• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    電針對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JNK蛋白的影響

    2016-12-06 03:34:58張弘弢藍(lán)丹純李知行許能貴
    中國老年學(xué)雜志 2016年21期
    關(guān)鍵詞:高脂電針磷酸化

    張弘弢 藍(lán)丹純 李知行 許能貴 孫 健 易 瑋

    (廣州中醫(yī)藥大學(xué),廣東 廣州 510405)

    ?

    電針對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JNK蛋白的影響

    張弘弢 藍(lán)丹純 李知行1許能貴 孫 健2易 瑋

    (廣州中醫(yī)藥大學(xué),廣東 廣州 510405)

    目的 觀察電針對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的影響。方法 將24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、電針組8只。空白組予普通飼料喂養(yǎng),模型組與電針組予高脂飼料喂養(yǎng)。造模8 w后,空白組、模型組繼續(xù)如前喂養(yǎng)不進(jìn)行干預(yù),電針組予針刺雙側(cè)內(nèi)關(guān)、三陰交、足三里及腎俞,雙側(cè)足三里及三陰交加電。干預(yù)4 w后,用葡萄糖氧化酶法、ELISA及Western印跡檢測并比較各組大鼠空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FPG)、穩(wěn)態(tài)模型評(píng)價(jià)的胰島素抵抗(IR)指數(shù)(HOMA-IR)以及主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JNK蛋白的表達(dá)及其磷酸化水平。結(jié)果 與模型組比較,電針組FPG、FINS、HOMA-IR均顯著降低(P<0.01),而與空白組比較差異不顯著(P>0.01);與模型組相比較,電針組的JNK蛋白表達(dá)及其磷酸化水平顯著降低(P<0.01),與空白組比較差異不顯著(P>0.01)。結(jié)論 電針治療能調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞JNK蛋白表達(dá)及其磷酸化水平,使其降至正常水平,從而改善IR大鼠的IR狀態(tài),增強(qiáng)IR大鼠胰島素的敏感性。

    電針;胰島素抵抗;JNK蛋白

    胰島素抵抗(IR)在眾多心血管疾病的危險(xiǎn)因素中處于重要地位,同時(shí)也在多種代謝異常類疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用〔1〕。而C-jun氨基末端激酶(JNK)是調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要信號(hào)分子〔2〕,在IR形成過程中發(fā)揮重要作用。針灸作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的一部分,其多水平、雙向調(diào)節(jié)的作用在改善IR方面具有優(yōu)勢,既往研究也證實(shí)電針能有效改善IR〔3〕。血管內(nèi)皮細(xì)胞是胰島素的重要靶器官,本研究以血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn),通過觀察大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)以及JNK蛋白及其磷酸化水平的改變,探討并完善電針改善IR狀態(tài)的可能機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物及飼料 選用體重120~140 g的6周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)過程在屏障實(shí)驗(yàn)環(huán)境之中。實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求室溫18℃~22℃,相對(duì)濕度40%~85%;光照:12 h明/12 h暗,照度:150~300 Lx,每日手動(dòng)開關(guān)。普通飼料配方(質(zhì)量比):豆粕21%,小麥18%,麩皮10%,玉米31%,魚粉6%,稻谷4%,蛋黃粉3%,預(yù)混料3.5%,黃豆2%,植物油1.5%,多種維生素1%,由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。高脂飼料配方(質(zhì)量比):脂肪34.9%,蛋白質(zhì)26.2%,碳水化合物26.3%,由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供D12492號(hào)飼料。實(shí)驗(yàn)過程遵循實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物護(hù)理和使用的倫理準(zhǔn)則。

    1.2 設(shè)備與試劑 SAPK/JNK抗體購買于CST廠家,F(xiàn)INS測定試劑盒購自默科迪亞公司;電針儀選用上海華誼醫(yī)用儀器有限公司生產(chǎn)的G6805-2A型低頻電子脈沖治療儀(YZB/滬0735-26-2009);一次性無菌針灸針選用華佗牌,規(guī)格:0.35 mm×13 mm。

    1.3 方法

    1.3.1 分組與實(shí)驗(yàn)操作 選用SPF級(jí)SD大鼠24只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w,隨機(jī)分為正常組(8只)、高脂組(16只)。兩組分別給予普通飼料,高脂飼料喂養(yǎng)。8 w后,檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物FPG、FINS,計(jì)算IR指數(shù)(HOMA-IR),以評(píng)測模型是否成功建立。模型建立成功后,模型組隨機(jī)分為模型組(8只)、電針組(8只)。電針組,取雙側(cè)足三里、三陰交、內(nèi)關(guān)、腎俞,疏密波(密波50 Hz,疏波2 Hz,頻率10次/min),強(qiáng)度以大鼠后肢輕微抖動(dòng)為度,20 min/次,1次/d,持續(xù)4 w??瞻捉M與模型組采用與電針組相同的按壓固定時(shí)間,其余不做干預(yù),繼續(xù)如前喂養(yǎng)。

    1.3.2 標(biāo)本采集與檢測 針刺療程治療結(jié)束后,禁食不禁水12 h,于次日晨麻醉后行眼眶靜脈竇采血。FPG用葡萄糖氧化酶法測定;FINS采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),按說明書進(jìn)行操作測定;脫臼法處死,并從腹主動(dòng)脈灌注多聚甲醛固定,快速取主動(dòng)脈置于-20℃保存,Western印跡方法檢測SAPK/JNK蛋白表達(dá)及其磷酸化水平。HOMA-IR參照Haffner簡化Matthews的計(jì)算方法〔4,5〕,即HOMA-IR=ln(FPG×FINS/22.5)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS19.0軟件,采用單因素方差分析,方差齊用LSD比較,若方差不齊用Tamhane比較。

    2 結(jié) 果

    2.1 電針對(duì)大鼠IR的影響 與空白組相比,模型組的FPG、FINS、HOMA-IR顯著升高(P<0.01);而電針治療后,電針組的FPG、FINS、HOMA-IR較模型組顯著降低(P<0.01)。見表1。

    2.2 電針對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JNK蛋白的表達(dá)及其磷酸化水平的影響 與空白組比較,模型組的JNK蛋白及其磷酸化水平顯著升高(P<0.01);治療后,電針組的JNK蛋白及其磷酸化水平較模型組顯著降低(P<0.01)。見表2。見圖1。

    表1 各組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR的比較

    與空白組比較:1)P<0.01,與模型組比較:2)P<0.01;下表同

    表2 各組大鼠JNK蛋白及其磷酸化水平比較

    圖1 3組主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JNK及p-JNK蛋白表達(dá)

    3 討 論

    IR與多種代謝異常類疾病的發(fā)病密切相關(guān),而JNK蛋白則在IR形成過程中發(fā)揮重要作用。胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,胰島素與靶細(xì)胞表面的胰島素受體結(jié)合,使胰島素受體β亞基酪氨酸激酶發(fā)生磷酸化而被激活,激活后的酪氨酸激酶能磷酸化IRS,進(jìn)而激活磷脂酰肌醇3-激酶活性以調(diào)節(jié)不同的代謝通路〔6〕。IRS是胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的重要組成部分和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。JNK是MAPK超家族中的一員,屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。JNK被激活后,能引起IRS-1第307位絲氨酸磷酸化,使IRS-1對(duì)胰島素信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)起負(fù)向調(diào)節(jié),減弱機(jī)體組織對(duì)胰島素的敏感性〔7〕。在2型糖尿病患者和糖尿病、非酒精性肝炎等多種代謝異常疾病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中,均能發(fā)現(xiàn)其組織中的JNK活性明顯升高。而無論是通過JNK結(jié)構(gòu)域反義多肽序列抑制JNK蛋白活化、JNK基因敲除,還是RNAi技術(shù)沉默JNK基因的表達(dá),均能發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型組織胰島素敏感性明顯提高,IR狀態(tài)顯著改善〔8〕。IR在傳統(tǒng)中醫(yī)理論中認(rèn)為其病機(jī)乃 “脾腎兩虛、痰瘀阻絡(luò)”,治療原則為標(biāo)本兼治,治法當(dāng)培補(bǔ)脾腎、祛痰化瘀通絡(luò)。故選取足三里、內(nèi)關(guān)、三陰交、腎俞穴為主穴治療。足三里是足陽明胃經(jīng)中五腧穴之合穴且為胃之下合穴,能健脾化痰,補(bǔ)益中氣;內(nèi)關(guān)為手厥陰心包經(jīng)的絡(luò)穴,與三焦經(jīng)相通,能理臟腑之氣機(jī);三陰交為足厥陰肝、足太陰脾、足少陰腎三條陰經(jīng)的交會(huì)穴,聯(lián)絡(luò)三條經(jīng)絡(luò)之氣血,能調(diào)補(bǔ)肝腎,健脾益氣,疏經(jīng)通絡(luò)。腎俞是足太陽膀胱經(jīng)中腎之背俞穴,能補(bǔ)先天之腎氣。且其中足三里、三陰交、內(nèi)關(guān)三穴是靳瑞教授在臨床上治療糖尿病、肥胖等代謝異常疾病有顯著療效的經(jīng)驗(yàn)組穴。諸穴標(biāo)本兼治,共奏“培補(bǔ)脾腎、祛痰化瘀通絡(luò)”之功。

    電針改善IR的內(nèi)在機(jī)制可能與其干預(yù)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),針刺胰島素抵抗鼠,其骨骼肌IRS-1、IRS-2的表達(dá)增多,且骨骼肌PI3K-p85α mRNA及其蛋白的表達(dá)被抑制,而PI3K的活性增強(qiáng);同時(shí)IR鼠骨骼肌中phospho-PKCζ/λ mRNA和Akt2 mRNA的表達(dá)亦有增加,從而改善大鼠骨骼肌的IR狀態(tài)〔9,10〕。亦有研究表明,電針通過干預(yù)IR大鼠骨骼肌JNK蛋白的表達(dá),降低JNK的活性,減少胰島素受體底物磷酸化,從而改善IR狀態(tài)〔11〕。近年來,作為胰島素的重要靶器官之一的血管內(nèi)皮細(xì)胞備受關(guān)注,關(guān)于針刺改善血管內(nèi)皮細(xì)胞IR的研究也日益增多,如陳婧〔12〕通過針刺自發(fā)性IR模型——OLETF大鼠,觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞與IR的變化發(fā)現(xiàn),針刺干預(yù)下調(diào)了IR模型大鼠TNF-α的表達(dá),同時(shí)抑制MAPK-P38信號(hào)通路的激活,從而進(jìn)一步降低TNF-α的表達(dá),使胰島素受體的活性增強(qiáng),機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性亦有增強(qiáng)。為進(jìn)一步完善其作用機(jī)制,結(jié)合以上研究,考慮電針改善血管內(nèi)皮IR是否與JNK蛋白有關(guān)。 本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明電針能有效改善實(shí)驗(yàn)大鼠IR狀態(tài),再次驗(yàn)證了既往的研究結(jié)果。高脂飲食喂養(yǎng)大鼠,經(jīng)多種途徑激活了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的JNK,使JNK蛋白表達(dá)及其磷酸化水平明顯增加,從而干預(yù)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路,引起大鼠IR。電針治療能調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞JNK蛋白表達(dá)及其磷酸化水平,使其降至正常水平,從而改善IR大鼠的IR狀態(tài),增強(qiáng)IR大鼠胰島素的敏感性。

    1 陳春紅,傅向華.胰島素抵抗與冠心病的關(guān)系及其機(jī)制的研究進(jìn)展〔J〕.河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006;23(2):47.

    2 Sharfi H,Eldar-Finkelman H.Sequential phosphorylation of insulin receptor substrate-2 by glycogen synthase kinase-3 and c-Jun NH2-terminal kinase plays a role in hepatic insulin signaling〔J〕.Am J Physiol Endocrinol Metab,2008;294(2):E307-15.

    3 王靜芝,王 華,周煥嬌,等.電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠下丘腦IRS-2和Akt2 mRNA表達(dá)的影響〔J〕.中華中醫(yī)藥雜志,2014;10:3243-6.

    4 Matthews DR,Hosker JP,Rudenski AS,etal.Homeostasis model assessment:insulin resistance and beta-cell function from fasting plasma glucose and insulin concentrations in man〔J〕.Diabetologia,1985;28(7):412-9.

    5 Haffner SM,Kennedy E,Gonzalez C,etal.A prospective analysis of the HOMA model.The Mexico City Diabetes Study〔J〕.Diabetes Care,1996;19(10):1138-41.

    6 Yang R,Trevillyan JM.c-Jun N-terminal kinase pathways in diabetes〔J〕.Int J Biochem Cell Biol,2008;40(12):2702-6.

    7 趙 斌.JNK通過抑制胰島素信號(hào)通路介導(dǎo)了高糖和軟脂酸誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡〔D〕.上海:上海交通大學(xué),2008.

    8 Hirosumi J,Tuncman G,Chang L,etal.A central role for JNK in obesity and insulin resistance〔J〕.Nature,2002;420(3):333-6.

    9 張 梁,易 瑋.針刺對(duì)胰島素抵抗模型大鼠骨骼肌胰島素受體底物和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015;(4):699-704.

    10 張 梁.針刺對(duì)胰島素抵抗模型大鼠干預(yù)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究〔D〕.廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2010.

    11 唐思詩,唐念珍,唐成林,等.電針刺激對(duì)胰島素抵抗大鼠骨骼肌ERK及JNK蛋白表達(dá)的影響〔J〕.實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2015;30(4):268-70.

    12 陳 婧.針剌對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管內(nèi)皮MAPK-P38信號(hào)通路的影響〔D〕.廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2015.

    〔2016-07-26修回〕

    (編輯 曲 莉)

    Effect of electroacupuncture on the expression of JNK protein in aorta of rats with high fat induced insulin resistance

    ZHANG Hong-Tao,LAN Dan-Chun,LI ZHi-Xing,et al.

    Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510405,Guangdong,China

    Objective To investigate the effect of electroacupuncture(EA)on the expression of JNK protein in aorta of rats with high fat induced insulin resistance.Methods 24 male SD rats were randomly divided into blank,model and EA groups,with 8 rats in each group.Rats in blank group were fed with normal diet,rats in model and EA groups were fed with high fat diet.After 8 weeks,rats in EA group were applied to bilateral Neiguan(PC6),Zusanli(ST36),Sanyinjiao(SP6)and Shenshu(BL23)for 4 weeks.Needles in Zusanli(ST36),Sanyinjiao(SP6)were connected with EA.At the end of the treatment,glucose oxidase method and ELISA were used to detect the fasting plasma glucose(FPG),fasting serum insulin(FINS)and homeostasis model assessment-insulin resistance(HOMA-IR)was calculated.The expression of JNK protein and the phosphorylation protein were determined by using Western blot.Results Compared with model group,the FPG,FINS and HOMA-IR in the EA group were significantly decreased(P<0.01).After treatment,the FPG,FINS and HOMA-IR in the EA group were significantly lower than those of model group(P<0.01)and the expression of p-JNK/JNK of rats in EA group was significantly decreased than that of model group(P<0.01).Conclusions EA could improve insulin sensitivity of rats with high fat induced insulin resistance,which might be related to regulating the expression of JNK protein and its phosphorylation level.

    Electroacupuncture;Insulin resistance;JNK protein

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81273845)

    易 瑋(1966-),女,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事針灸治療代謝性疾病研究。

    張弘弢(1992-),男,在讀碩士,主要從事針灸治病機(jī)制研究。

    R245.31+1

    A

    1005-9202(2016)21-5220-03;

    10.3969/j.issn.1005-9202.2016.21.002

    1 深圳市中醫(yī)院 2 廣東省中醫(yī)院

    猜你喜歡
    高脂電針磷酸化
    高脂血標(biāo)本對(duì)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目的干擾及消除對(duì)策
    ITSN1蛋白磷酸化的研究進(jìn)展
    運(yùn)動(dòng)降低MG53表達(dá)及其在緩解高脂膳食大鼠IR中的作用
    MAPK抑制因子對(duì)HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核轉(zhuǎn)位的影響
    高脂飲食誘導(dǎo)大鼠生精功能障礙
    電針改善腦卒中患者膝過伸的效果
    低頻電針治療多囊卵巢綜合征30例
    電針“遠(yuǎn)心”穴治療心腎不交型失眠療效觀察
    味精與高脂日糧對(duì)生長豬胴體性狀與組成的影響
    組蛋白磷酸化修飾與精子發(fā)生
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:59:01
    99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 身体一侧抽搐| 国产1区2区3区精品| 在线看三级毛片| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 成人特级黄色片久久久久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产av又大| 视频区欧美日本亚洲| 2021天堂中文幕一二区在线观| 香蕉久久夜色| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲成av人片免费观看| 哪里可以看免费的av片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99国产精品99久久久久| 热99re8久久精品国产| 岛国在线免费视频观看| 久久中文看片网| 国产精品影院久久| 在线a可以看的网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美午夜高清在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美中文综合在线视频| 亚洲成av人片免费观看| 欧美午夜高清在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久九九热精品免费| 午夜福利免费观看在线| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品免费视频内射| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜老司机福利片| 国产成人精品无人区| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产欧美人成| 免费看a级黄色片| 久久国产精品影院| 免费在线观看日本一区| 中出人妻视频一区二区| 午夜福利在线观看吧| 波多野结衣高清作品| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品99久久99久久久不卡| 日日爽夜夜爽网站| 欧美3d第一页| 一边摸一边抽搐一进一小说| 五月玫瑰六月丁香| 国产三级中文精品| 色老头精品视频在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产三级黄色录像| avwww免费| 老司机靠b影院| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国内精品久久久久精免费| 亚洲免费av在线视频| 男插女下体视频免费在线播放| 丝袜美腿诱惑在线| 丰满人妻一区二区三区视频av | 国产精品久久久人人做人人爽| 搡老岳熟女国产| 此物有八面人人有两片| 国内精品一区二区在线观看| 欧美大码av| 精品一区二区三区四区五区乱码| 91av网站免费观看| 国产91精品成人一区二区三区| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 天堂影院成人在线观看| 久久久国产成人免费| 久久中文字幕人妻熟女| 丰满人妻一区二区三区视频av | 国产欧美日韩精品亚洲av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一区二区三区激情视频| 久久精品国产综合久久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国内精品久久久久久久电影| 日韩高清综合在线| 亚洲九九香蕉| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产在线观看jvid| 999精品在线视频| 男男h啪啪无遮挡| 天堂影院成人在线观看| 很黄的视频免费| 中国美女看黄片| 精品免费久久久久久久清纯| 十八禁网站免费在线| av天堂在线播放| 日韩精品中文字幕看吧| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美黑人巨大hd| 精品久久久久久久末码| 69av精品久久久久久| 一a级毛片在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 手机成人av网站| 真人做人爱边吃奶动态| 久久伊人香网站| 国产亚洲欧美98| 成人手机av| 国产成人精品无人区| 最近视频中文字幕2019在线8| 99久久精品热视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久久久久久中文| 在线播放国产精品三级| 中出人妻视频一区二区| av福利片在线| 黄片大片在线免费观看| or卡值多少钱| 精品国产美女av久久久久小说| 午夜影院日韩av| 亚洲成人久久性| av免费在线观看网站| 看黄色毛片网站| 国内精品久久久久精免费| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 1024手机看黄色片| 成人午夜高清在线视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 88av欧美| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲国产欧美网| 国内精品久久久久精免费| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久国产成人免费| 男人的好看免费观看在线视频 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 午夜成年电影在线免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 国产成人aa在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜福利免费观看在线| 黄色视频不卡| 亚洲av成人av| 99热只有精品国产| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品一区av在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精品亚洲一级av第二区| 日本熟妇午夜| 日韩欧美在线乱码| 又黄又粗又硬又大视频| 国内精品一区二区在线观看| 不卡av一区二区三区| 岛国在线观看网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产乱人伦免费视频| 成人国产综合亚洲| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美3d第一页| 免费看日本二区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精华一区二区三区| 又大又爽又粗| 日韩av在线大香蕉| 亚洲国产欧美一区二区综合| 桃红色精品国产亚洲av| 成人手机av| a在线观看视频网站| 在线观看午夜福利视频| 老鸭窝网址在线观看| 色播亚洲综合网| 久久精品成人免费网站| 久久九九热精品免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 黄片大片在线免费观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久国产成人免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲国产精品久久男人天堂| www国产在线视频色| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 成人国语在线视频| 99久久综合精品五月天人人| 欧美另类亚洲清纯唯美| www.熟女人妻精品国产| 色av中文字幕| 午夜成年电影在线免费观看| 级片在线观看| 免费在线观看日本一区| 精品高清国产在线一区| 午夜福利18| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 午夜两性在线视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 中文亚洲av片在线观看爽| 一区二区三区激情视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美黑人精品巨大| 午夜免费观看网址| 国产91精品成人一区二区三区| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲国产欧美人成| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 精品国产乱码久久久久久男人| 两个人视频免费观看高清| 两个人视频免费观看高清| 日韩高清综合在线| 国产麻豆成人av免费视频| 两人在一起打扑克的视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 看免费av毛片| 亚洲专区字幕在线| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲美女黄片视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲五月天丁香| xxxwww97欧美| 国产精品 欧美亚洲| 丁香六月欧美| 欧美日韩国产亚洲二区| 免费无遮挡裸体视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲欧美日韩无卡精品| 色综合亚洲欧美另类图片| 九色成人免费人妻av| 国产伦人伦偷精品视频| 在线观看午夜福利视频| 午夜老司机福利片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 亚洲熟女毛片儿| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲,欧美精品.| 视频区欧美日本亚洲| 国产成人精品久久二区二区91| 久久性视频一级片| 首页视频小说图片口味搜索| 制服人妻中文乱码| 韩国av一区二区三区四区| av免费在线观看网站| av天堂在线播放| 欧美黄色片欧美黄色片| 我要搜黄色片| 日韩大码丰满熟妇| 久久这里只有精品19| √禁漫天堂资源中文www| 看黄色毛片网站| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久99热这里只有精品18| 亚洲中文av在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产亚洲欧美98| 黑人欧美特级aaaaaa片| 不卡av一区二区三区| 三级国产精品欧美在线观看 | 一区二区三区高清视频在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成年免费大片在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品国产高清国产av| ponron亚洲| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲黑人精品在线| 久久这里只有精品19| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品福利观看| 男女午夜视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美一级毛片孕妇| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 久久国产乱子伦精品免费另类| www.999成人在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美日韩福利视频一区二区| 中文字幕最新亚洲高清| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产精品久久视频播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 全区人妻精品视频| 在线观看一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 好男人在线观看高清免费视频| 国产av一区在线观看免费| 亚洲最大成人中文| 日韩欧美国产一区二区入口| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品久久视频播放| 国产v大片淫在线免费观看| 中文字幕高清在线视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 免费看美女性在线毛片视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产97色在线日韩免费| 国产精品野战在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一级作爱视频免费观看| 一本精品99久久精品77| 中文字幕av在线有码专区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久99热这里只有精品18| 黄频高清免费视频| 无人区码免费观看不卡| 91老司机精品| 欧美精品亚洲一区二区| 国产不卡一卡二| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜激情福利司机影院| 免费在线观看日本一区| 一区二区三区激情视频| 久久天堂一区二区三区四区| 精品久久久久久久末码| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色毛片三级朝国网站| 国产午夜福利久久久久久| 宅男免费午夜| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产成人啪精品午夜网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产亚洲精品第一综合不卡| or卡值多少钱| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲男人天堂网一区| 黄片大片在线免费观看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| av视频在线观看入口| 欧美极品一区二区三区四区| www日本在线高清视频| 一级a爱片免费观看的视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲免费av在线视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩av在线大香蕉| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲国产精品合色在线| 日本 av在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品国产亚洲在线| 亚洲男人天堂网一区| 欧美色视频一区免费| 免费在线观看日本一区| 精品电影一区二区在线| 久久久国产精品麻豆| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日韩欧美在线乱码| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| www国产在线视频色| 欧美激情久久久久久爽电影| 身体一侧抽搐| 国产av一区二区精品久久| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 69av精品久久久久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 又紧又爽又黄一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲人与动物交配视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 午夜免费激情av| 国产99久久九九免费精品| 日本免费一区二区三区高清不卡| a级毛片a级免费在线| 成年免费大片在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 精华霜和精华液先用哪个| 男女视频在线观看网站免费 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 在线看三级毛片| 欧美一级a爱片免费观看看 | 亚洲精华国产精华精| 人人妻人人看人人澡| 国产又色又爽无遮挡免费看| 无人区码免费观看不卡| 久久久久久久久中文| 日韩欧美精品v在线| 成人午夜高清在线视频| 在线播放国产精品三级| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产97色在线日韩免费| 亚洲av五月六月丁香网| 久久久久久久久久黄片| 久99久视频精品免费| 欧美乱色亚洲激情| 99久久精品热视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产亚洲精品av在线| 99re在线观看精品视频| 日韩高清综合在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲自拍偷在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成人欧美大片| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品 国内视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日本五十路高清| 免费人成视频x8x8入口观看| 99热这里只有是精品50| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 日韩欧美国产在线观看| 91字幕亚洲| 岛国在线免费视频观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久久久九九精品二区国产 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲国产精品成人综合色| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久久亚洲av毛片大全| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 老汉色∧v一级毛片| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 老司机靠b影院| 51午夜福利影视在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品人妻1区二区| 免费看十八禁软件| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产真实乱freesex| 99国产精品一区二区三区| 黄片小视频在线播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 视频区欧美日本亚洲| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品综合久久久久久久免费| 一夜夜www| 日韩大尺度精品在线看网址| 在线视频色国产色| 99精品久久久久人妻精品| 日韩精品中文字幕看吧| 黄色视频不卡| 欧美极品一区二区三区四区| 999精品在线视频| 精品免费久久久久久久清纯| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久国产乱子伦精品免费另类| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产亚洲精品一区二区www| 在线免费观看的www视频| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美日韩黄片免| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲人成电影免费在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| a级毛片a级免费在线| 正在播放国产对白刺激| 午夜福利18| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日本三级黄在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精华一区二区三区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| a级毛片a级免费在线| 制服人妻中文乱码| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一进一出抽搐动态| 午夜两性在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 成人欧美大片| 久久天堂一区二区三区四区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产一级毛片七仙女欲春2| 大型av网站在线播放| 亚洲成av人片在线播放无| 国产高清视频在线观看网站| 校园春色视频在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久九九热精品免费| 老司机在亚洲福利影院| 黄色视频,在线免费观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 两个人免费观看高清视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 狠狠狠狠99中文字幕| 免费一级毛片在线播放高清视频| 18禁国产床啪视频网站| 91麻豆av在线| 国产男靠女视频免费网站| 国产av又大| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人精品无人区| 中文资源天堂在线| 国产一区二区激情短视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 国内揄拍国产精品人妻在线| 最新在线观看一区二区三区| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人影院久久av| 曰老女人黄片| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 99在线人妻在线中文字幕| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲 国产 在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产亚洲精品av在线| 久久久久久久午夜电影| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久伊人香网站| 在线观看一区二区三区| 久久草成人影院| 亚洲国产精品999在线| 精品久久久久久成人av| 国产精品av视频在线免费观看| 国产人伦9x9x在线观看| 久久中文看片网| 国产久久久一区二区三区| 成人三级黄色视频| 两人在一起打扑克的视频| 午夜福利在线在线| 日本一区二区免费在线视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久九九热精品免费| 国产午夜福利久久久久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 一级黄色大片毛片| 国产精品久久视频播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费搜索国产男女视频| 亚洲av五月六月丁香网| cao死你这个sao货| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲一区二区三区色噜噜| 香蕉国产在线看| 女人被狂操c到高潮| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 99热6这里只有精品| 婷婷精品国产亚洲av在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美黑人巨大hd| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成年版毛片免费区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产成人影院久久av| 精品国产亚洲在线|