史宗勇 許冬梅 路 超 袁建琴
(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山西 太谷 030801)
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短期喂食轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)雄性大鼠睪丸StAR表達(dá)的影響
史宗勇 許冬梅 路 超 袁建琴
(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山西 太谷 030801)
探討轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)雄性大鼠睪丸類(lèi)固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)mRNA水平和蛋白水平表達(dá)的影響,為轉(zhuǎn)基因大豆的安全性提供科學(xué)依據(jù)。將30只健康雄性離乳SD大鼠隨機(jī)分成兩組,設(shè)GM組喂食含轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆飼料,CK組喂食含非轉(zhuǎn)基因受體大豆(Soybean A5403)飼料,喂食試驗(yàn)飼料30,60,90 d后,各組隨機(jī)處死3只大鼠,針對(duì)雄性主要生殖器官睪丸、附睪進(jìn)行臟器系數(shù)分析;運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠睪丸StAR基因表達(dá)量;蛋白酶聯(lián)免疫反應(yīng)分析大鼠睪丸StAR蛋白含量。喂食30,60,90 d后,解剖觀察大鼠,與CK組相比GM組大鼠睪丸、附睪形態(tài)、顏色正常,大小、器官間比例協(xié)調(diào),大鼠睪丸系數(shù)無(wú)顯著性差異,附睪系數(shù)除30 d處理組(P<0.05)差異顯著外,其它各處理組間t檢驗(yàn)P值均大于0.05,無(wú)顯著性差異;GM組與CK組大鼠相比,StAR基因相對(duì)表達(dá)量、蛋白含量相同處理時(shí)間組間差異不顯著。短期喂食大鼠轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆,雄性大鼠主要生殖器官睪丸、附睪生長(zhǎng)發(fā)育正常,喂食轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠睪丸中StAR基因表達(dá)量、StAR蛋白含量無(wú)明顯影響。關(guān)鍵詞:轉(zhuǎn)基因大豆;大鼠;臟器系數(shù);StAR
轉(zhuǎn)基因作物商品化19年來(lái)種植面積不斷擴(kuò)大,2014年全球28個(gè)國(guó)家種植1.815億 hm2的轉(zhuǎn)基因作物,其中大豆種植面積占轉(zhuǎn)基因作物總面積的一半以上[1]。自轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)誕生以來(lái),生物安全問(wèn)題引起了國(guó)際社會(huì)的激烈爭(zhēng)論,轉(zhuǎn)基因大豆的安全評(píng)價(jià)成為當(dāng)前民眾普遍關(guān)注的科學(xué)問(wèn)題和社會(huì)問(wèn)題。當(dāng)前轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)的主要依據(jù)是國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)制定的轉(zhuǎn)基因食品安全評(píng)價(jià)指南,評(píng)價(jià)內(nèi)容集中在營(yíng)養(yǎng)成分、毒理效應(yīng)和過(guò)敏反應(yīng)三個(gè)方面[2]。關(guān)于毒理學(xué)評(píng)價(jià)的研究主要是通過(guò)動(dòng)物飼喂,圍繞其主要器官的生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)行研究,張力等[3]研究表明飼喂轉(zhuǎn)基因高油酸大豆對(duì)大鼠的器官發(fā)育未出現(xiàn)明顯的有害影響,主要臟器也未見(jiàn)明顯病理學(xué)改變。Qi等[4]采用轉(zhuǎn)基因大豆與傳統(tǒng)大豆喂養(yǎng)大鼠90 d后,在體重、食物消耗量、體重增重以及食物利用率上均無(wú)顯著差異。Appenzeller 等[5]以抗草甘膦大豆356?43為材料對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)的檢測(cè),研究表明轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)也無(wú)顯著性影響。Batista等[6]又對(duì)大豆致敏性進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆組未見(jiàn)顯著差異。此外,蘆春斌等報(bào)道了轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)小鼠生殖系統(tǒng)[7]和雌鼠胚胎發(fā)育[8]無(wú)顯著影響。但尚未見(jiàn)喂食轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)雄性動(dòng)物性激素合成影響的研究。睪酮的合成對(duì)雄性生殖器的發(fā)育及其維持生精功能是至關(guān)重要的。在睪酮的合成過(guò)程中,膽固醇的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是關(guān)鍵步驟[9]。在此過(guò)程中,類(lèi)固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)是調(diào)節(jié)這一過(guò)程的關(guān)鍵因子。Warita等[10]研究發(fā)現(xiàn)小鼠StAR蛋白的缺失會(huì)引起雄性不育,當(dāng)Star基因過(guò)表達(dá)時(shí),睪酮激素顯著性上調(diào),說(shuō)明該基因?qū)π∈笮坌缘陌l(fā)育起至關(guān)重要的作用。睪丸間質(zhì)細(xì)胞中StAR蛋白的表達(dá)與否及其表達(dá)量,勢(shì)必影響睪酮的合成和分泌,繼而影響動(dòng)物的生殖生理活動(dòng)。本研究擬通過(guò)比較飼喂轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆及其親本大豆Soybean A5403配制飼料對(duì)大鼠睪丸組織StAR基因表達(dá)的差異,進(jìn)而探討轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)其生殖系統(tǒng)發(fā)育及睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)分泌功能的影響,旨在為轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)雄性大鼠生殖安全提供新的科學(xué)依據(jù)。
1.1 試驗(yàn)材料、儀器與試劑
1.1.1 試驗(yàn)材料
SD大鼠:由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;
轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆為孟山都GTS40-3-2大豆,非轉(zhuǎn)基因大豆為其親本Soybean A5403大豆。轉(zhuǎn)基因成分經(jīng)農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品成分監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(太原)驗(yàn)證檢測(cè)確認(rèn)。
1.1.2 主要儀器和試劑
電子天平:BS124S型,德國(guó)賽多利斯集團(tuán);
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀:IQ5型,美國(guó)Bio-Rad公司;
移液器:0.1-200 μL系列,德國(guó)Ependorf公司;
臺(tái)式高速冷凍離心機(jī):Neofuge 25R型,香港力康發(fā)展有限公司;
酶標(biāo)儀:ELx808型,美國(guó)伯騰儀器有限公司;
qRT-PCR kit:50 μL反應(yīng)×120次,寶生物工程(大連)有限公司;
STAR酶聯(lián)免疫分析試劑盒:上海酶聯(lián)生物科技有限公司;
DEPC水:100 mL,碧云天生物技術(shù)研究所;
三氯甲烷、異丙醇、無(wú)水乙醇:分析純,天津化學(xué)試劑三廠。
1.1.3 飼料配制 大鼠飼料委托山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工,飼料成分包括玉米(58.9%)、大豆(20%)、小麥(10%)、魚(yú)粉(6%)、骨粉(2%)、酵母(1%)、食鹽(1%)、植物油(0.9%)和蛋氨酸(0.2%),其中試驗(yàn)組飼料用轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆配制,對(duì)照組飼料用Soybean A5403大豆配制,營(yíng)養(yǎng)成分滿(mǎn)足《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分》(GB 14924.3—2010)要求。
1.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 30只健康雄性離乳SD大鼠,常規(guī)飼料喂食1周適應(yīng)環(huán)境后,隨機(jī)分成兩組,設(shè)喂食含轉(zhuǎn)基因大豆飼料大鼠為試驗(yàn)組(GM組),喂食含非轉(zhuǎn)基因大豆飼料大鼠為對(duì)照組(CK組),按試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別喂食30,60,90 d后,各組隨機(jī)處死3只大鼠進(jìn)行試驗(yàn)。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 臟器系數(shù) 喂食30,60,90 d后頸椎脫臼法處死大鼠,稱(chēng)量體重,剪開(kāi)腹腔,分離摘取雙側(cè)睪丸、附睪稱(chēng)重(g),依公式(臟器系數(shù)=臟器重量/大鼠體重)分別計(jì)算大鼠睪丸系數(shù)和附睪系數(shù)。去除睪丸結(jié)締組織被膜,加入一定量pH 7.4的PBS浸泡組織,用液氮迅速冷凍后移至-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2.2 RT-PCR 采用Trizol提取大鼠睪丸組織總RNA。采用RT-PCR試劑盒(TaKaRa公司)按照指南進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。Star基因PCR擴(kuò)增Star-F引物序列為AGTCATCACCCATGAGCTGG;Star-R引物序列為T(mén)TCAGCTCTGATGACACCGC。內(nèi)參基因選用在大鼠各組織、細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)恒定的18SRNA基因,18S-F引物序列:GAAACGGCTACCACATCC;18S-R引物序列:ACCAGACTTGCCCTCCA。
選用25 μL qRT-PCR體系,每個(gè)體系中加入1 μL cDNA,12.5 μL SYBR Premix Ex TaqTMII,上游和下游引物各1.0 μL,ROX reference dye 0.5 μL和水9 μL。每個(gè)樣本設(shè)4個(gè)平行。采用Bio-Rad公司IQ5實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)條件為:95 ℃預(yù)變性10 min; 95 ℃變性5 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸10 s,40個(gè)循環(huán);繪制溶解曲線,95 ℃ 15 s,60 ℃ 1 min,95 ℃ 15 s,0.3 ℃/s。
相同條件下,內(nèi)參18S基因和Star基因在不同的管內(nèi)擴(kuò)增,反應(yīng)結(jié)束后,軟件自動(dòng)導(dǎo)出擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)曲線,溶解曲線和CT值,通過(guò)溶解曲線來(lái)判定RCR反應(yīng)的特異性,根據(jù)熒光曲線的CT值分析計(jì)算得出定量結(jié)果。
1.2.3 STAR蛋白酶聯(lián)免疫分析 取出冷凍保存的睪丸組織,融化后仍然保持2~8 ℃。用預(yù)冷的PBS沖洗去除組織表面殘留血液和雜質(zhì),剪刀剪碎組織稱(chēng)重,按1 g組織加入預(yù)冷的9 mL PBS,冰上3 000 r/min勻漿10 s,重復(fù)3~5次,3 000 r/min離心20 min,取上清分裝(1 mL)備用。然后按大鼠類(lèi)固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白(STAR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書(shū)操作,終止反應(yīng)后15 min內(nèi)上酶標(biāo)儀完成檢測(cè),運(yùn)用GEN5CHS 2.01軟件分析處理檢測(cè)數(shù)據(jù),統(tǒng)計(jì)記錄檢測(cè)結(jié)果。
2.1 轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠睪丸、附睪臟器系數(shù)的影響
解剖觀察大鼠睪丸、附睪形態(tài)、顏色正常,大小、器官間比例協(xié)調(diào)。喂食對(duì)應(yīng)飼料30,60,90 d后計(jì)算臟器系數(shù)結(jié)果顯示,試驗(yàn)組睪丸、附睪臟器系數(shù)略高于或低于對(duì)照組,經(jīng)t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),除30 d處理組附睪系數(shù)(P<0.05)差異顯著外,其它各處理組間P值均大于0.05,無(wú)顯著性差異,見(jiàn)表1。
表1 轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)臟器系數(shù)的影響?
? *表示試驗(yàn)組與對(duì)照組間差異顯著(P<0.05)。
臟器系數(shù)是毒性試驗(yàn)的常用指標(biāo),可以敏感反映受試物對(duì)動(dòng)物臟器的毒性作用,GM組與CK組相比,僅30 d處理組附睪系數(shù)(P<0.05)差異顯著,其它各組間差異均不顯著。董延生等[11]研究表明SD大鼠8~12周齡臟器系數(shù)正常值參考范圍:睪丸0.566~1.043,附睪0.181~0.349;12~24周齡臟器系數(shù)正常值參考范圍:睪丸0.420~0.894,附睪0.169~0.366。飼喂試驗(yàn)飼料30 d后,大鼠處于8~12周齡期間,飼喂試驗(yàn)飼料60,90 d后,大鼠處于12~24周齡期間,分析試驗(yàn)所得臟器系數(shù)數(shù)據(jù),所測(cè)結(jié)果全部處于正常值范圍內(nèi),30 d處理組附睪系數(shù)差異顯著可能是由動(dòng)物個(gè)體差異造成的,且轉(zhuǎn)基因大豆并未造成睪丸與附睪的增生、水腫、充血或萎縮等退行性改變。研究結(jié)果與蘆春斌等[12]喂食轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)子代雄鼠睪丸臟器系數(shù)影響一致。
2.2 轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠睪丸StAR mRNA水平表達(dá)的影響
用RT-PCR方法測(cè)定大鼠相關(guān)基因的表達(dá)量,由圖1可知,擴(kuò)增曲線光滑平穩(wěn),基線平整沒(méi)有引物二聚體產(chǎn)生,指數(shù)區(qū)較明顯,由于多種原因影響擴(kuò)增后期曲線分散,基本呈S型,符合測(cè)定要求。
RT-PCR完成后根據(jù)記錄數(shù)據(jù),在相同模板下,用擴(kuò)增目的基因的CT值減去內(nèi)參基因的CT值,得到目的基因的相對(duì)表達(dá)量ΔCT值,即StAR目的基因相對(duì)于內(nèi)參基因18SRNA的表達(dá)量。分別計(jì)算30,60,90 d轉(zhuǎn)基因飼料飼喂大鼠(GM組)和非轉(zhuǎn)基因飼料飼喂大鼠(CK組)的StAR目的基因、內(nèi)參基因的CT值和StAR目的基因的相對(duì)表達(dá)量,具體ΔCT值見(jiàn)表2。
由表2可知,大鼠內(nèi)參基因18SRNA基因表達(dá)CT數(shù)值個(gè)體間有所差異,但表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定,內(nèi)參基因表達(dá)個(gè)體間差異不顯著,說(shuō)明內(nèi)參基因選擇合理。飼喂試驗(yàn)飼料30 d后,試驗(yàn)大鼠進(jìn)入性成熟期,不同處理時(shí)間組內(nèi)大鼠StAR 基因相對(duì)表達(dá)量有所變化,但同組內(nèi)30 d/60 d、30 d/90 d、60 d/90 d基因表達(dá)t檢驗(yàn)P值均大于0.05,表明性成熟期組內(nèi)大鼠StAR 基因表達(dá)未受時(shí)間影響,差異不顯著,統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表3。
通過(guò)計(jì)算得30,60,90 d飼喂轉(zhuǎn)基因飼料組和非飼喂轉(zhuǎn)基因飼料組StAR 基因相對(duì)表達(dá)量的平均值分別為5.037±0.597,3.963±0.323,4.353±0.648,4.29±0.233,4.757±0.269,5.337±0.579。運(yùn)用方差分析兩組大鼠StAR 基因相對(duì)表達(dá)量,經(jīng)t檢驗(yàn),P值分別為0.175,0.556,0.185,均大于0.05,不同處理時(shí)間GM組與CK組StAR 基因表達(dá)差異不顯著,見(jiàn)圖2。表明試驗(yàn)大鼠StAR 基因表達(dá)未受飼料成分調(diào)節(jié)影響。
圖1 熒光定量擴(kuò)增曲線
處理時(shí)間/d項(xiàng)目GM組CK組目的基因CT值26.1125.9625.8426.4826.1526.2530內(nèi)參基因CT值21.8320.8720.1021.8821.9222.21ΔCT值4.285.095.744.604.234.04目的基因CT值24.9625.1523.9124.7524.7124.1460內(nèi)參基因CT值20.5621.5220.0519.7619.8119.76ΔCT值4.403.633.864.994.904.38目的基因CT值27.0226.9626.9627.5627.6627.5490內(nèi)參基因CT值22.9523.2221.7121.7721.9623.02ΔCT值4.073.745.255.795.704.52
表3 組內(nèi)大鼠不同處理時(shí)間StAR 基因表達(dá)量比較
圖2 目的基因相對(duì)表達(dá)水平
2.3 轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠睪丸StAR蛋白水平表達(dá)的影響
記錄酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品系列數(shù)據(jù),運(yùn)行GEN5CHS 2.01軟件,得到檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖3),生成R2=1的曲線方程y=Y=A×X+B,其中A=0.007 33,B=-0.051 06。
根據(jù)酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果,依試驗(yàn)操作換算,結(jié)果見(jiàn)圖4,喂食轉(zhuǎn)基因大豆30,60,90 d后,GM組大鼠睪丸組織中StAR蛋白含量分別為(0.691±0.039),(0.720±0.013),(0.987±0.130) ng/g,與CK組StAR蛋白含量(0.758±0.028),(0.756±0.024),(0.742±0.094) ng/g相比,t檢驗(yàn)P值分別為0.118,0.130,0.098,均大于0.05,表明喂食轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠睪丸中StAR蛋白含量無(wú)明顯影響。
圖3 StAR檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖4 喂食轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)大鼠睪丸StAR蛋白含量的影響
睪酮是雄性大鼠的主要性激素,在胚胎發(fā)育雄性化、精子生成、雄性性行為激發(fā)與維持以及性腺的發(fā)育等生理過(guò)程中起著重要的作用。睪酮合成在睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體內(nèi)膜上進(jìn)行,而合成原料膽固醇存在于線粒體外,生理?xiàng)l件下膽固醇從線粒體外膜向內(nèi)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)需要StAR蛋白作用于線粒體外膜,介導(dǎo)并促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn),轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白StAR在膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)中起限速作用[13]。研究表明在飼喂含轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆飲料30,60,90 d后,試驗(yàn)組大鼠睪丸組織中StAR基因mRNA水平的表達(dá)與對(duì)照組無(wú)顯著差異,StAR基因蛋白水平的表達(dá)對(duì)應(yīng)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可見(jiàn)短期喂食含轉(zhuǎn)基因成份飼料不會(huì)影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育及其組織器官的功能。Qi等[4]認(rèn)為復(fù)合性狀轉(zhuǎn)基因大豆35?423×40-3-2與非轉(zhuǎn)基因大豆具有同樣的安全性。劉莎莎等[14]也未發(fā)現(xiàn)大豆轉(zhuǎn)基因成分對(duì)肉雞生化指標(biāo)、器官發(fā)育、代謝殘留有不良影響,且劉斌等[15]也報(bào)道轉(zhuǎn)基因豆粕對(duì)嶗山奶山羊生長(zhǎng)性能和肌肉品質(zhì)無(wú)顯著影響。但這類(lèi)研究有其局限性,如Raffaella等[16]研究發(fā)現(xiàn)喂食抗草甘膦大豆的母羊所產(chǎn)的小羊γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶的水平較高,影響了其肝臟和腎臟的細(xì)胞代謝。
試驗(yàn)研究了短期喂食轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆對(duì)雄性大鼠睪丸StAR表達(dá)的影響,結(jié)果表明,喂食轉(zhuǎn)基因大豆未造成雄性大鼠主要生殖器官病理改變,睪丸、附睪生長(zhǎng)發(fā)育正常;試驗(yàn)變量對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞雄性激素合成過(guò)程固醇類(lèi)原料轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)沒(méi)有明顯影響。表明短期飼喂轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆對(duì)試驗(yàn)大鼠無(wú)毒害作用,但隨著對(duì)轉(zhuǎn)基因喂食動(dòng)物的深入研究(檢測(cè)更多的相關(guān)分子),或更長(zhǎng)久地(以年為單位)喂食動(dòng)物轉(zhuǎn)基因飼料是否會(huì)影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育及其組織器官的功能還有待深入研究。本課題組正在對(duì)大鼠雄性激素合成調(diào)控的其它關(guān)鍵基因表達(dá)進(jìn)行研究,以進(jìn)一步探討轉(zhuǎn)基因大豆的食用安全性。
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Effects of short term feeding transgenic soybean on the expression of StAR in rat testis
SHIZong-yongXUDong-meiLUChaoYUANJian-qing
(CollegeofLifeScience,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi030801,China)
The present study was conducted to discuss the effects on genetically modified soybeans on the level of mRNA and protein in StAR gene in male rat, and aimed to provide a scientific basis for the security of transgenic soybeans. Thirty male SD rats were randomly divided into GM group and CK group. The GM group were fed with transgenic Roundup Ready soybean containing CP4-EPSPS gene, and the CK group were fed with non-transgenic soybean. Three rats of every group were killed at 30 d, 60 d and 90 d, respectively. Viscera index (testes and epididymides) was calculated. RT-PCR was used to measure the expression of StAR gene, and ELISA was used to analysis the expression of StAR protein. The morphology and color of testes and epididymides of the GM group and CK group were observed. No significant differences were found in size and testis coefficient. Epididymis coefficient were no significant difference(P>0.05)except 30 d group. The average expression of StAR gene and protein in GM and CK group (30 d 60 d and 90 d) was detected, and no significant differences between the two groups at the same time were found. The results suggested that feeding transgenic soybean for 30 d showed no damages to occurrence of testes and epididymides in rat, and the expression of StAR gene and protein were no difference either.Keywords: GM soybeans; rat; visceral coefficents; StAR
山西省自然科學(xué)基金(編號(hào):2013011028-2);山西省科技攻關(guān)基金(編號(hào):20140311025-3)
史宗勇(1970—),男,山西農(nóng)業(yè)大學(xué)副教授,碩士。
E-mail:zongyongtg@sohu.com
2016-03-01
10.13652/j.issn.1003-5788.2016.10.003