中藥牛淫合劑干預(yù)骨代謝與骨密度的研究

張小騫 朱峰 邱奕雁 藍濤 吳天順 陳揚

中藥牛淫合劑干預(yù)骨代謝與骨密度的研究

張小騫 朱峰 邱奕雁 藍濤 吳天順 陳揚

目的 研究牛淫合劑對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者骨代謝與骨密度的影響，評價牛淫合劑抗骨質(zhì)疏松治療的療效及可行性。方法 選取2014年6月至2015年6月于深圳市第二人民醫(yī)院骨科就診的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者64例，隨機分為研究組32例，予口服牛淫合劑（由牛膝、淫羊藿、狗脊、丹參、仙茅、杜仲組成）；對照組32例，予口服阿侖膦酸鈉片治療；兩組同時予口服鈣爾奇600mg/d與骨化三醇0.25μg/d作為基礎(chǔ)治療。治療時間為6個月，并分別于服藥前、服藥后3個月、服藥后6個月采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定血清中骨特異性堿性磷酸酶（serum bone alkaline phosphatase,BAP）、血清骨鈣素（bone gla?protein,BGP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（tartrate?resistantacid phosphatase isoform?5b,TRACP?5b），于服藥前、服藥后6個月采用雙能X線骨密度儀（dualenergy X?ray absorptiometry,DEXA）測量腰椎及髖部骨密度。結(jié)果 對照組和研究組各發(fā)生2例不良反應(yīng)。研究組和對照組治療3、6個月后的BAP、BGP、TRACP?5b均較治療前明顯降低，治療6個月后的骨密度均較治療前顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；研究組與對照組之間各時間點的各項指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論 牛淫合劑具有抗骨質(zhì)疏松癥的作用，其效果接近阿侖膦酸鈉，并可能具有促進成骨及抑制破骨的作用。

中草藥；骨質(zhì)疏松；淫羊藿；牛膝

近年來，我國骨質(zhì)疏松癥患者人數(shù)逐年增長，目 前大約有1.2億骨質(zhì)疏松癥患者，患病率高達8.8%，抗骨質(zhì)疏松治療迫在眉睫。

據(jù)中醫(yī)“腎藏精、精生髓、髓生骨”的理論，牛膝、淫羊藿、狗脊、丹參、仙茅、杜仲的“滋肝補腎”功效在臨床已被證實［1］；現(xiàn)研究表明，牛膝中三萜總皂苷類物質(zhì)具有抑制破骨細胞的作用［2］，淫羊藿中總黃酮

成分具有促進成骨細胞的作用［3，4］，且兩種藥物雌激素性腺樣的副作用較小，但對于兩者作為主藥配伍合用的中藥方劑研究甚少。

本實驗采用完全隨機設(shè)計方案，通過測定絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者服用牛淫合劑前后血清中骨特異性堿性磷酸酶（serum bone alkaline phosphatase, BAP）、血清骨鈣素（bone gla?protein,BGP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（tartrate?resistant acid phosphatase isoform?5b,TRACP?5b）及骨密度等指標(biāo)，研究牛淫合劑對骨代謝與骨密度的影響，評價牛淫合劑抗骨質(zhì)疏松治療的療效及可行性，為中藥抗骨質(zhì)疏松治療提供新思路及方法。

資料與方法

一、研究對象

選取2014年6月至2015年6月在深圳市第二人民醫(yī)院門診就診的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者64例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①自然絕經(jīng)2年以上的婦女，絕經(jīng)年齡≥50歲；②經(jīng)雙能X線吸收測量法（dual energy X?ray absorptiometry,DEXA）測量腰椎及髖部骨密度，至少有一項T值≤-2.5 SD；③有不同程度腰背痛和活動受限；④X線片提示骨小梁變細及數(shù)目減少，骨皮質(zhì)變薄。排除標(biāo)準(zhǔn)：①甲狀腺功能亢進、糖尿病、長期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等誘發(fā)的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥；②6個月內(nèi)服用雌激素等影響骨代謝的藥物者；③合并嚴(yán)重的心、肺、肝、腎疾病。所有患者對該研究知情同意。

將患者按初次就診時間先后順序進行編號，然后運用電腦程序產(chǎn)生隨機數(shù)字，將患者分為研究組32例，對照組32例。2組患者的年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、臨床癥狀、骨密度值比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。

二、治療方法

以6個月為1個療程。兩組都予基礎(chǔ)治療：補充鈣劑（鈣爾奇600mg，每日1次）與骨化三醇（羅蓋全0.25μg，每日1次）。對照組：予以口服阿侖膦酸鈉片劑70mg/片，每周1次，1次服用，服藥后0.5 h內(nèi)不能平臥，2 h后進餐。研究組：予以口服牛淫合劑10 g的水煎劑，每天1次。

三、觀察指標(biāo)

（一）骨代謝指標(biāo)

采集2組患者服藥前及治療后3、6個月的空腹靜脈血5ml，分離血清后置于-200℃低溫保存待測，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法）測定血清BAP、BGP、TRACP?5b水平，嚴(yán)格按照說明書操作（USBiological公司，美國）。同時監(jiān)測血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能指標(biāo)，評估實驗期間用藥安全性。

（二）骨密度指標(biāo)

于治療前及治療6個月后采用DEXA測定患者腰椎及髖部骨密度。治療期間，記錄患者的不良反應(yīng)情況。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件包（SPSS公司，美國）進行統(tǒng)計學(xué)分析處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，研究組與對照組之間BAP、BGP、TRACP?5b及骨密度等指標(biāo)的比較，采用獨立樣本t檢驗；各組用藥前后BAP、BGP、TRACP?5b及骨密度等指標(biāo)的比較采用配對t檢驗。檢驗水準(zhǔn)α值取雙側(cè)0.05。

結(jié)果

一、不良反應(yīng)

對照組發(fā)生不良反應(yīng)2例，主要為反酸、腹痛癥狀。研究組發(fā)生不良反應(yīng)2例，為服藥1～2 h內(nèi)有局部皮膚瘙癢、反酸等癥狀。兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

二、研究組與對照組患者治療前后各項指標(biāo)變化情況

治療前兩組患者的BAP、BGP、TRACP?5b及骨密度比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；研究組和對照組治療3、6個月后的BAP、BGP、TRACP?5b均較治療前明顯降低，治療后6個月的骨密度較治療前顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05，表1）；研究組與對照組之間治療后各時間點的各項指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05，表1）。

討論

一、中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松癥的現(xiàn)狀

隨著我國社會老齡化加劇，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率也日益增加，已成為危害老年人身體健康和降低生活質(zhì)量的常見疾病。骨質(zhì)疏松癥主要發(fā)生在絕經(jīng)后女性中［5］，主要是由于患者絕經(jīng)后體內(nèi)雌激素缺乏、骨轉(zhuǎn)化失衡，導(dǎo)致骨量減少，微觀骨結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，骨小梁減少甚至消失及其間隙增寬。從而使得骨骼的脆性大幅增大，發(fā)生骨折、骨裂的概率和可能性大大增加。按照中醫(yī)理論，骨質(zhì)疏松屬于“骨痿”、“骨痹”等范疇，其病因病機是腎虛為主。因此，在防治骨質(zhì)疏松方面，對補腎壯骨等中草藥研究較多［6］，最為代表的主藥為淫羊藿、牛膝等。在我國運用中醫(yī)中藥治療骨質(zhì)疏松癥有著悠久的歷史，但牛膝與淫羊藿合用的方劑筆者尚未見報道，本試驗研究牛淫合劑對骨代謝及骨密度的干預(yù)，評價牛淫合劑在抗骨質(zhì)疏松治療中的療效及可行性。

表1 治療前后兩組各項指標(biāo)的變化情況（±s）

表1 治療前后兩組各項指標(biāo)的變化情況（±s）

注：組內(nèi)與治療前比較，*P＜0.05

BAP（μg/L）BGP（μg/L）組別實驗組（32例）對照組（32例）t值P值治療前18.944 ±5.296 19.425 ±6.155 -0.335 0.739治療后3個月16.014 ±5.303*16.475 ±6.262*-0.318 0.752治療后6個月10.531 ±2.645*10.763 ±3.087*-0.322 0.749治療前24.344 ±3.646 24.250 ±2.873 0.114 0.909治療后3個月23.805 ±3.978*23.593 ±3.029*0.240 0.811治療后6個月19.795 ±4.091*19.804 ±3.571*-0.010 0.992 TRACP?5b（U/L）治療前3.658 ±0.713 3.340 ±0.784 1.837 0.071治療后3個月2.946 ±0.546*2.759 ±0.639*1.257 0.214治療后6個月2.841 ±0.649*2.657 ±0.662*1.123 0.266骨密度（mg/cm2）治療前0.611 ±0.063 0.623 ±0.074 -0.699 0.487治療后6個月0.826 ±0.062*0.837 ±0.075*-0.663 0.510

二、淫羊藿及牛膝干預(yù)骨代謝的機制

目前研究表明，淫羊藿總黃酮是中藥淫羊藿防治骨質(zhì)疏松的主要成分。因其含有植物雌激素及可促進雌激素生成的物質(zhì)［7］。Xu等［8］研究發(fā)現(xiàn)，在淫羊藿中293種成分中，有77種活性成分具有類似雌激素的結(jié)構(gòu)或作用。并且其中有11種物質(zhì)是有著共同的受體的。通過類雌激素物質(zhì)的調(diào)節(jié)，發(fā)揮部分雌激素效應(yīng)，從而達到抗骨質(zhì)疏松的作用。梁廣勝等［9］最新研究表明，淫羊藿總黃酮可以通過BMP?2/Runx2/OSX信號通路來促進骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）增殖并向成骨細胞分化，增加了成骨細胞的數(shù)量，使得骨轉(zhuǎn)換中成骨大于破骨，促進鈣鹽在骨組織中沉積，使骨量增加，骨密度升高。Chen等［10］研究表明，淫羊藿能抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的表達，促進轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF?β1）的產(chǎn)生，可抑制破骨細胞生成，減少鈣的流失，同時促進成骨細胞的增值及分化。Xue等［11］研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿苷可能存在多靶點作用機制，通過擴增mRNA來增加一種具有鋅指結(jié)構(gòu)且對成骨有重要作用的轉(zhuǎn)錄因子，即成骨細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子。該因子一方面可以促進成骨的發(fā)生，并對脂肪細胞形成起到抑制作用；另一方面，阻礙骨髓間充質(zhì)干細胞分化為破骨細胞。

目前牛膝主要抗骨質(zhì)疏松的有效成分為三萜皂苷。He等［12］研究發(fā)現(xiàn)，牛膝溶于正丁醇的提取物齊墩果酸型三萜皂苷對去卵巢大鼠骨量的丟失有延緩作用，同時不增加大鼠子宮的重量以及血清雌二醇的含量，該研究認為，雌激素受體有α和β亞型，牛膝提取物選擇性作用于上述兩種受體［13］，發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松作用的同時不產(chǎn)生性腺作用。隨著對牛膝研究的深入，Zhang等［2］研究發(fā)現(xiàn)，牛膝發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松作用不是由于其中的某一種成分，而是由皂苷、類固醇、黃酮類等化合物的協(xié)同作用所共同完成，將骨的高轉(zhuǎn)換狀態(tài)調(diào)整為低轉(zhuǎn)換狀態(tài)。目前研究發(fā)現(xiàn)，低體重是骨質(zhì)疏松癥的高危因素之一，該實驗通過對去勢大鼠的體重脂肪變化研究發(fā)現(xiàn)，牛膝其類雌激素樣作用還有調(diào)節(jié)能量代謝以及調(diào)整脂肪分布的作用，可改變其低體重狀態(tài)。該試驗通過微型計算機斷層掃描發(fā)現(xiàn)，牛膝抗骨質(zhì)疏松的作用結(jié)果不是單純的骨量增加，而是恢復(fù)骨小梁的結(jié)構(gòu)“桿板狀結(jié)構(gòu)”，從而重建骨骼微結(jié)構(gòu)的完整性，增加其生物力學(xué)的強度，降低脆性骨折的發(fā)生。He等［14］學(xué)者最新研究發(fā)現(xiàn)，牛膝總皂苷可通過絲裂原激活蛋白激酶通路，促進骨髓基質(zhì)細胞成骨分化。

三、牛淫合劑對骨轉(zhuǎn)換的調(diào)節(jié)

BAP、BGP是能反映成骨細胞活性的標(biāo)記物，其血清中的水平能反映成骨細胞的活性劑成骨的速率；TRACP?5b來自于破骨細胞，反映破骨細胞活性，是骨吸收的標(biāo)志物。本研究中，受試者用藥前血清BAP、BGP、TRACP?5b指標(biāo)異常升高，服用牛淫合劑或阿侖膦酸鈉3、6個月時，BAP、BGP、TRACP?5b三項指標(biāo)均較用藥前有所降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。阿侖膦酸鈉為第三代雙磷酸鹽抗骨質(zhì)疏松藥物，具有調(diào)節(jié)骨轉(zhuǎn)換作用，其通過抑制破骨細胞活性，打破骨高轉(zhuǎn)換狀態(tài)而達到抗骨質(zhì)疏松的作用［15］。研究組服用牛淫合劑后3、6個月BAP、BGP、TRACP?5b檢測指標(biāo)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。以上說明服用牛淫合劑6個月，可以達到阿侖膦酸鈉同樣調(diào)節(jié)骨轉(zhuǎn)換的作用，從而達到抗骨質(zhì)疏松治療的效果。但牛淫合劑的作用機制可能與阿侖膦酸鈉作用于破骨細胞毒性機制不同，其主要抗骨質(zhì)疏松成分具有類雌激素樣

作用，通過選擇性調(diào)節(jié)雌激素受體［16］，調(diào)節(jié)骨轉(zhuǎn)換，抑制破骨細胞活性，促進成骨細胞，且不對性腺產(chǎn)生作用。

四、牛淫合劑改善骨密度

本研究中骨密度的測量主要是運用DEXA測定腰椎及髖部骨密度，這是目前國際公認的骨密度測量金標(biāo)準(zhǔn)。在我們的研究中，治療前研究組與對照組骨密度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療6個月后，兩組骨密度值都有不同程度的升高，對照組服用阿侖膦酸鈉片所測得的腰椎骨密度數(shù)據(jù)與Zhang等［17］的臨床研究結(jié)果一致。將研究組與對照組數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。說明牛淫合劑與阿侖膦酸鈉同樣具有抗骨質(zhì)疏松的作用；且短期治療的效能相似。但本實驗存在不足，阿侖膦酸鈉增加骨密度的作用機制之一是沉積于原有骨組織，并使新形成的骨形成于阿侖膦酸鈉上；而對于牛淫合劑，動物試驗發(fā)現(xiàn)牛膝抗骨質(zhì)疏松的有效成分在促進成骨的同時，可重建骨小梁的“干板狀結(jié)構(gòu)”，從而重建骨骼微結(jié)構(gòu)的完整性，增加其生物力學(xué)的強度，降低脆性骨折的發(fā)生。本研究未能對受試對象進行骨CT平掃重建，以了解骨微結(jié)構(gòu)的修復(fù)情況，這將是我們團隊今后研究方向之一。

綜上所述，中藥牛淫合劑能明顯降低患者BAP、BGP、TRACP?5b水平，發(fā)揮有效的抗骨質(zhì)疏松作用，具有促進成骨及抑制破骨的作用，并改善患者的臨床癥狀，阻止骨質(zhì)疏松進展，降低患者骨折風(fēng)險。在治療骨質(zhì)疏松癥方面與西藥阿侖膦酸鈉作用相當(dāng)，但長期療效及其相關(guān)不良反應(yīng)有待進一步深入研究，尤其需要明確是否存在性腺作用，且其存在風(fēng)險尚未明確，有待進一步研究證實。

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Bonem etabolism and bonem ineral density intervened by NiuYin Agent.

ZHANGXiaoqian*,ZHU Feng, QIUYiyan,LAN Tao,WUTianshun,CHENYang.*Guangdong MedicalUniversity,Zhanjiang 524023,China

CHEN Yang,E?mail:drchenyang@163.com

Objective To investigate the intervention of Niuyin Agent on the bonemetabolism and mineral density of post?menopausal women,and evaluate the efficacy and feasibility of Niuyin Agent on the treatment of osteoporosis.M ethods The subjects contained 64 post?menopausal patients with osteoporosis who have consulted in our hospital from June 2014 to June 2015.Theywere evenly distributed into two random groupswith 32 cases in each group:the controlgroup and the experimentalgroup.The patients in control group were asked to take alendronate sodium tablets orally,and those in experimentalgroup took NiuYin Agentorally for treatment.The NiuYin Agent was composed of achyranthes bidentata,epimedium brevicornum,cibotium barometz,salviamiltiorrhiza,curculigo orchioides and eucommia ulmoides.Both the groups took caltrate 600 mg/day and rocalirol0.25μg/day orally as the basic treatment.The therapy lasted 6months.The enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was done before and at the 3rd,6th month after the treatment to observe the change of the bone turnover biomarkers,including the bone specific alkaline phosphatase(BAP),the bone gla protein(BGP)and the tartrate resistant acid phosphatase 5b(TRAP?5b).Before and 6months after treatment, the bonemineral density of the patients’lumbar and hip was tested and statistically analyzed through the dual energy X?ray absorptiometry(DEXA).Results The serum levelof BAP,BGPand TRAP?5b in the experimen?tal group and control group decreased,and the bonemineral density increased after the treatment(P＜0.05 for all).Therewas no significant difference between the experimental group and the control group at different time points(P＞0.05 for all).Conclusion NiuYin Agent iseffective in anti?osteoporosis treatment,and itseffect is close to thatofalendronate sodium whichmay help promoteosteogenesisand inhibit theactioof theosteoclasts.

Chinese herbal;Osteoporosis;Epimedium brevicornum;Achyranthesbidentata

2016?08?01）

10.3969/j.issn.1674?8573.2016.05.012

廣東省建設(shè)中醫(yī)藥強省科研課題（20141257）

524023 廣東湛江，廣東醫(yī)科大學(xué)研究生院（張小騫、吳天順）；深圳市第二人民醫(yī)院脊柱外科（朱峰、邱奕雁、藍濤、陳揚）

陳揚，E?mail：drchenyang@163.com