黃連對(duì)脾虛大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能及胃動(dòng)素、胃泌素的影響

楊紅蓮 段玉紅 錢笑音

摘要：目的 觀察黃連對(duì)脾虛大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能及胃動(dòng)素（MTL）、胃泌素（GAS）的影響，探討其“健胃”“敗胃”的量效機(jī)制。方法 采用勞形與勞神制作勞倦過度脾虛模型。60只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、陽性藥組和黃連大、中、小劑量組，每組10只。各給藥組給予相應(yīng)藥液灌胃，空白對(duì)照組和模型組給予生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)14 d。觀察各組脾虛大鼠一般情況、胃腸運(yùn)動(dòng)功能及MTL、GAS含量。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠胃內(nèi)殘留率明顯升高，小腸推進(jìn)率、MTL和GAS含量明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，黃連小劑量組胃內(nèi)殘留率明顯降低，小腸推進(jìn)率、MTL和GAS含量明顯升高（P<0.05，P<0.01）；黃連大劑量組小腸推進(jìn)率、MTL含量明顯降低（P<0.05）。結(jié)論 黃連大劑量“敗胃”、小劑量“健胃”，其量效機(jī)制可能與直接調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，或通過調(diào)節(jié)胃腸激素的分泌調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：黃連；脾虛；胃腸運(yùn)動(dòng)；胃動(dòng)素；胃泌素；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.018

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2016）11-0075-03

Abstract： Objective To observe the effects of Coptidis Rhizoma on gastrointestinal motility functions， MTL and GAS in spleen-deficiency rats； To explore the dose-effect mechanism of “invigorating stomach” and “spoiling appetite”. Methods Fatigue and troublesome were used to establish exhausted spleen-deficiency models. 60 SD rats were randomly divided into blank control group， model group， positive medicine group， Coptidis Rhizoma high-， medium- and low-dose groups， with 10 rats in each group. Each medication group received relevant medicine for gavage， while the blank control group and model group received normal saline for gavage， once a day for 14 d. The general gastrointestinal motility functions， MTL and GAS of rats in each group were observed. Results Compared with blank control group， the gastric residual rate of model group was significantly higher； small intestinal propulsion rate， MTL， and GAS were significantly lower （P<0.05， P<0.01）. Compared with model group， the gastric residual rate in Coptidis Rhizoma low-dose group was significantly lower； small intestinal propulsion rate， MTL and GAS increased significantly （P<0.05， P<0.01）； small intestinal propulsion rate and MTL in Coptidis Rhizoma high-dose group were significantly lower （P<0.05）. Conclusion High-dose Coptidis Rhizoma leads to “spoiling appetite”， and low-dose Coptidis Rhizoma leads to “invigorating stomach”， which may be related to adjusting gastrointestinal motility directly or adjusting the secretion of gastrointestinal hormones.

Key words： Coptidis Rhizoma； spleen deficiency； gastrointestinal motility； MTL； GAS； rats

黃連始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性味苦寒，其單方、復(fù)方及主要提取物被廣泛用于治療脾胃病。然而黃連治療脾胃病又有“小劑量健胃，大劑量敗胃”之說。黃連的“健胃”“敗胃”主要來自于“苦寒健胃”“苦寒?dāng)∥浮钡恼f法。中醫(yī)認(rèn)為小量苦寒藥能健益脾胃，使脾胃功能正常發(fā)揮。由于苦能燥濕，燥傷陰，陰傷則胃無以受納；寒能傷陽，陽傷則脾的運(yùn)化功能受損。因而，大劑量苦寒藥可導(dǎo)致脾胃功能失調(diào)。以往的藥理研究結(jié)果表明，黃連“健胃-敗胃”的量效關(guān)系主要與其對(duì)胃腸動(dòng)力的調(diào)節(jié)有關(guān)[1-2]。本實(shí)驗(yàn)采用勞形與勞神法復(fù)制脾虛模型，探討不同劑量黃連對(duì)脾虛大鼠胃腸動(dòng)力的影響，揭示黃連“健胃”“敗胃”量效的部分本質(zhì)，為臨床合理運(yùn)用黃連提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

2月齡SPF級(jí)健康SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量為（200±10）g，長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司，合格證號(hào)SCKK（吉）2014-0004，飼養(yǎng)于濕度45%～55%、室溫（23±2）℃環(huán)境下。

1.2 藥物

黃連，通遼市藥材公司，批號(hào)分別為20140612、20131209。黃連水煎液制備：精密稱取500 g黃連放入圓底瓶，加10倍量水，浸泡30 min，電熱套加熱，武火煮沸后文火煎煮1 h，收集上清液，藥渣加8倍量水煎煮1 h，收集上清液，藥渣加6倍量水，再煎煮1 h，收集上清液，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至500 mL，即藥液濃度為100%（相當(dāng)1 g原藥材/mL）；多潘立酮片，西安楊森制藥有限公司，批號(hào)20120328。

1.3 主要試劑與儀器

胃動(dòng)素（MTL）試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所；胃泌素（GAS）試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所。r-911全自動(dòng)放免技術(shù)儀，中國(guó)科技大學(xué)中佳公司；TGL-20B型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；電子天平，沈陽龍騰電子有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模

參照文獻(xiàn)[3]方法，采用勞形與勞神制作勞倦過度脾虛模型。大鼠每日游泳至力竭，同時(shí)剝奪睡眠時(shí)間5 h，連續(xù)12 d。實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠毛色、精神狀態(tài)、飲食、大便等一般情況，隔日稱重1次。

2.2 分組及給藥

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、陽性藥組及黃連大、中、小劑量組，每組10只。黃連大、中、小劑量組分別給予黃連藥液20、10、5 g/kg灌胃，陽性藥組給予多潘立酮水溶液5 g/kg灌胃，空白對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。給藥體積均為10 mL/kg，每日1次，造模后第13日開始用藥，連續(xù)14 d。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 大鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率測(cè)定 末次給藥后，所有大鼠禁食不禁水24 h，隨后用含5%炭末和2%CMC-Na的炭末混懸液2.5 mL灌胃，30 min后每只大鼠用1%戊巴比妥鈉1.2 mL麻醉，腹主動(dòng)脈采血3 mL，分別用于制備血清和血漿。脫頸處死大鼠，剖開腹腔，將幽門至回盲部的一段腸管取出并測(cè)量其長(zhǎng)度，此即小腸的總長(zhǎng)度，然后測(cè)出炭末推進(jìn)長(zhǎng)度，即幽門部到炭末前沿的長(zhǎng)度，計(jì)算小腸推進(jìn)率（幽門部到炭末前沿的長(zhǎng)度/小腸總長(zhǎng)度×100%）；然后將大鼠胃賁門和幽門部?jī)啥朔謩e結(jié)扎并稱取胃全重，將胃體剪開（沿胃大彎），將胃內(nèi)殘留物洗凈，濾紙拭干稱重，此即胃凈重，用胃全重減去胃凈重即得胃內(nèi)殘留物質(zhì)量，計(jì)算胃內(nèi)殘留率[4][（胃全重-胃凈重）÷炭末混懸液灌胃總質(zhì)量×100%]。

2.3.2 胃動(dòng)素和胃泌素水平測(cè)定 大鼠腹主動(dòng)脈采血4 mL，置于2只試管中，第1只管2 mL，3000 r/min離心10 min，分離血清，置于-20 ℃冰箱保存，待測(cè)血清GAS；第2只管預(yù)先加入10%EDTA-K2 30 μL、抑肽酶1000 U抗凝，2 mL血加入其中混勻，4 ℃、3000 r/min離心15 min，分離血漿，置于-20 ℃冰箱保存，待測(cè)血漿MTL。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以—x±s表示，多組間比較采用方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 一般狀況

空白對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，毛色有光澤，活動(dòng)度佳，食量正常、大小便正常；模型組大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少，拱背、瞇眼、被毛散亂無光澤、大便稀、攝食量減少、體質(zhì)量減輕等脾虛癥狀；黃連大、中劑量組大鼠上述脾虛癥狀加重；陽性藥組和黃連小劑量組大鼠則食量增加，精神好轉(zhuǎn)，體質(zhì)量增加。

4.2 黃連對(duì)脾虛大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組胃內(nèi)殘留率明顯升高、小腸推進(jìn)率明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組和黃連小劑量組胃內(nèi)殘留率明顯降低（P<0.01），小腸推進(jìn)率明顯升高（P<0.05），黃連大劑量組小腸推進(jìn)率明顯降低（P<0.05）。結(jié)果見表1。

4.3 黃連對(duì)脾虛大鼠胃動(dòng)素和胃泌素水平的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組GAS、MTL水平明顯下降（P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組和黃連小劑量組GAS、MTL水平明顯升高（P<0.05，P<0.01），黃連大劑量組MTL明顯降低（P<0.05），黃連中劑量組MTL、GAS有下降趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表2。

5 討論

脾虛證指脾氣不足、失其健運(yùn)所表現(xiàn)的證候，是脾胃證候中的常見證型，多因素體脾虛、飲食不節(jié)、勞累過度、情志不遂或久病耗傷脾氣所致。脾氣虛證以食少、腹脹、大便溏薄、神疲、肢體倦怠、舌淡脈弱等為常見證候[5]。根據(jù)其病因，目前造模方法很多，如苦寒瀉下法、飲食不節(jié)法、勞倦過度法、外濕困脾法。用大黃苦寒瀉下雖能塑造脾虛模型，但考慮苦寒藥物黃連對(duì)脾胃功能的影響，恐對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，故選用勞形與勞神相結(jié)合的勞倦過度法。此方法簡(jiǎn)單易操作，且模型動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀與脾虛患者臨床表現(xiàn)相似。

近年來，已經(jīng)有關(guān)于黃連“健胃”“敗胃”的實(shí)驗(yàn)研究，如楊氏等[6]連續(xù)14 d給大鼠灌胃生黃連和黃連不同炮制品，結(jié)果顯示，生黃連組動(dòng)物飲水量、飲食量、體質(zhì)量均低于對(duì)照組，認(rèn)為與黃連過服久服損傷脾胃有關(guān)。也有學(xué)者對(duì)黃連“健胃”“敗胃”的機(jī)理進(jìn)行了探討，如有研究發(fā)現(xiàn)過量使用黃連組動(dòng)物的胃排空及胃腸推進(jìn)較正常動(dòng)物減慢[1]。有學(xué)者用大劑量黃連給予大鼠連續(xù)灌胃，發(fā)現(xiàn)動(dòng)物胃黏膜組織MTL含量顯著降低[2]。上述研究表明，黃連“健胃”“敗胃”與胃腸運(yùn)動(dòng)功能密切相關(guān)。胃排空實(shí)驗(yàn)和小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)是研究胃腸運(yùn)動(dòng)功能的基本實(shí)驗(yàn)方法，胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率及炭末排出時(shí)間是反映胃腸運(yùn)動(dòng)功能的基本指標(biāo)。胃腸激素在調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)中起重要作用。MTL屬消化間期激素，其生理功能是促進(jìn)消化道運(yùn)動(dòng)，加速胃排空，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)尤其消化間期移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)有調(diào)節(jié)作用[7]。GAS主要促進(jìn)胃酸分泌、胃竇收縮；促進(jìn)胃蛋白酶和內(nèi)因子分泌，對(duì)胃黏膜細(xì)胞有營(yíng)養(yǎng)及增殖作用[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組胃內(nèi)殘留率明顯升高，小腸推進(jìn)率明顯降低，MTL和GAS水平明顯降低；黃連大劑量組脾虛癥狀加重，胃內(nèi)殘留率有升高趨勢(shì)，小腸推進(jìn)率明顯降低，MTL顯著降低，黃連小劑量組脾虛大鼠精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，體質(zhì)量增加，MTL、GAS顯著升高。本研究提示，黃連大劑量“敗胃”、小劑量“健胃”，其量效機(jī)制可能與直接調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，或通過調(diào)節(jié)胃腸激素的分泌間接調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)有關(guān)。

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