不暢的情況時，不得不人為用力去擠壓光照袋。

固相萃取是1種試樣預(yù)處理技術(shù)，采用固體吸附劑將樣品中的目標(biāo)化合物吸附，使樣品基體和干擾化合物分離，再用洗脫液洗脫，可分離和富集目標(biāo)化合物。小柱在吸附過程中主要通過阻滯作用、表面張力、電荷排斥力來完成[4]。

亞甲藍(lán)光照血漿病毒滅活關(guān)鍵環(huán)節(jié)為：(1)新鮮冰凍血漿在30～37 ℃水浴箱中融化，融化時注意不要將冰凍血漿碰到水浴箱壁，為了減少融化時間應(yīng)不斷輕柔搖動血漿袋，但不能劇烈搖晃，以免產(chǎn)生大量泡沫。(2)病毒滅活柜內(nèi)溫度保持2～6 ℃，每層光照達(dá)到血漿病毒滅活的效果。(3)滅活后血漿馬上濾除亞甲藍(lán)?？傊?，為降低病毒滅活冰凍血漿中亞甲藍(lán)殘留量，首先需要把握成分制備的關(guān)鍵控制點，加強(qiáng)工作人員責(zé)任心；其次，在抽檢過程中嚴(yán)格按照操作規(guī)程確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，將血液的每一步環(huán)節(jié)把握到位，才能保障血液安全。

[1]Wagner SJ.Virus inactivation in blood components by photoactive phenothiazine dyes[J].Transfus Med Rev,2002,16(1):61-66.

[2]葛健民,柏則蓉,梁啟忠,等.亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活前后血漿凝血因子等的質(zhì)量分析[J].中國輸血雜志,2012,25(8):750-751.

[3]周群剛,謝蓮,方敏,等.基于陰離子型環(huán)糊精超分子包合物高靈敏熒光光度分光法檢測血漿中殘留亞甲藍(lán)[J].中國藥房,2014,6(6):519-521.

[4]李榕,陳火玲,錢獻(xiàn),等.亞甲藍(lán)/光照法病毒滅活血漿的制備及應(yīng)用評價[J].臨床輸血與檢驗,2013,15(1):4-7.

[5]黎添華,邢啟明,勞麗嫦.亞甲藍(lán)殘留量在病毒滅活血漿中的限量檢測方法[J].現(xiàn)代診斷與治療,2014,25(7):1464-1465.

[6]梁啟忠,葛健民,程玉根,等.病毒滅活血漿亞甲藍(lán)殘留量的檢測及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(16):2148-2149.

Analysis of the causes of the excessive residuals of methylene blue in virus inactivated plasma

ZHANGJianwei,YANGHongmei△

(ChangzhouBloodCenter,Changzhou,Jiangsu213004,China)

Objective To discuss the results and causes of the residue of methylene blue after virus inactivation by methylene blue photochemical method.Methods A solid phase extraction method was used to detect residual amount of methylene blue of different specifications in the virus inactivation plasma and the reasons for the excessive residuals of methylene blue were analyzed.Results The residuals of methylene blue in the virus inactivation plasma in different specifications had differences,and the differences had statistical significance.Conclusion Corresponding measures should be taken according to different situations for the excessive residuals of methylene blue,and critical control points should be monitored in the process of preparation so as to decrease the phenomenon of excessive residuals of methylene blue and ensure the safety of blood transfusion.

methylene blue; solid phase extraction; residue; virus inactivated plasma

張建偉,男,副主任技師,主要從事血站質(zhì)量管理方面的研究。

△通訊作者，E-mail：yhmei83@126.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.026

A

1673-4130(2016)21-3019-02

2016-02-21

2016-05-18)