羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（EG95）在甘肅地區(qū)的免疫試驗

賀奮義，陳 昌，高生智，劉全元，張福亨，馬胡賽，劉志軍，史萬貴，潘永紅，劉 旭，詹 芳

（1．甘肅省動物疫病預防控制中心，蘭州730046；2．甘肅省甘南州瑪曲縣動物疫病預防控制中心，瑪曲747300；3．甘肅省甘南州碌曲縣動物疫病預防控制中心，碌曲747200；4．甘肅省慶陽市環(huán)縣動物疫病預防控制中心，環(huán)縣745700）

羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（EG95）在甘肅地區(qū)的免疫試驗

賀奮義1，陳 昌1，高生智1，劉全元1，張福亨2，馬胡賽3，劉志軍4，史萬貴1，潘永紅1，劉 旭1，詹 芳1

（1．甘肅省動物疫病預防控制中心，蘭州730046；2．甘肅省甘南州瑪曲縣動物疫病預防控制中心，瑪曲747300；3．甘肅省甘南州碌曲縣動物疫病預防控制中心，碌曲747200；4．甘肅省慶陽市環(huán)縣動物疫病預防控制中心，環(huán)縣745700）

甘肅省是全國包蟲病疫區(qū)省份之一，多年來人間、畜間包蟲病流行嚴重。為了驗證羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗在甘肅地區(qū)使用的安全性和免疫效果，2015年用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，在甘肅省甘南州的瑪曲縣、碌曲縣和慶陽市的環(huán)縣3個點進行了免疫試驗，同時采取首免前、二免前及免后90 d的羊血分離血清，采用羊棘球蚴Eg95包被的ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測。結(jié)果表明：試驗組首免前羊棘球蚴抗體陽性率0.99%～11.63%；二免前陽性率73.13%～85.57%；首免后90 d陽性率81.54%～98.44%。對照組首免前羊棘球蚴抗體陽性率為0；二免前陽性率0～5.71%；首免后90 d陽性率11.11%～20.00%。羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗反應在羊只品種上有差異：山羊上有反應，而藏綿羊上無反應。

棘球蚴（包蟲）病；基因疫苗；免疫試驗；疫苗反應

棘球蚴?。╡chinoeoccosis）又稱包蟲病（hydatidosis），是由帶科（Taeniidae）棘球?qū)伲‥chinococcus）的棘球絳蟲（Echinococcus granulosus）的中絳期幼蟲寄生于動物和人的肝、肺及其他器官內(nèi)所引起的一種人獸共患病，農(nóng)業(yè)部將其列為二類動物疫病。甘肅省是全國包蟲病疫區(qū)省份之一，多年來人間、畜間包蟲病流行嚴重。為了驗證羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗在甘肅地區(qū)使用的安全性和免疫效果，筆者等以包蟲病多發(fā)地區(qū)、養(yǎng)羊大縣、牧區(qū)和農(nóng)區(qū)相結(jié)合的選點原則，選擇甘肅省甘南州瑪曲縣、碌曲縣和慶陽市環(huán)縣3個點進行免疫試驗，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

1.1.1 綿羊 選擇甘南州瑪曲縣、碌曲縣的2～4月齡藏羊羔羊，首次免疫日期定為2015年6月13日，飼養(yǎng)方式為自然放牧。

1.1.2 山羊 選擇慶陽市環(huán)縣的2～4月齡絨山羊羔羊，首次免疫日期定為2015年7月28日，飼養(yǎng)方式為舍飼圈養(yǎng)。

1.1.3 分組 在瑪曲縣進行了試驗組（100只）與對照組（40只）的設(shè)立，碌曲縣進行了試驗組（43只）與對照組（10只）的設(shè)立，環(huán)具進行了試驗組（70只）與對照組（10只）的設(shè)立。

1.2 疫苗

為重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)的羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，生產(chǎn)批號：20140910；生產(chǎn)日期：20140908；50頭份/瓶，有效期12個月。

1.3 免疫程序與免疫方法

首免后1個月進行二免（即間隔4周進行二免）。按瓶簽注明頭份，每頭份疫苗兌1 mL滅菌生理鹽水的比例進行稀釋，每只羔羊頸部皮下注射1 mL，稀釋后疫苗限3 h內(nèi)用完。

1.4 免疫效果評價

1.4.1 安全性評價 現(xiàn)場觀察免疫動物10 min，確定有無疫苗反應。

1.4.2 免疫抗體監(jiān)測

1.4.2.1 分離血清 羊在一免前、二免前、首免后90 d分別采血3次，分離血清，冷藏運輸1～2d，冷凍保存7～90d。

1.4.2.2 抗體檢測 用重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)的羊棘球蚴（包蟲）病ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測；樣品OD450nm≤0.3±0.05，判為陰性；樣品OD450nm＞0.3± 0.05，但≤0.6±0.05，判為弱陽性；樣品OD450nm＞0.6± 0.05，判為陽性。

2 結(jié)果

2.1 疫苗安全性

藏綿羊基本無疫苗反應，山羊發(fā)現(xiàn)有疫苗反應，具體表現(xiàn)為全群精神萎靡，飲食欲廢絕，步態(tài)僵硬或不同程度的跛行，大多羊免疫部位無異常，有少量免疫羊注射部位輕微腫脹，有反應羊只約50%，部分羊尾巴下垂。檢測8只羊體溫，分別在39.5～41.8℃之間。認為是疫苗注射引起的應激反應，故及時采取了以下補救措施：全群羊飲水中添加黃芪多糖、維生素C，自由飲用；跛行羊肌內(nèi)注射安痛定；重癥羊肌內(nèi)注射地塞米松2 mL，靜脈注射10%萄葡糖250～500 mL；加強消毒和飼養(yǎng)管理，跟蹤觀察。采取補救措施后3～5 d，反應羊只逐漸好轉(zhuǎn)。

2.2 免疫效果檢測

試驗組：一免前陽性率為4.67%，二免前為80.00%，免后90 d為89.00%。甘南州瑪曲縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為0.99%、85.57%、87.65%；甘南州碌曲縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為11.63%、73.13%、81.54%；慶陽市環(huán)縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為5.71%、78.69%、98.44%。

對照組：一免前陽性率為0，二免前為3.70%，免后90 d為17.31%。甘南州瑪曲縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為0、5.71%、20.00%。甘南州碌曲縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蟲幼抗體ELISA檢測陽性率分別為0、0、12.50%。慶陽市環(huán)縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蟲幼抗體ELISA檢測陽性率分別為0、0、11.11%。見表1～4。

表1 免疫效果檢測

表2 甘南州瑪曲縣免疫效果檢測

表3 甘南州碌曲縣免疫效果檢測

表4 慶陽市環(huán)縣免疫效果檢測

3 討論與分析

（1）試驗組二免后血清中羊棘球蚴抗體陽轉(zhuǎn)率可達81.54%～98.44%，且3個試驗點羊棘球蚴抗體陽轉(zhuǎn)率均可達到80%以上；而對照組抗體陽性率最高為20.00%。這與他人的試驗結(jié)果基本一致。如張壯志等［1］以綿羊包蟲病基因工程疫苗（His-EG95）對新生新疆細毛羊、山羊和巴音布魯克羊進行兩次免疫，結(jié)果顯示二免后人工感染保護率均達到82.2%以上，最高保護率為89%。據(jù)朱興全［2］等報道，宿主免疫后攻擊原頭蚴時，抗體滴度越高，攻擊感染后包囊越少，表明抗體滴度與免疫保護之間存在明顯正相關(guān)關(guān)系。

（2）本試驗結(jié)果表明，試驗組與對照組之間血清中羊棘球蚴抗體陽轉(zhuǎn)率在相同時間內(nèi)差異顯著。隨著時間的推移，對照組血清中羊棘球蚴抗體陽轉(zhuǎn)率呈現(xiàn)增高趨勢，即由一免前0.00%提高到90 d時的20.00%。不同品種羊只的疫苗免疫反應有差異，山羊有免疫反應，而藏綿羊則無反應。

（3）試驗對照組綿羊包蟲病感染17.31%，比詹芳等［3］調(diào)查的甘肅省部分地區(qū)綿羊包蟲自然感染率9.68%要高近一倍，分析可能原因是選點所造成的。

［1］ 張壯志，石保新，張文寶.綿羊包蟲病基因工程疫苗（Eg95）免疫試驗［J］.中國人畜共患病學報，2008，24（3）：252-256.

［2］ 朱興全，竇蘭清，史曉紅，等.細粒棘球絳蟲排泄分泌抗原研究——六鉤蚴排泄分泌抗原的免疫原性［J］.中國獸醫(yī)科技，1991，21（9）：6-9.

［3］ 詹芳，史萬貴，劉全元，等.甘肅省部分地區(qū)家畜包蟲病感染情況調(diào)查［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015，34（6）：73-74.

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.02.013

S852.7

A

2095-3887（2016）02-0048-03

2015-12-11

甘肅省科技重大專項（1203NKDA017）；甘肅省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項目（GNCX-2013-43）

賀奮義，男，研究員，大學本科，碩士生導師。

高生智，男，高級獸醫(yī)師，主要從事寄生蟲防控工作。