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    陜西衛(wèi)矛無菌萌發(fā)技術(shù)的研究

    2016-12-04 03:06:09河南紅楓種苗股份有限公司鄭州450008
    種子 2016年10期
    關(guān)鍵詞:衛(wèi)矛胚乳子葉

    , , , , (河南紅楓種苗股份有限公司, 鄭州 450008)

    陜西衛(wèi)矛無菌萌發(fā)技術(shù)的研究

    張家勛,張丹,孟偉芳,王東超,何甜甜
    (河南紅楓種苗股份有限公司, 鄭州 450008)

    在無菌條件下觀察不同激素配比、接種時(shí)間、胚乳體積對陜西衛(wèi)矛種子生長情況的影響,研究種子無菌萌發(fā)的誘導(dǎo)因素。結(jié)果表明:培養(yǎng)基為MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 時(shí),生長情況最好;接種時(shí)間為9月10日、9月30日時(shí),發(fā)芽率達(dá)95%以上;胚乳遠(yuǎn)端切除1/4、1/3體積時(shí),出苗順利;轉(zhuǎn)接到MS無激素培養(yǎng)基中,成活率最高,生長最快。

    陜西衛(wèi)矛; 種子; 組培; 激素; 接種時(shí)間; 胚乳

    陜西衛(wèi)矛(EuonymusschensianusMaxim)又名金絲吊蝴蝶,是衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬翅果系,果實(shí)具翅4~5,成熟后為紅色,翅長可達(dá)2.5~3 cm,寬1.5~2 cm,吊在綠葉之間,猶如振翅欲飛的蝴蝶,是觀賞價(jià)值極高的園林樹種[1-3]。然而,陜西衛(wèi)矛種子在自然條件下萌發(fā)率極低,經(jīng)常規(guī)播種試驗(yàn),證明其萌發(fā)率幾乎為0,而經(jīng)過一定濃度的赤霉素、細(xì)胞分裂素等激素處理之后發(fā)芽率依然很低,現(xiàn)在陜西衛(wèi)矛快繁技術(shù)多是以帶芽莖段作為外植體[ 4-6]。目前,園林上多采用絲棉木嫁接的方式進(jìn)行繁殖[7],雖然可以實(shí)現(xiàn)陜西衛(wèi)矛的規(guī)?;敝?,但嫁接屬于無性繁殖,無法實(shí)現(xiàn)陜西衛(wèi)矛的基因重組和品種改良。因此,必須清楚陜西衛(wèi)矛的萌發(fā)機(jī)制,實(shí)現(xiàn)種苗的高出芽率,只有這樣,才能實(shí)現(xiàn)陜西衛(wèi)矛的雜交育種和品種改良的目的。在對溫室播種1個(gè)月未發(fā)芽的陜西衛(wèi)矛種子進(jìn)行解剖后發(fā)現(xiàn),一半以上的種子被霉菌侵染腐爛,其余未腐爛的種子既不腐爛也不萌發(fā),直到半年后才開始有少量的種子萌發(fā),發(fā)芽率不足千分之一。說明霉菌侵襲和種子休眠是導(dǎo)致陜西衛(wèi)矛發(fā)芽率低的兩大原因。因此,針對陜西衛(wèi)矛種子的表現(xiàn),擬在添加不同激素配比的培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌播種,一方面杜絕霉菌的侵襲,另一方面觀察激素是否能打破陜西衛(wèi)矛的休眠機(jī)制,使其順利萌發(fā)。

    表1 激素對種子生長情況的影響

    培養(yǎng)基 激素(mg/L) 種子生長天數(shù)(d) KTNAA10204060MS0.50.1無萌發(fā)跡象子葉開始伸長子葉完全長出子葉開始展開,根部開始伸長MS1.00.1子葉開始萌動子葉完全長出并開始展開子葉已經(jīng)長大并完全展開,真葉開始發(fā)育,根開始發(fā)育子葉發(fā)黃脫落,第1片真葉展開,根已經(jīng)伸長,并開始長出須根MS1.50.1子葉開始萌動子葉完全長出并展開子葉已經(jīng)長大但表面皺縮,不正常變厚、發(fā)脆根部不發(fā)育,呈瘤狀突起MS00無萌發(fā)跡象無萌發(fā)跡象少量子葉稍有伸長子葉仍未完全長出

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    試驗(yàn)所用種子采自河南紅楓種苗股份有限公司的黃河灘基地,此地的陜西衛(wèi)矛長勢良好、無病蟲害。

    1.2 方 法

    采集外觀完整、無病蟲害的果實(shí)帶回實(shí)驗(yàn)室,先用加有洗滌劑的清水浸泡0.5 h,去除果皮上殘留的污漬等,再用流水沖洗2 h后,晾干。用刀片切去果翅及上部的果蒂和下部的臍(注意不要傷到內(nèi)部的種子)。切好后放入0.1% HClO中浸泡10 min。在超凈工作臺上依次用75%酒精和0.1% HgCl各消毒5 min。消毒完成后,用無菌水沖洗5~6遍,每次浸泡時(shí)間3 min以上。

    清洗完成后,在超凈工作臺上用手術(shù)刀和鑷子把果實(shí)剝開,取出種子,并將種子外面的紅色假種皮剝離干凈,放入1% H2O2中待用。

    1.2.1 激素水平對照試驗(yàn)

    將陜西衛(wèi)矛種子接種于配方分別為MS、MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+KT 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L的培養(yǎng)基中,每瓶接3顆種子,每個(gè)處理40瓶。根據(jù)生長情況選出適合陜西衛(wèi)矛種子生長的培養(yǎng)基配方,進(jìn)行以下試驗(yàn)。

    1.2.2 接種時(shí)間對照試驗(yàn)

    試驗(yàn)從2014年8月份開始進(jìn)行,分別于8月1日、8月21日、9月10日、9月30日、10月20日、11月9日對采收的6批果實(shí)進(jìn)行無菌接種,接種的培養(yǎng)基配方根據(jù)1.2.1結(jié)果選取,每瓶接3顆種子,每個(gè)處理40瓶。

    1.2.3 胚乳切除對照試驗(yàn)

    將陜西衛(wèi)矛種子按照不同部位和不同大小對種子進(jìn)行切除。在種臍的遠(yuǎn)端位置,分別切除1/5、1/4、1/3、1/2體積的胚乳,在種臍一端,切除1/5體積,切好后進(jìn)行接種,種臍一端朝下,插入培養(yǎng)基內(nèi)一半,培養(yǎng)基配方同1.2.2,每瓶接3顆種子,每個(gè)處理40瓶。

    1.2.4 轉(zhuǎn)接對照試驗(yàn)

    根據(jù)1.2.1試驗(yàn)結(jié)果,選取60 d后生長最佳的培養(yǎng)基配方中的陜西衛(wèi)矛苗,分別轉(zhuǎn)接到MS、MS+KT 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 4種培養(yǎng)基中,每瓶接種1棵苗,每個(gè)處理40瓶。

    1.2.5 煉 苗

    選取生長健壯的瓶苗,先開瓶煉苗2 d,使幼苗適應(yīng)外界環(huán)境后,將苗取出,不要傷到根系,流水沖凈植株上附著的培養(yǎng)基,后將苗栽到準(zhǔn)備好的已滅菌培養(yǎng)土中,培養(yǎng)土按照蛭石∶泥炭=1∶1的體積比進(jìn)行配制。移栽后噴灑多菌靈溶液,并覆膜放置陰涼處1個(gè)月左右,待新葉、新根長出后放置向陽處培養(yǎng),注意保持濕度,溫度保持在15~25 ℃,逐步加強(qiáng)通風(fēng),待1個(gè)月之后幼苗長勢健壯再進(jìn)行露天栽植。

    2 試驗(yàn)結(jié)果

    2.1 激素對種子生長情況的影響

    如表1,在MS培養(yǎng)基中,陜西衛(wèi)矛種子培養(yǎng)60 d時(shí),子葉未完全長出;添加KT 0.5 mg/L和NAA 0.1 mg/L時(shí),60 d時(shí)根部開始生長;隨著KT濃度的上升,當(dāng)KT 1.0 mg/L時(shí),60 d時(shí)真葉展開且開始長出須根;當(dāng)KT 1.5 mg/L時(shí),60 d時(shí)根部出現(xiàn)瘤狀突起??梢姡琈S+KT 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 的培養(yǎng)基作為接種培養(yǎng)基表現(xiàn)最好,激素濃度過低胚發(fā)育緩慢,激素濃度過高則導(dǎo)致幼苗發(fā)育不正常,根部不發(fā)育。

    2.2 接種時(shí)間對種子生長狀況的影響

    由表2可以看出,陜西衛(wèi)矛種子的最佳接種時(shí)間為9月10日、9月30日,此時(shí)果實(shí)飽滿,果皮黃綠色,胚發(fā)育完全,10 d后發(fā)芽率可達(dá)95%以上。8月1日、8月21日接種后,種胚死亡或出苗后表現(xiàn)為白化苗;10月20日、11月9日,此時(shí)果實(shí)變紅后炸開,種子和外界接觸,接種后染菌率極高。

    經(jīng)過6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的接種試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),后期成熟的種子在果皮裂開與外界接觸后,染菌率極高,說明霉菌可能是導(dǎo)致種子播種后失活的主要原因。

    表2 接種時(shí)間對種子生長狀況的影響

    接種時(shí)間果實(shí)、種子發(fā)育情況接種后生長狀況8月1日果實(shí)青色,假種皮未變紅,種子幼嫩。生長緩慢,不出苗或者為白化苗。8月21日果實(shí)青色,假種皮稍微變紅,種子較大但仍較嫩。少數(shù)發(fā)育成正常苗,其余多為白化苗。9月10日果實(shí)青黃色,假種皮紅色,種子飽滿。發(fā)芽很快,10d發(fā)芽率可達(dá)95%以上。9月30日果實(shí)黃色,少數(shù)開始變紅,種子飽滿。發(fā)芽很快,10d發(fā)芽率95%以上。10月20日果實(shí)多為紅色,少數(shù)開始炸裂,種子飽滿,種皮較硬。發(fā)芽很快,10d發(fā)芽率45%,剩余染菌死亡。11月9日果實(shí)鮮紅,開始皺縮,多數(shù)開始炸裂,種皮極硬。接種10d后,80%染菌死亡。

    表3 胚乳對種子萌發(fā)情況的影響

    胚乳切除體積切面形態(tài)種子萌發(fā)情況種臍遠(yuǎn)端切除1/5切面很小,幾乎看不到子葉。10d后子葉萌動但未頂出,60d后仍未萌發(fā)。種臍遠(yuǎn)端切除1/4切面較大,可見長約3mm線狀的子葉橫切面。10d后子葉萌動,順利萌發(fā)。種臍遠(yuǎn)端切除1/3切面較大,可見長約4mm線狀的子葉橫切面。10d后子葉萌動,順利萌發(fā)。種臍遠(yuǎn)端切除1/2切面最大,可見長約4mm線狀的子葉橫切面。10d后子葉萌動,順利萌發(fā),后期生長緩慢、瘦弱,最終死亡。種臍一端切除1/5切面很小,幾乎看不到子葉。無萌發(fā)

    表4 轉(zhuǎn)接后激素對種子生長情況的影響

    培養(yǎng)基 激素(mg/L) 種子生長天數(shù)(d) KTNAA10204060MS0.10.1生長良好生長良好根系逐漸生長,葉片逐漸展開,部分葉片出現(xiàn)皺縮。部分幼苗生長良好,部分死亡。MS0.50.1生長良好生長逐漸停滯,不再發(fā)出新根,根尖出現(xiàn)發(fā)黑現(xiàn)象。根系基本全部死亡。MS1.00.1生長良好生長停滯,根尖發(fā)黑,出現(xiàn)根毛死亡。根部腫脹,脫分化形成愈傷組織,失去吸收功能,最終整株死亡。MS00生長良好生長良好生長良好根系發(fā)達(dá)莖干粗壯,葉片發(fā)育正常,可以進(jìn)入煉苗階段。

    2.3 胚乳對種子萌發(fā)情況的影響

    在種臍的遠(yuǎn)端位置,切除1/5體積,未萌發(fā);切除1/4、1/3,出苗順利;切除1/2,順利萌發(fā),后生長緩慢、瘦弱,最終死亡,可能是由于胚乳切除過多造成;種臍一端,切除1/5,無萌發(fā),可能傷到胚芽生長點(diǎn),種子已失去活性。

    2.4 轉(zhuǎn)接后激素對種子生長情況的影響

    無激素培養(yǎng)基前40 d生長較慢,40 d后進(jìn)入生長旺盛期,成苗率在95%以上。幼苗死亡率隨激素濃度升高而升高,可能是因?yàn)橛酌鐑?nèi)源性激素水平較高,已經(jīng)不需要外源性激素進(jìn)行調(diào)節(jié)。因此,在無菌苗長出后轉(zhuǎn)入無激素培養(yǎng)基中培養(yǎng)最好,成活率最高,生長最快。

    3 結(jié)論分析

    有研究表明,陜西衛(wèi)矛種子萌發(fā)是多因素共同作用的結(jié)果[8]。無菌條件、接種時(shí)間、切除胚乳的體積和激素刺激是必不可少的。

    從結(jié)果來看,接種時(shí)間不同,主要是種子的發(fā)育情況不同對后期生長的影響[9],在9月10日、9月30日接種時(shí),種胚發(fā)育完整,又未與外界接觸,此時(shí)是最佳接種時(shí)間。切除部分胚乳后可以促進(jìn)種子萌發(fā),可能有兩方面的原因,一是破除了堅(jiān)硬種皮的包裹,二是胚乳作為儲存養(yǎng)分的“源”,當(dāng)其收到損傷刺激時(shí),養(yǎng)分向作為“庫”的子葉流動,促進(jìn)了下一步各器官的發(fā)育,這在張榮萍[10]對小麥的研究中有提到,所以當(dāng)切除陜西衛(wèi)矛種子1/4、1/3體積胚乳時(shí),出苗順利。此外,適當(dāng)?shù)耐庠醇に乜杉铀龠@一過程,在NAA 0.1 mg/L濃度一定的情況下,KT濃度是1 mg/L,種子發(fā)育最好。但是當(dāng)子葉完成形態(tài)建成,各部分發(fā)育完全,能夠自主進(jìn)行光合作用時(shí),內(nèi)源性激素水平開始升高,此時(shí)的外源性激素就顯得多余,并會對幼苗造成毒害,因此,在幼苗發(fā)育完成時(shí)必須將其轉(zhuǎn)入無激素培養(yǎng)基中。

    [1]胡麗娟,郭軍戰(zhàn),王文君,等.陜西衛(wèi)矛的組織培養(yǎng)及植株再生[J].植物生理學(xué)通訊,2010,46(2):153-154.

    [2]劉亞芬,郭甲科.“蝴蝶樹”陜西衛(wèi)矛[J].中國花卉園藝,2010(4):37.

    [3]尚愛芹,孫振元,趙梁軍.爬行衛(wèi)矛下胚軸高頻離體再生體系的建立(英文)[J].林業(yè)科學(xué),2009,45(2):136-141,175.

    [4]袁云香.陜西衛(wèi)矛愈傷組織誘導(dǎo)的初步研究[J].北方園藝,2011(23):119-120.

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    (本欄目責(zé)任編輯:申 曉)

    Study on Aseptic Germination Technique ofEuonymusschensianus

    ZHANGJiaxun,ZHANGDan,MENGWeifang,WANGDongchao,HETiantian

    2016-07-26

    張家勛(1944—),男,河南駐馬店人;高級綠化工程師,主要從事植物分類學(xué)研究。

    10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.10.129

    S 68

    A

    1001-4705(2016)10-0129-04

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