飼料中不同維生素E水平對加州鱸生長和抗氧化性能的影響

朱旺明，崔祥東，陳翠英，藍漢冰，譚永剛，黃永政，朱志明，陳玉敏

（1.佛山市信豚生物科技有限公司，佛山南海528211；2.廣州市信豚水產技術有限公司，廣州天河510642）

飼料中不同維生素E水平對加州鱸生長和抗氧化性能的影響

朱旺明1，2*，崔祥東1，2，陳翠英1，2，藍漢冰1，2，譚永剛1，黃永政1，2，朱志明2，陳玉敏2

（1.佛山市信豚生物科技有限公司，佛山南海528211；2.廣州市信豚水產技術有限公司，廣州天河510642）

以維生素E實際添加量分別為20.50（對照組）、39.86、54.74、87.52和131.78 mg/kg的5種等氮等脂的試驗飼料飼養(yǎng)初始體重為（34.27±0.26）g的加州鱸幼魚8周，研究不同維生素E水平對其生長及抗氧化性能的影響。結果表明，隨著飼料維生素E添加水平的升高，加州鱸的增重率、特定生長率和蛋白質效率逐漸升高，但當飼料中維生素E添加量為131.78 mg/kg時，其增重率和特定生長率顯著降低（P＜0.05）。各維生素E添加組的脂體比顯著低于對照組，而肥滿度則顯著高于對照組（P＜0.05）。飼料中添加維生素E顯著降低了血清丙二醛的含量（P＜0.05），但對血清總抗氧化能力、過氧化氫酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性無顯著影響（P＞0.05）。由此可知，飼料中添加一定量的維生素E可促進加州鱸的生長，降低脂質過氧化產物的含量。以特定生長率和增重率為評價指標，經二次回歸方程預測加州鱸飼料中維生素E的適宜添加水平為63.33～69.44 mg/kg。

加州鱸；維生素E；生長；抗氧化

維生素E又名生育酚，為一類化學結構相似的酚類化合物，在清除自由基、維護生物膜結構、抗氧化和增強機體免疫力和抗病力等方面具有非常重要的作用（Niki，2014；Brigelius-Flohe，2006）。研究發(fā)現(xiàn)，魚類自身不能合成維生素E或合成的量太少，不能充分滿足機體的需要，必需從外界攝入（通常是飼料）以維持機體的生長、繁殖和健康。飼料中維生素E缺乏或不足時，容易導致魚體出現(xiàn)一系列缺乏癥，如紅細胞生成障礙、貧血、組織水腫、皮下出血、肝臟和肌肉退化等（Hamre，2011）。

加州鱸（Micropterus salmoides），又名大口黑鱸，為肉食性溫水魚類，具有生長快、肉質鮮美、抗病力強等優(yōu)點，是我國養(yǎng)殖的主要淡水魚品種之一。當前加州鱸養(yǎng)殖以投喂冰鮮雜魚為主，或采用冰鮮雜魚與飼料混合投喂的方式，由于其營養(yǎng)需求、消化吸收和代謝機制的研究相對缺乏，人工配合飼料的研制一直未能取得重大突破。目前，有關加州鱸蛋白質、脂肪和維生素需要的研究已有報道（Chen等，2015、2013；梁勤朗，2012；肖溫溫，2012），但對加州鱸維生素E營養(yǎng)需求的研究不多。Chen等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，在大口黑鱸飼料中硒添加量為1.9 mg/kg的基礎上添加維生素E 160 mg/kg，能在一定程度上減輕魚油氧化帶來的負面影響。而Zhu等（2012）認為飼料中維生素E的水平為400 IU/kg時，大口黑鱸的生長速度最快。本試驗通過在配合飼料中添加不同劑量的維生素E，研究維生素E對加州鱸生長性能及抗氧化性能的影響，旨在探討加州鱸對配合飼料中維生素E的需求，以期為加州鱸的人工配合飼料的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料飼料以維生素E醋酸酯作為添加源，分別按照維生素E含量為0（對照組）、20、40、80、160 mg/kg添加，以微晶纖維素為填充劑，使各試驗組飼料其他營養(yǎng)水平保持一致。維生素E醋酸酯購自浙江醫(yī)藥股份有限公司，有效含量為50%。采用反相高效液相色譜法測得上述5組飼料中維生素E的實際添加量分別為20.50（對照組）、39.86、54.74、87.52、131.78 mg/kg。所有飼料原料經80目過篩，充分混勻后制成粒徑為3 mm的膨化飼料，烘干后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩；A飼料成分及營養(yǎng)水平見表1。

表1 加州鱸試驗飼料組成與營養(yǎng)水平%

1.2 試驗魚與飼養(yǎng)管理試驗于2015年7—9月在佛山市信豚生物科技有限公司南沙中試實驗中心進行，加州鱸購于廣東省佛山市南海區(qū)優(yōu)鱸1號養(yǎng)殖場，先放入暫養(yǎng)箱中用基礎飼料（對照組飼料）馴養(yǎng)2周至其完全適應池塘網(wǎng)箱試驗環(huán)境。馴養(yǎng)結束后，選取平均體重為（34.27±0.26）g的健康加州鱸幼魚750尾，隨機分在15個網(wǎng)箱（1.5 m× 1.5 m×2 m）中，每個網(wǎng)箱50尾，分別投喂5組飼料，每組飼料3個重復，飼養(yǎng)周期為8周。每天投喂兩次（8∶00和17∶00），投喂率為體重的2%～4%，同時根據(jù)水溫、天氣和魚的攝食情況調整投喂量。每天記錄投喂量和試驗魚的死亡數(shù)據(jù)，并定期檢查水體的氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧等理化因子。試驗期間水溫為28.0～32.0℃，露天養(yǎng)殖，自然光照，pH值為7.2～7.8，水中氨氮含量0.1～0.2 mg/L，亞硝酸鹽小于0.05 mg/L，溶氧大于5.0 mg/L。

1.3 樣品采集養(yǎng)殖試驗結束前，停食24 h，然后對每個網(wǎng)箱中的所有加州鱸進行計數(shù)、稱重，記錄生長情況。從每個網(wǎng)箱隨機撈取5尾魚，測定體重、體長等相關指標，同時進行血液和肝臟樣品的采集。用1 mL無菌注射器尾靜脈采血，置于無菌離心管中，4℃靜置12 h后，3500 g離心10 min，制備血清，-80℃保存?zhèn)溆?。取肝臟組織，剔除其表面的結締組織附著物，并按重量1∶10加入PBS（pH 7.4）緩沖液，均漿機高速均漿后，3500 g低溫離心20 min，取上清液，置于-80℃保存?zhèn)溆谩Ａ砻肯潆S機取4尾魚，擦干體表水分，經液氮速凍后保存于-20℃，用于全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的分析。

1.4 指標測定

1.4.1 生長性能指標的測定

成活率（SR，%）=試驗結束時魚尾數(shù)/試驗開始時尾數(shù)×100；

增重率（WG，%）=（終末體重–初始體重）/初始體重×100；

特定生長率（SGR，%/d）=ln（試驗魚末重/試驗魚初重）/飼養(yǎng)時間×100；

飼料系數(shù)（FCR）=飼料攝食量/試驗魚增重；

蛋白質效率（PER，%）=試驗魚增重/（試驗魚飼料攝食量×飼料蛋白含量）×100；

臟體比（VSI）=試驗魚內臟重/試驗魚體重× 100；

肝體比（HIS）=試驗魚肝臟重/試驗魚體重× 100；

魚體肥滿度（CF）=試驗魚體重/試驗魚體長3× 100。

1.4.2 常規(guī)營養(yǎng)成分測定飼料、全魚和肝臟的粗蛋白質、粗脂肪、粗灰分和水分按照國標GB/T 6432-1994、GB/T 6433-2006、GB/T 6438-2007和GB/T 6435-2014的方法測定。飼料維生素E的含量按照國標GB/T 17812-2008中的皂化提取法進行提取，然后采用反相高效液相色譜法分析。

1.4.3 抗氧化性能指標的測定血清總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）和丙二醛（MDA）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定，具體測定方法參照試劑盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計分析采用SPSS 16.0對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。在單因素方差分析（One-Way ANOVA）達到顯著水平時（P＜0.05），采用Turkey’s檢驗進行多重比較，數(shù)據(jù)表示為“平均數(shù)±標準誤”。

2 結果與分析

2.1 不同維生素E水平對加州鱸生長性能和飼料利用率的影響由表2可以看出，加州鱸幼魚的增重率、特定生長率和蛋白質效率呈現(xiàn)相似的趨勢，都隨飼料中維生素E添加水平的升高先逐漸升高，在維生素E添加量為87.52 mg/kg時達到最高值，而后則開始下降，且增重率和特定生長率顯著高于添加量最高組（131.78 mg/kg）（P＜0.05）。相反，加州鱸的飼料系數(shù)隨飼料中維生素E添加水平的升高逐漸降低，在維生素E添加量為87.52 mg/kg時達到最低值，131.78 mg/kg維生素E添加組的飼料系數(shù)最高，但各組之間差異并不顯著（P＞0.05）。將維生素E添加水平與增重率和特定生長率作二次回歸曲線分析可得，獲得最大增重率時飼料中維生素E最低添加量分別為69.44 mg/kg（圖1）和63.33 mg/kg（圖2）。攝食添加39.86 mg/kg維生素E飼料組的成活率最高，但與其余各組差異不顯著（P＞0.05）。

表2 不同維生素E飼喂水平對加州鱸生長性能、飼料利用效率和形體指標的影響

圖1 加州鱸增重率與飼料維生素E添加水平的關系

圖2 加州鱸特定生長率與飼料維生素E添加水平的關系

2.2 不同維生素E水平對加州鱸形體指標和體成分的影響由表2可知，與對照組相比，飼料中添加54.74 mg/kg維生素E顯著降低了加州鱸的臟體比（P＜0.05）。維生素E低水平組（20.50、39.86 mg/kg）的肝體比顯著高于各維生素E高水平組（54.74、87.52、131.78 mg/kg）。對照組魚的脂體比顯著高于各維生素E添加組，而肥滿度則顯著低于各維生素E添加組（P＜0.05）。不同維生素E添加水平對加州鱸魚體成分的影響不顯著（P＞0.05）（表3）。

表3 不同維生素E飼喂水平對加州鱸體成分的影響

2.3 不同維生素E水平對加州鱸抗氧化性能的影響由表4可知，隨著飼料維生素E添加水平的增加，血清丙二醛的含量逐漸下降，且添加量最高組的丙二醛含量顯著低于對照組（P＜0.05），但不同維生素E添加水平對加州鱸血清抗氧化指標的影響均不顯著（P＞0.05）。飼料添加54.74 mg/kg維生素E組的血清總抗氧化能力最高，但其超氧化物歧化酶的活性卻最低。各維生素E添加組的谷胱甘肽過氧化物酶的活性都高于對照組，但各組間差異并不顯著（P＞0.05）。

表4 不同維生素E飼喂水平對加州鱸體成分的影響

3 討論

研究表明，適量的維生素E可以促進魚類健康生長、提高飼料利用率和成活率，而維生素E缺乏或過量均會使機體處于一種不良的生理狀態(tài)，不利于自身的生長發(fā)育（Hamre，2011）。Huang等（2004）報道，85 IU/kg維生素E顯著提高了奧尼羅非魚（Oreochromis niloticus×O.aureus）的生長和飼料利用率，且飼料缺乏或添加過量（298 IU/kg）維生素E均導致奧尼羅非魚生長和飼料利用率顯著下降。飼料中添加適量維生素E（27.8～107.5 mg/kg）可明顯提高團頭魴（Megalobrama amblycephala）幼魚的增重率和攝食率（周明等，2013）。本試驗也表明，適量添加維生素E能提高加州鱸幼魚的增重率和特定生長率，而當飼料中維生素E含量在131.78 mg/kg時，生長性能顯著下降。在本試驗中，維生素E含量較低的對照組（20.50 mg/kg）未見有明顯的維生素E外部缺乏癥出現(xiàn)，這可能是因為試驗魚自身肝臟儲存有一定量的維生素E且試驗周期較短而不足以產生維生素E缺乏癥。

以加州鱸特定生長率和增重率為指標，通過二次回歸方程求得的飼料中維生素E的最低需要量為63.33、69.44 mg/kg。這一結果與花鱸（Lateolabrax japonicus）（60.5mg/kg）（周立斌等，2009）和羅非魚（50～100 mg/kg）（Huang等，2004；Shaiu和Shaiu，2001）等相近，低于石斑魚（Epinephelus malabaricus）（104～115 mg/kg）（Lin和Shiau，2005）、軍曹魚（Rachycentron canadum）（78～111 mg/kg）（Zhou等，2013）和草魚（Ctenopharyngodon idellus）（100～200 mg/kg）（Li等，2014；Takeuchi等，1992），但高于青魚（Mylopharyngodon piceus）（45 mg/kg）（黃云等，2013）和雜交條紋鱸（M. chrysops female×M.saxatilis）（28 mg/kg）（Kocabas和Gatlin，1999）。不同魚類對維生素E的消化吸收代謝不同，可能導致對維生素E需求量的不同。此外，飼料的組成、試驗條件、試驗魚規(guī)格等多種因素都會影響魚類對維生素E的需求量（NRC，2011；Hamre，2011）。

維生素E在魚類上的抗氧化作用主要體現(xiàn)在以下三個方面：一是抗脂質過氧化，二是抗蛋白質過氧化，三是保護抗氧化酶活性（許友卿等，2010）。在脂質過氧化過程中，會產生大量的自由基和丙二醛（MDA），而維生素E能通過保護超氧化物歧化酶、清除自由基、降低或終止脂質過氧化反應而降低機體組織或血液中的MDA水平（王仁忠等，2009；Sahoo等，2008），因此MDA經常被作為測定脂質過氧化程度以及抗氧化物質抗氧化能力的一個重要指標（De Zwart等，1999；Harats等，1990）。大量研究表明，飼料中添加維生素E能顯著降低草魚（Li等，2014）、黑鯛（Peng等，2009；彭士明等，2008）、大鯪鲆（?；赖?，2014）的MDA含量。本試驗也同樣發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中維生素E添加量的上升，加州鱸血清中的MDA含量明顯降低。這表明飼料中添加維生素E能有效降低加州鱸機體內脂質過氧化反應，降低血液中MDA水平。

動物機體內清除自由基的抗氧化酶系統(tǒng)主要包括超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽硫轉移酶以及谷胱甘肽還原酶等（彭士明等，2008）。維生素E能清除動物體內的氧化應激物質對機體抗氧化酶系統(tǒng)的氧化脅迫，從而保護抗氧化酶，使其活性維持正常（Huang等，2004）。在本試驗結果中，飼料中添加維生素E能有效提高加州鱸血清中的谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，但各組間沒有顯著差異。Mourente等（2002）的試驗結果同樣表明，添加維生素E對金頭鯛肝臟GSH-Px和GR活性沒有顯著影響。彭士明等（2008）報道也指出，投喂氧化魚油的情況下，添加維生素E對黑頭鯛肝臟的GSH-Px活性沒有顯著影響。但Garg等（2009）報道，維生素E能顯著降低脂質過氧化水平，同時提高機體還原型谷胱甘肽（GSH）含量，顯著提高谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和谷胱甘肽巰基轉移酶（GST）的活性。本試驗中的超氧化物歧化酶（SOD）均略低于對照組，但與對照組均沒有顯著差異（P＞0.05）。同樣，陳聘等（2010）在黃顙魚試驗中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加維生素E對黃顙魚血液中的SOD活性沒有顯著影響，但也有研究表明，血液中的SOD活性隨著飼料中維生素E含量的升高而上升（李志華等，2013；蔡中華等，2001；Wise等，1993）。本試驗中的過氧化氫酶（CAT）活性各組間沒有明顯差異。在大多數(shù)的有關飼料中添加氧化魚油的前提下添加維生素E的研究結果表明，飼料中添加維生素E能顯著降低機體組織中CAT的水平（唐筱等，2010；彭士明等，2008；Mourente等，2002），這是否是因為在正常情況下（沒有氧化油脂或其他脅迫條件下），機體內的CAT會保持一個相對平穩(wěn)的水平還值得進一步研究。本試驗結果表明，總抗氧化能力（T-AOC）在維生素E添加量為54.74 mg/kg時達到最高，而已有資料中有關飼料中添加維生素E對機體組織或血液中總抗氧化能力影響的研究較少。本試驗中的各抗氧化酶活性指標與對照組之間并不存在顯著差異，與其他研究者的研究結果存在一定差異，原因可能與試驗飼料的設計以及試驗對象有關，相對于其他試驗飼料，本試驗的對照組中維生素E的含量比較高，可能已滿足機體維持各種酶活性處于正常水平的需要，因而導致各試驗組與對照組之間沒有顯著差異，有關維生素E與抗氧化酶之間的關系還有待進一步的深入研究。

4 結論

本試驗結果表明，在體重為（34.27±0.26）g的加州鱸配合飼料中添加維生素E可促進加州鱸的生長，提高飼料蛋白質效率，降低血清中丙二醛水平，保持抗氧化酶活性穩(wěn)定等。綜合生長性能指標和抗氧化指標，建議加州鱸人工配合飼料中維生素E的添加量為63.33～69.44 mg/kg。

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To investigate the effects of dietary vitamin E on growth performance and antioxidant activity of Micropterus salmoides，five diets supplemented with graded levels of vitamin E 20.50（control），39.86，54.74，87.52 and 131.78 mg/kg dry weight，respectively were fed to triplicate treatments of 50 juveniles each with the initial weight of（34.27±0.26）g for 8 weeks.The results showed that the weight gain（WG）and special growth rate（SGR）and the protein efficiency ratio of fish were increased with vitamin E level in the diet increasing.But the weight gain（WG）and special growth rate（SGR）of fish fed the diet with 131.78 mg/kg vitamin E were significantly decreased（P＜0.05）.The lipid/body rate of the fish fed the dies supplemented vitamin E was significantly lower than that of the control group.And the fullness of the fish fed the dies supplemented vitamin E was significantly higher than that of the control group（P＜0.05）.The serum malondialdehyde（MDA）content of fish fed the diet added vitamin E was significaming lower than that of the control group（P＜0.05）.But there was no significantly effects on total antioxidant capacity（T-AOC），catalase（CAT），superoxide dismutase（SOD）and glutathione peroxidase（GSH-PX）among groups（P＞0.05）.The results indicated that vitamin E could increase the weight gain and decrease the lipid peroxide content of juvenile Micropterus salmoides，and the suitable level of dietary vitamin E was 63.33～69.44 mg/kg.

Micropterus salmoides；vitamin E；growth；antioxidant activity

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161709

S816.7

A

1004-3314（2016）17-0032-06

科技型中小企業(yè)創(chuàng)新資金項目（14C26214402665）

*通訊作者