青霉素對尿蛋白定性檢測的影響

徐源

摘要：目的 探討青霉素對尿蛋白定性檢測的影響，以做好尿液檢測質(zhì)控為臨床醫(yī)生提供可靠的檢驗報告。方法 用干化學(xué)法、磺基水楊酸法和加熱乙酸法檢測一定濃度青霉素的蛋白尿。結(jié)果 尿蛋白濃度0.5g/L，青霉素濃度2.0萬U/ml時干化學(xué)法尿蛋白檢測出現(xiàn)陽性減弱；青霉素濃度2.0萬U/ml時，磺基水楊酸法尿蛋白檢測出現(xiàn)假陽性；青霉素對加熱乙酸法無干擾。結(jié)論 青霉素會導(dǎo)致干化學(xué)法蛋白檢測產(chǎn)生假陰性；磺基水楊酸法產(chǎn)生假陽性，對加熱乙酸法無干擾。

關(guān)鍵詞：尿蛋白；干化學(xué)法；磺基水楊酸法；加熱乙酸法；青霉素

The Effect of Penicillin on the Qualitative Detection of Urinary Protein

XU Yuan

（Department of Clinical Laboratory，Dazhou District Hospital of Traditional Chinese Medicine，Dazhou 635000，Sichuan，China）

Abstract：Objective In order to perfect the general quality control of urine detection and provide reliable results；we designed an experiment to find the influence of urine protein detection on the dosage of penicillin.Methods We used three ways to make the urine detection，including dry chemistry method，urine protein，sulfosalicylic acid method and heat and acetic acid method.Results False negative result appears when urine protein concentration is 0.5 g/L；penicillin is 20000 units per milliliter with dry chemistry method，and with sulfosalicylic acid method，false positive result appears when the penicillin concentration is 20000 units per milliliter.No impact is made on heat and acetic acid method.Conclusion On some dosage of penicillin，false positive result will be made with sulfosalicylic acid method and false negative result with dry chemistry method.Heat and acetic acid method can rule out false results.

Key words：Urine protein；Dry chemistry method；Sulfosalicylic acid method；Heat and acetic acid method；Penicillin

尿液蛋白質(zhì)檢測是腎臟疾病診斷和治療的重要指標(biāo)之一。當(dāng)腎臟出現(xiàn)腎小球，腎小管疾病時，尿蛋白常呈異常增高。故尿蛋白的檢測對某些疾病的診斷，特別是泌尿系統(tǒng)疾病的診治具有重要意義。臨床上主要有三種方法對尿蛋白進(jìn)行定性檢測，包括pH指示劑蛋白質(zhì)誤差法（干化學(xué)法）、磺基水楊酸法（Sulfosalicylic Acid，SSA）以及加熱乙酸法。

青霉素為臨床常用的抗生素，其腎毒性較小，注射后幾乎全部以原型的形式從尿中排出。叢玉隆等報道[1-3]大劑量的青霉素對尿蛋白的定性檢測有干擾作用，但同時對3種蛋白定性方法進(jìn)行研究的較少。本實驗將探討青霉素對臨床上常用的三種尿蛋白定性檢測方法的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 試劑：清蛋白2.0 g（Albumin Bovine V，Amresco 0332）、注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號：J3076102）、200 g/L磺基水楊酸、5%乙酸溶液、選取健康學(xué)生尿液標(biāo)本1000 ml。

1.2器材 優(yōu)利特-200A尿液分析儀（桂林市醫(yī)療電子儀器廠），11聯(lián)試紙條（桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司，批號：56150638）

1.3方法 配置蛋白尿，見表1。1～5號蛋白尿分別設(shè)置A-F共6支平行試管，加入溶解的青霉素鈉，形成青霉素終濃度分別為0、0.5萬U/ml、1萬U/ml、2萬U/ml、5萬U/ml、10萬U/ml。用干化學(xué)法檢測每個標(biāo)本，對導(dǎo)致干化學(xué)法出現(xiàn)假陰性結(jié)果的尿液采用磺基水楊酸和加熱乙酸法進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果

2.1青霉素對干化學(xué)法尿蛋白定性檢測的影響，見表2。尿蛋白濃度為0.5 g/L，青霉素濃度為2萬U/ml時尿蛋白檢測開始出現(xiàn)陽性程度減弱；尿蛋白濃度為1 g/L和2 g/L，青霉素濃度為5萬U/ml時尿蛋白檢測出現(xiàn)假陰性；而尿蛋白濃度為5 g/L，青霉素濃度為5萬U/ml時尿蛋白開始出現(xiàn)陽性程度減弱；所有濃度的蛋白尿在青霉素濃度為10萬U/ml時，干化學(xué)結(jié)果都為假陰性。

2.2青霉素對SSA尿蛋白定性檢測的影響 蛋白濃度為0g/L，青霉素濃度為2萬U/ml時，SSA法檢測出現(xiàn)假陽性。

2.3青霉素對加熱乙酸法尿蛋白定性檢測的影響 不同劑量的青霉素對加熱乙酸法尿蛋白定性檢測均無影響。

3 討論

尿液蛋白質(zhì)檢測是腎臟疾病診斷和治療的重要指標(biāo)之一。正常情況下，由于腎小球濾過膜的孔徑屏障和電荷屏障的作用，以及腎小管的重吸收作用，終尿中的蛋白質(zhì)含量很少，尿蛋白定性試驗陰性。而當(dāng)腎臟出現(xiàn)腎小球，腎小管疾病時，尿蛋白常呈異常增高。故尿蛋白的檢測對某些疾病的診斷，特別是泌尿系統(tǒng)疾病的診治具有重要意義。目前臨床上檢測尿蛋白的定性方法有干化學(xué)法、SSA法和加熱乙酸法。由于干化學(xué)法檢測方便、快速，且可進(jìn)行大批次的檢測，臨床上應(yīng)用極為廣泛；但檢驗人員常常忽視干化學(xué)法干擾因素多，易產(chǎn)生假性結(jié)果等缺點，導(dǎo)致出現(xiàn)實驗結(jié)果與臨床不符合時，不能正確解釋和處理。

根據(jù)實驗結(jié)果提示：①所用干化學(xué)試紙條對清蛋白檢測的靈敏度和精密度比SSA法差，如1.0 g/L的蛋白尿，SSA檢測為+，而干化學(xué)法為±；且后者對1.0 g/L和2.0 g/L的蛋白尿檢測結(jié)果皆為++；這與《臨床檢驗基礎(chǔ)（第五版）》[4]描述相同。②青霉素對干化學(xué)法尿蛋白定性檢測能造成假陰性結(jié)果，且蛋白濃度越低，干擾越大，這與鄭杰等[4]研究結(jié)果吻合。③青霉素對SSA法造成假陽性的結(jié)果，這與多位研究者看法一 致[1，5]；④加熱乙酸法不受到青霉素的干擾。我們從尿蛋白定性檢測的原理來分析上述實驗結(jié)果：①干化學(xué)法檢測尿蛋白采用pH指示劑蛋白質(zhì)誤差法，是指在pH 3.2的條件下，酸堿指示劑四溴酚藍(lán)產(chǎn)生的陰離子與帶陽離子的蛋白質(zhì)結(jié)合生成復(fù)合物，引起指示劑進(jìn)一步電離，當(dāng)超越緩沖范圍時，指示劑發(fā)生顏色改變，顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比；而青霉素有與蛋白質(zhì)相似的結(jié)構(gòu)，亦可與指示劑四溴酚藍(lán)結(jié)合，且反應(yīng)速度快、親和力強，競爭性抑制白蛋白與四溴酚藍(lán)的結(jié)合，使試劑模塊顏色變淡或呈無色，從而造成假陰性。②SSA法檢測原理為在略低于蛋白質(zhì)等電點的酸性環(huán)境下，磺基水楊酸根離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽離子結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而沉淀，沉淀量或溶液反應(yīng)后的渾濁程度，可反應(yīng)蛋白質(zhì)的含量；而青霉素存在與蛋白質(zhì)氨基相似的苯乙酰氨基結(jié)構(gòu)[5]，因此可以與磺酸根離子發(fā)生相似沉淀反應(yīng)，造成假陽性。③加熱乙酸法通過加熱使蛋白質(zhì)變性，加稀乙酸使尿液pH接近蛋白質(zhì)等電點（pH 4.7），并使得變性凝固的蛋白質(zhì)進(jìn)一步沉淀；因此青霉素對其的影響很小。

檢驗人員應(yīng)了解各檢測方法的適用情況，注重臨床工作中方法的選擇目的出發(fā)，進(jìn)一步明確青霉素對三種尿蛋白定性試驗的影響，尿蛋白過篩實驗的首選試驗是SSA法，確證實驗是加熱乙酸法；另一方面若患者服用大劑量青霉素等藥物，臨床醫(yī)生應(yīng)向檢驗人員說明服用劑量及時間，或者讓患者幾小時后再采集尿液標(biāo)本進(jìn)行尿液檢測，以提高結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性。

臨床工作中，隨著抗生素的研制與發(fā)展，現(xiàn)多使用二代、三代頭孢菌素類抗生素取代青霉素類為主要的抗菌藥，頭孢菌素類抗生素對尿蛋白等尿液常規(guī)檢查項目是否有影響，后期可以設(shè)計相關(guān)實驗進(jìn)行研究探索；另一方面也應(yīng)該注意尿蛋白的種類在不同腎臟疾病及不同階段是有所變化的，如腎小球疾病早期以清蛋白為主，隨著病情的發(fā)展會出現(xiàn)大分子球蛋白，甚至出現(xiàn)小分子蛋白質(zhì)，而干化學(xué)法對白蛋白靈敏，對球蛋白靈敏度僅為白蛋白的1/100～1/50[4]，因此明確不同方法對不同蛋白質(zhì)的靈敏度也是進(jìn)一步研究應(yīng)該考慮的問題。檢驗人員只有對所用方法的原理和影響因素有深刻的理解才能在工作中正確使用并合理解釋結(jié)果，從而幫助臨床醫(yī)生進(jìn)行正確的診斷和治療相關(guān)疾病。

參考文獻(xiàn)：

[1]叢玉隆，楊建良.大劑量青霉素對尿蛋白定性結(jié)果影響的探討[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1994，17（3）：167-168.

[2]李惠敏，楊紅英，鮮玉萍.干化學(xué)試紙法做尿蛋白定性的影響因素[J].成都醫(yī)藥，1999，25（2）：98.

[3]鄭杰，趙亞妮，安蓉.青霉素對干化學(xué)法檢測尿蛋白的影響[J].實用醫(yī)技雜志，2005，12（7）：1867-1868.

[4]劉成玉，羅春麗.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：144-145.

[5]楊寶峰.藥理學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：385.

編輯/羅茗柯