杜麗清 帥希祥 涂行浩 張 明
(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所,廣東 湛江 524091)
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水劑法提取澳洲堅果油的化學(xué)成分及其抗氧化活性研究
杜麗清 帥希祥 涂行浩 張 明
(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所,廣東 湛江 524091)
采用水劑法從烘干的澳洲堅果仁中提取仁油,先對其基本理化性質(zhì)進行分析,再通過紅外、氣相和液相色譜法對堅果油的紅外特性、脂肪酸組成、生育酚、磷脂、甾醇進行分析,并通過測定其氧化誘導(dǎo)時間和清除DPPH自由基的能力來綜合評價澳洲堅果油的抗氧化能力。結(jié)果表明:水劑法提取的澳洲堅果油的過氧化值、酸價、碘值、皂化值、折光率、水分及揮發(fā)物含量分別為0.59 mmoL/kg、0.28 mg KOH/g、74.21 g/100 g、198.78 mg KOH/g、1.466 8、0.36%;紅外譜圖顯示澳洲堅果油具有堅果油的特征吸收;脂肪酸分析發(fā)現(xiàn)其不飽和脂肪酸含量為83.45%,其中棕櫚油酸和油酸含量分別為17.25%和61.44%;甾醇含量為55.51 mg/100 g;總酚酸含量為31.87 mg/100 g;磷脂和生育酚均未檢出;澳洲堅果油的氧化誘導(dǎo)時間為11.44 h,其清除DPPH自由基的能力達89.84%,具有良好的抗氧化能力。
澳洲堅果油;水劑法;化學(xué)組成;抗氧化
澳洲堅果(MacadamiaternifoliaF.Muell.)別名澳洲核桃、夏威夷果等,屬山龍眼科澳洲堅果屬多年生常綠喬木[1-3]。20世紀(jì)60~70年代開始引入中國[3],目前在中國廣東、廣西、云南及貴州等地均有種植[4]。澳洲堅果具有含油量高(脂肪含量高達78%以上)、營養(yǎng)豐富、香脆可口等特點[5-6],而且其不含膽固醇,飽和脂肪酸含量低,單不飽和脂肪酸超過70%,可降低患心臟病的風(fēng)險[7]。
目前,植物提油方法主要有高溫壓榨法、低溫冷榨法、有機溶劑萃取法、超臨界流體萃取法、超聲波輔助提取法和水劑法等[8]。其中,水劑法是利用種仁中的非油成分對油與水親和力的差異,同時利用油水比重不同而將油脂與蛋白質(zhì)等分離出來的方法[9],該法操作條件比較溫和,提取率高,蛋白變性程度較低,具有簡單、安全可靠和經(jīng)濟的特點[10]。范曉波[11]對水劑法提取澳洲堅果油的工藝進行了研究,發(fā)現(xiàn)該方法的提油率達79.3%;黃宗蘭等[10]也研究了水劑法對澳洲堅果油的提取工藝,發(fā)現(xiàn)該方法的提油率達67.5%,同時對澳洲堅果油的過氧化值和酸價進行了測定;然而對于水劑法提取的澳洲堅果油的化學(xué)組成與抗氧化活性,國內(nèi)外還未見報道。
本試驗擬以烘干澳洲堅果仁為原料,采用水劑法提取澳洲堅果油,對其主要的理化性質(zhì)進行分析,并研究其脂肪酸組成、生育酚、磷脂、甾醇等化學(xué)組成,以及澳洲堅果油的抗氧化活性,旨在為水劑法提取的澳洲堅果油的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1.1 材料與試劑
澳洲堅果:鮮果,中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所科研基地;
沒食子酸(99%)、抗壞血酸(99.99%)、生育酚混標(biāo)(α、β、γ、δ)(98%)、37種脂肪酸甲酯混標(biāo)、溴化鉀(99.99%)、DPPH(≥97%)、膽甾烷醇(>99%)、磷脂酰膽堿(>99%)、磷脂酰乙醇胺(>99%)、磷脂酰肌醇(>99%):標(biāo)準(zhǔn)品,阿拉丁化學(xué)試劑有限公司;
福林酚、碳酸鈉、甲醇、無水乙醇、正己烷、異丙醇、氫氧化鉀、碘化鉀等:分析純,國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
1.2 儀器與設(shè)備
分析天平:AR224CN型,奧康斯儀器有限公司;
高速離心機:LXJ-IIB型,上海安亭科學(xué)儀器廠;
冰箱:BCD-539WT型,青島海爾股份有限公司;
恒溫水浴鍋:HH-4型,江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司;
手動可調(diào)量程單道移液器:10~1 000 μL,德國Eppendorf公司;
高速冷凍離心機:ST40型,賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
紫外—可見分光光度計:UV2700型,島津企業(yè)管理(中國)有限公司;
氣相色譜:7890A型,安捷倫科技(上海)有限公司;
液相色譜:1260型,安捷倫科技(上海)有限公司;
油脂氧化穩(wěn)定性分析儀:892型,瑞士萬通中國有限公司。
1.3 方法
1.3.1 澳洲堅果油的提取 稱取100 g干燥的澳洲堅果仁(采用梯度升溫鼓風(fēng)干燥法:澳洲堅果仁先在50 ℃鼓風(fēng)干燥8 h,再在65 ℃下鼓風(fēng)干燥48 h,每隔8 h對果仁翻動一次,即得到干燥的澳洲堅果仁),粉碎,置于1 000 mL的燒杯中,加入400 mL的蒸餾水,在室溫下磁力攪拌1 h,4 800 r/min離心20 min,用膠頭滴管吸取上層油,乳化層轉(zhuǎn)入離心管中,于-20 ℃冰箱中冷凍12 h,取出后于40 ℃水浴中加熱2 h,4 800 r/min離心20 min,取油相[10-11],備用。
1.3.2 甾醇含量測定 參考文獻[12]。
1.3.3 磷脂含量測定 按NY/T 1798—2009《植物油脂中磷脂組分含量的測定》的高效液相色譜法執(zhí)行。
1.3.4 VE含量測定 參照文獻[13]。
1.3.5 理化指標(biāo)的測定 參照文獻[14]測定澳洲堅果油的酸值、過氧化值、皂化值、碘值、折光率、水分及揮發(fā)物含量。
1.3.6 脂肪酸組成分析 參照ISO 12966-2-2011修改如下:采用2 moL/L的氫氧化鉀甲醇溶液衍生成脂肪酸甲酯,通過氣相色譜來測定。Agilent 7890A氣相色譜采用氫火焰檢測器和BPX毛細(xì)管柱(30 m×0.22 mm×0.25 μm),載氣:N2,流速:1.0 mL/min,升溫程序:初始溫度60 ℃,保持1 min,后以10 ℃/min 的速度升至170 ℃,繼續(xù)以3 ℃/min 的速度升至230 ℃,在此溫度下保持15 min。進樣口溫度:225 ℃,檢測器溫度:250 ℃。每個脂肪酸是通過與脂肪酸甲酯標(biāo)品的保留時間比對來鑒定,且各自的含量是以占總脂肪酸的百分比表示。
1.3.7 傅里葉紅外光譜分析 在紅外燈的照射下,將干燥的KBr粉末置于瑪瑙研缽中研磨,再擠壓成平整透明的小圓塊。在小圓塊中心滴加10 μL澳洲堅果油,采用Nicolet 5700傅里葉紅外光譜儀, 在4 cm-1的分辨率下重復(fù)掃描128次,光譜掃描范圍為4 000~400 cm-1,用Ominic 7.2軟件采集紅外光譜數(shù)據(jù),并用Origin 8.0軟件繪制紅外光譜曲線[15]。
1.3.8 總酚酸含量的測定
(1) 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密稱取0.100 0 g沒食子酸,用10.00 mL無水乙醇溶解,用去離子水定容至100 mL,備用。分別移取上述溶液1.00,0.50,0.20,0.10,0.05 mL到10 mL容量瓶中,用去離子水定容。從上述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別移取0.20 mL至10.00 mL比色管中,再分別加入1.00 mL福林酚試劑(0.1 moL/L)和0.80 mL去離子水,混勻,室溫下靜置5 min,然后加入1.00 mL碳酸鈉溶液(7.5%),混勻。將上述溶液室溫下避光反應(yīng)1 h后,以去離子水為空白參比,在760 nm波長處測定吸光度。以沒食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2) 澳洲堅果油樣品測定:準(zhǔn)確稱取5.000 g澳洲堅果油于25 mL容量瓶中,用三氯甲烷溶解并定容至刻度。準(zhǔn)確吸取0.20 mL上述溶液于10 mL比色管中,按1.3.8(1)的方法測定,在760 nm處測定吸光值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算澳洲堅果油中總酚酸的含量(以沒食子酸計)。
1.3.9 澳洲堅果油氧化穩(wěn)定性分析 采用892型Rancimat油脂氧化酸敗儀測定澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性。測定條件:油樣用量3.0 g,溫度 120 ℃,空氣流速10 L/h[16]。
1.3.10 抗氧化活性的測定 以澳洲堅果油清除DPPH自由基的能力表示。采用無水乙醇將DPPH配制成2.0×10-4mol/L的溶液備用。測定時,在試管中依次加入2.0 mL DPPH和2.0 mL無水乙醇,混勻3 min后,用1 cm比色皿在517 nm波長處測吸光度,記為A0;加入2.0 mL DPPH 溶液和2.0 mL提取液混勻后測定吸光度,記為A1;以無水乙醇調(diào)零。油脂樣品質(zhì)量濃度設(shè)置5個梯度:100.0%,50.0%,25.0%,12.5%,5.0%,2.5%。每一吸光度平行測定3次,取其平均值。按式(1)計算清除率[17-18]。
(1)
式中:
c——DPPH清除率,%;
A0——空白樣品的吸光值;
A1——樣品的吸光值。
樣液的制備:① 原樣:稱取5.000 g澳洲堅果油于25 mL容量瓶中,用三氯甲烷定容至刻度線,備用;② 極性組分:稱取5.000 g澳洲堅果油于15 mL離心管中,用甲醇提取3次,收集甲醇層定容至25 mL容量瓶,備用;③ 非極性組分:提取極性組分后剩余的油脂用三氯甲烷定容至25 mL容量瓶,備用。
1.4 統(tǒng)計分析
所有試驗重復(fù)進行3次,試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行分析,結(jié)果表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差,作圖采用origin 8.0軟件。
2.1 水劑法提取澳洲堅果油的主要理化性質(zhì)分析
由表1可知,水劑法提取的澳洲堅果油的酸價、過氧化值、皂化值、碘值、折光率、水分及揮發(fā)物含量分別為(0.280 0±0.005 4) mg KOH/g、(0.59±0.08) mmol/kg、(198.78±2.01) mg KOH/g、(74.21±1.36) g/100 g、1.466 8和0.36%。過氧化值和酸價均符合國家食用油標(biāo)準(zhǔn)(GB 2716—2005)規(guī)定的酸價(≤3 mg KOH/g)和過氧化值(≤9.85 mmoL/kg)的范圍,表明水劑法提取的澳洲堅果油具有較好的品質(zhì);碘值較低說明澳洲堅果油是一種良好的不干性油,皂化值較高說明澳洲堅果油脂肪酸分子量較小,親水性更強,更適合用做化妝品原料;水分及揮發(fā)物含量偏高,可能是水劑法提取過程中殘留了一部分水分。同時這些值與黃宗蘭等[10](過氧化值未檢出、酸價0.23 mg KOH/g、碘值73.8 g/100 g、皂化值200.2 mg KOH/g)和范曉波[11](折光率1.477 0、碘值73 g/100 g、皂化值202.5 mg KOH/g)研究水劑法提取澳洲堅果油和許良[19]24研究亞臨界丁烷萃取(過氧化值0.47 mmol/kg、酸價0.14 mg KOH/g、碘值68.3 g/100 g、皂化值191.8 mg KOH/g)澳洲堅果的理化性質(zhì)是非常相似的。
表1 水劑法提取澳洲堅果油的主要理化性質(zhì)
從表1中還可以看出,水劑法提取的澳洲堅果油的氧化誘導(dǎo)時間為(11.44±0.27) h。有研究[19]25表明,亞臨界萃取、正己烷萃取、冷榨和熱榨澳洲堅果油的氧化誘導(dǎo)時間(120 ℃)分別為8.74,8.83,6.04,11.22 h。與其它提取工藝相比,水劑法提取的澳洲堅果油氧化誘導(dǎo)時間更長,說明水劑法提取澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性更好,可能是水劑法提取過程中更多的脂溶性抗氧化物質(zhì)被保留在澳洲堅果油中。
2.2 水劑法提取澳洲堅果油的活性成分分析
澳洲堅果油中活性成分包括甾醇、磷脂、VE、酚酸類物質(zhì)、亞麻酸、亞油酸、二十二碳六烯酸(DHA)等,本試驗采用氣相和液相色譜法對油脂中常見的活性物質(zhì)—甾醇、磷脂和VE進行分析,結(jié)果見表2。由表2可知,甾醇含量為(55.51±0.21) mg/100 g,然而磷脂(檢出限0.75 mg/g)和VE(檢出限2 mg/kg)均未檢出,這與前人研究的結(jié)果是非常相似的:Fourie等[20]研究澳洲堅果中的生育酚,發(fā)現(xiàn)與美國山胡桃和杏仁相比,其α-生育酚和δ-生育酚的含量較低(1.8 mg/kg);Kaijser等[21]研究發(fā)現(xiàn)了澳洲堅果油中幾乎不含生育酚;Wall[22]對7個不同品種的澳洲堅果油的生物活性成分進行研究,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)品種的澳洲堅果油中幾乎不含生育酚,但卻含有大量的生育三烯酚和角鯊烯;生育三烯酚比生育酚含有更多的雙鍵,更易淬滅自由基反應(yīng),可能增加澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性,這與前面研究發(fā)現(xiàn)澳洲堅果油的氧化誘導(dǎo)時間較長是相對應(yīng)的,推測水劑法提取的澳洲堅果油中可能也含有大量的生育三烯酚。并且Kaijser等[21]也對新西蘭地區(qū)的澳洲堅果油中甾醇含量進行分析,共鑒定出4種甾醇類,分別為谷甾醇、5-燕麥甾醇、菜油甾醇和豆甾醇,其總含量為105~179 mg/100 g,較本試驗分析結(jié)果高,這可能與澳洲堅果的產(chǎn)地和品種有較大的關(guān)系。
表2 水劑法提取澳洲堅果油的化學(xué)成分?
? 磷脂檢出限為0.75 mg/g,VE檢出限為2 mg/kg。
同時,從表2也可以看出,水劑法提取得澳洲堅果油中總酚酸含量為(31.87±0.16) mg/100 g,這與Quinn等[23]研究發(fā)現(xiàn)澳洲堅果仁及殼中的總酚酸類物質(zhì)含量是相似的,且分離出4種酚類物質(zhì),同時發(fā)現(xiàn)帶殼壓榨的澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性較純?nèi)蕢赫サ母茫淳珶挶染珶挼母?,這些可能與油中酚類物質(zhì)含量有關(guān)。
2.3 水劑法提取澳洲堅果油的脂肪酸組成
水劑法提取的澳洲堅果油的脂肪酸組成分析氣相色譜圖見圖1,其脂肪酸種類、保留時間及各自所占的比例見表3。
由表3可知,澳洲堅果油中共檢測出19種脂肪酸,以不飽和脂肪酸為主,含量達到83.45%,且主要為棕櫚油酸和油酸,其含量分別為17.25%和61.44%。油酸由于可降低血液總膽固醇和有害膽固醇,卻不降低有益膽固醇[4];同時油酸的充分?jǐn)z取可促進人體鈣、磷、鋅等礦物質(zhì)的吸收,因此澳洲堅果油是一種品質(zhì)較好的植物油。其中單不飽和脂肪酸含量為81.36%,多不飽和脂肪酸含量為2.09%,飽和脂肪酸含量為16.55%。許良[19]26研究亞臨界丁烷萃取的澳洲堅果油脂肪酸組成,共檢測出11種脂肪酸,其中飽和脂肪酸占18.50%,不飽和脂肪酸占81.50%;魏長賓等[24]研究溶劑提取的澳洲堅果油脂肪酸組成,共檢測出10種脂肪酸,且飽和脂肪酸占22.39%,不飽和脂肪酸占77.23%。說明不同提取方法得到的澳洲堅果油的脂肪酸組成存在一定的差異,但水劑法提取的澳洲堅果油中不飽和脂肪酸含量較高,飽和脂肪酸含量較低。此外,Kaijser等[21]研究新西蘭產(chǎn)不同品種的澳洲堅果油脂肪酸發(fā)現(xiàn)單不飽和脂肪酸平均含量為80%,飽和脂肪酸含量為13.2%~17.8%,并且發(fā)現(xiàn)其存在4%左右的異油酸,而本試驗中并未發(fā)現(xiàn)異油酸,可能與澳洲堅果的品種和產(chǎn)地等不同有較大的關(guān)系。
圖1 氣相色譜分析水劑法提取澳洲堅果油的脂肪酸組成譜圖
保留時間/min化合物名稱質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%10.138月桂酸(C12:0)0.05712.825豆蔻酸(C14:0)0.62014.195十五烷酸(C15:0)0.00915.693棕櫚酸(C16:0)8.25616.521棕櫚油酸(C16:1)17.25216.953十七烷酸(C17:0)0.03117.679十七碳一烯酸(C17:1)0.07618.574硬脂酸(C18:0)3.49819.377油酸(C18:1n9c)61.44320.403亞油酸(C18:2n6c)1.64721.564花生酸(C20:0)2.82022.057亞麻酸(C18:3n3)0.11222.358二十碳烯酸(C20:1)2.56325.185山崳酸(C22:0)0.84626.056二十碳三烯酸(C20:3n3)0.23526.263芥酸(C22:1n9)0.02527.390二十三烷酸(C23:0)0.03429.318木焦油酸(C24:0)0.37933.376二十二碳六烯酸(DHA)0.097
2.4 水劑法提取澳洲堅果油的紅外光譜分析
采用傅里葉紅外光譜對水劑法提取的澳洲堅果油結(jié)構(gòu)進行分析,見圖2。圖2中,3 000~2 750 cm-1處吸收帶代表的是—CH3、—CH2、—CH的特征吸收峰,1 750 cm-1處吸收帶代表的是長鏈脂肪酸中羰基、甲酯基、酮類和醛類的特征吸收蜂,1 200 cm-1處吸收帶代表的是不飽和酯的特征吸收峰,1 290~1 040 cm-1處吸收帶代表的是醇類、酯類、醚類、羧酸類和脂肪酸的特征吸收峰,750 cm-1處吸收帶可能與脂肪酸中脂肪族鏈的鏈接順序有關(guān),這與Albuquerque等[25]研究的布荔蒂油和巴巴蘇仁油的紅外光譜圖和Santos等[26]研究的巴西堅果油的紅外光譜是非常相似的。同時,從圖2中可以發(fā)現(xiàn),紅外光譜圖在2 900,1 600,750 cm-1處具有較強吸收,這與Silverstain等[27]和Reda等[28]報道不飽和脂肪酸中雙健的功能基團(C—H和C═O)在2 900,1 600,750 cm-1處具有較強的特征吸收是相吻合的,說明水劑法提取的澳洲堅果油含有大量的不飽和雙健,這也驗證了脂肪酸組分分析的結(jié)果。
圖2 水劑法提取澳洲堅果油的紅外圖譜
2.5 水劑法提取澳洲堅果油的抗氧化活性分析
DPPH自由基的清除能力可以用來綜合評價澳洲堅果油的抗氧化活性。圖3顯示了澳洲堅果原油、極性組分和非極性組分對DPPH自由基的清除能力。由圖3可知,澳洲堅果油對DPPH自由基都有一定的清除能力,且澳洲堅果原油對DPPH自由基的清除能力較極性組分和非極性組分強,同時,隨著澳洲堅果油組分濃度的增加,其清除能力也增強,100%澳洲堅果油的清除能力達到89.84%,極性組分和非極性組分的清除能力分別為65.08%和45.45%,說明水劑法提取的澳洲堅果油具有較強的抗氧化活性。這與Miraliakbari等[29]研究發(fā)現(xiàn)樹堅果油的氯仿/甲醇提取物比正己烷提取物的清除DPPH能力更強是極其相似的;同時,Prado等[30]研究花生油的抗氧化活性,發(fā)現(xiàn)花生油較強的抗氧化活性與其中含有較高的酚類物質(zhì)有關(guān)。因此,澳洲堅果有具有較強的抗氧化活性可能也與其總酚酸、不飽和脂肪酸含量等較高有關(guān)。
圖3 水劑法提取澳洲堅果油的抗氧化活性
研究水劑法提取的澳洲堅果油,發(fā)現(xiàn)其過氧化值、酸價、碘值、皂化值、折光率、水分及揮發(fā)物含量分別為0.59 mmol/kg、0.28 mg KOH/g、74.21 g/100 g、198.78 mg KOH/g、1.466 8、0.36%;傅里葉紅外光譜分析顯示水劑法提取的澳洲堅果油具有堅果油的特征吸收;組分分析發(fā)現(xiàn)其不飽和脂肪酸含量為83.45%,其中棕櫚油酸和油酸含量分別為17.25%和61.44%;甾醇含量為55.51 mg/100 g;總酚酸含量為31.87 mg/100 g;抗氧化活性分析發(fā)現(xiàn)其氧化誘導(dǎo)時間為11.44 h,清除DPPH自由基的能力達89.84%,這說明水劑法提取的澳洲堅果油具有良好的抗氧化能力。與黃宗蘭[10]、范曉波[11]、許良[15]等對澳洲堅果油的研究相比,本研究更全面系統(tǒng)地對水劑法提取的澳洲堅果油的理化指標(biāo)、化學(xué)組成及抗氧化活性進行了研究,這為澳洲堅果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展提供了一條有效的途徑,同時也為水劑法提取的澳洲堅果油的開發(fā)及應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。
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Studied on antioxidant activities and compositions of macadamia nuts oil by aqueous extraction
DULi-qingSHUAIXi-xiangTUXing-haoZHANGMing
(SouthSubtropicalCropsResearchInstitute,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Zhanjiang,Guangdong524091,China)
Extracted kernel oil from dried Macadamia by aqueous method. Firstly, the basic physicochemical properties were analyzed, and then, the infrared characteristics, fatty acid, tocopherol, phospholipids, sterols of macadamia oil were analyzed by the method of IR, GC and HPLC, to determine the oxidation induction time and free radical scavenging capacity to evaluate the antioxidant capacity of macadamia nut oil. The results showed that the peroxide value, acid value, iodine value, saponification value, refractive index,moisture and volatile matter by aqueous extraction of macadamia nut oil were 0.59 mmoL/kg, 0.28 mg KOH/g, 74.21 g/100 g, 198.78 mg KOH/g, 1.466 8, 0.36%, respectively; the infrared spectrum shows that the macadamia nut oil has the characteristic absorption of the nut oil; fatty acid analysis revealed that the content of unsaturated fatty acid was 83.45%, of which the content of oleic acid and oleic acid were 17.25% and 61.44%, respectively; the content of the total phenolic and sterol were 31.87 and 55.51 mg/100 g, respectively, while phospholipids and tocopherol were not detected; the oxidation induction time of macadamia nut oil was 11.44 h, and the ability of free radical scavenging was 89.84%, which had good oxidation resistance.
macadamia nut oil, aqueous extraction, chemical composition, antioxidant
中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金項目(編號:1630062016006)
杜麗清(1976—),男,中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所副研究員,碩士。
E-mail:shuaixixiang1989@163.com
2016—08—26
10.13652/j.issn.1003-5788.2016.10.033