Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達及臨床意義

盧 葵，徐艷超，姚俊霞

(復旦大學附屬中山醫(yī)院青浦分院病理科，上海 青浦 201700)

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Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達及臨床意義

盧 葵，徐艷超，姚俊霞*

(復旦大學附屬中山醫(yī)院青浦分院病理科，上海 青浦 201700)

目的 探討Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達及其與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，分析Notch 1與VEGF兩者之間的相關(guān)關(guān)系。方法 應用免疫組織化學技術(shù)檢測85例結(jié)直腸癌和41例癌旁正常黏膜組織Notch 1蛋白和VEGF蛋白的表達，并分析它們與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 結(jié)直腸癌中Notch 1和VEGF 蛋白的陽性表達率分別為63.5%和60.0%，顯著高于癌旁結(jié)直腸黏膜組織中的12.2%(P=0.000)和19.5%(P=0.000)。在結(jié)直腸癌中，Notch 1和VEGF的表達與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，Notch 1的表達與腫瘤的分化程度相關(guān)。Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達呈正相關(guān)(r=0.526，P<0.01)。結(jié)論 Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中呈高表達且互相相關(guān)，提示兩者在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起促進和協(xié)同作用。

結(jié)直腸癌；Notch 1；VEGF

結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一，Jemal等[1]報道美國結(jié)直腸癌5年存活率65%，但遠處轉(zhuǎn)移存活率僅11%。由于結(jié)直腸癌起病隱匿，早期常無明顯的臨床表現(xiàn)，確定為結(jié)直腸癌后，大約50%～60%的患者會發(fā)生轉(zhuǎn)移[2]。因此，積極研究結(jié)直腸癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移機制，仍然十分重要。Notch信號通路是一條決定細胞命運、保守而重要的信號傳導通路，近年來人們相繼發(fā)現(xiàn)Notch信號通路在一些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起一定作用。已有研究證實，Notch 1蛋白的異常表達與T淋巴細胞急性淋巴細胞白血病[3]、宮頸癌[4]、膠質(zhì)瘤[5]、乳腺癌[6]、胰腺癌[7]、肺癌[8]等腫瘤的發(fā)病有一定作用，進一步發(fā)現(xiàn)Notch 1也與一些腫瘤血管生成密切相關(guān)[9]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial gsowth factor,VEGF)是一種重要的腫瘤血管生成調(diào)控因子，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究證實Notch 1在結(jié)直腸癌中是過表達，對結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展起促進作用[10]。本研究通過免疫組織化學技術(shù)檢測結(jié)直腸癌組織中Notch 1、VEGF的表達，探討Notch 1與VEGF在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中相關(guān)關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取復旦大學附屬中山醫(yī)院青浦分院2014年1月至2015年6月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的結(jié)直腸癌85例，其中男52例，女33例；年齡41～83歲(中位年齡63歲)；高分化腺癌22例，中分化腺癌34例，低分化腺癌29例；34例腫瘤直徑≥5cm，51例腫瘤直徑≤5cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例；按TNM分期，I期12例，II期25例，III期37例，IV期11例。另留取41例相應結(jié)直腸癌癌旁正常組織。所有患者術(shù)前均未行放療或化療。

1.2 主要試劑及方法 羊抗人Notch 1抗體(編號：SC-6014-R)，小鼠抗人VEGF抗體(編號：ZM-0265)為Santcruz公司產(chǎn)品，各種SP試劑、DAB顯色試劑盒為北京中杉金橋公司產(chǎn)品。組織標本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，應用免疫組織化學SP法檢測組織中Notch 1、VEGF的表達。步驟按試劑盒說明書操作。用已知陽性的切片作對照，PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判讀 Notch 1蛋白在結(jié)直腸癌細胞中廣泛定位于細胞膜和細胞質(zhì)，VEGF蛋白定位于細胞質(zhì)和(或)細胞膜。由兩位病理科醫(yī)生在未知臨床病理資料情況下獨立檢測，取平均值。高倍鏡下隨機選5個視野(每個視野不少200個細胞)，采用半定量計分法進行判定，按染色強度與陽性細胞百分比的乘積計分。①按染色強度評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；②按陽性細胞百分比評分：0分為陰性，1分為陽性細胞≤10%，2分為陽性細胞11%～50%，3分為陽性細胞51%～75%，4分為陽性細胞>75%；③染色強度與陽性細胞百分比的乘積>3分為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件行統(tǒng)計學處理。計數(shù)資料采用卡方檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 Notch 1、VEGF在結(jié)直腸癌和癌旁正常組織中的表達 在85例結(jié)直腸癌組織中，免疫組化染色檢測顯示，Notch 1蛋白及VEGF在結(jié)直腸癌細胞中廣泛定位于細胞膜和細胞質(zhì)，兩者陽性表達均呈棕黃色顆粒狀，定位清晰，組織背景非特異性反應微弱，見圖1(封二)。其中Notch 1和VEGF陽性率分別為63.5%(54/85)和60.0%(51/85)。對照組癌旁結(jié)直腸黏膜組織中Notch 1和VEGF陽性率分別為12.2%(5/41，P=0.000)和19.5%(8/41，P=0.000)，差異有統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌及癌旁組織中的表達

2.2 Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達與臨床參數(shù)的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中Notch 1的陽性表達與腫瘤的分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。VEGF的陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無關(guān)(P>0.05)，見表2。

表2 Notch 1和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達與臨床參數(shù)的關(guān)系

2.3 Notch 1與VEGF表達的相關(guān)性 對Notch 1與VEGF在結(jié)直腸癌的陽性表達，進行Spreaman等級相關(guān)分析，結(jié)果顯示Notch 1與VEGF在結(jié)直腸癌中的表達有正相關(guān)性(r=0.526，P<0.01)，見表3。

表3 Notch 1與VEGF在結(jié)直腸癌中表達的相關(guān)性

3 討 論

經(jīng)典的Notch信號通路由Notch受體、配體、初級效應分子及下游靶基因組成，Notch受體為分子量約300kD的單次跨膜蛋白。哺乳動物有4種Notch受體，即Notch 1～4，其中Notch 1研究較多，Notch 1的異常表達在腫瘤的發(fā)病中起一定作用，并且在腫瘤血管生成中起重要作用。本研究表明Notch 1在結(jié)直腸癌中高表達，并與腫瘤組織分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與Chu等人[11-12]的研究結(jié)果一致。

VEGF是1989年由Ferral[13]在牛垂體濾泡星狀細胞培養(yǎng)液中分離純化的一類糖蛋白。大量研究表明，VEGF是一個重要的腫瘤轉(zhuǎn)移促進基因。本研究提示，VEGF在結(jié)直腸癌中高表達，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，與以往研究結(jié)果一致。

VEGF與Notch 1在一些腫瘤中常常是共表達的，然而Notch 1與VEGF之間互相作用仍不明確，Wang等[7]在胰腺癌細胞中證實下調(diào)Notch 1，可以下調(diào)NF-κβ、VEGF，進而抑制胰腺癌細胞的侵襲力，提示VEGF是Notch 1信號通路下游靶點。而在血管生成過程中，VEGF作為Notch信號上游調(diào)控因子，可誘導動脈內(nèi)皮細胞上Notch 1和DLL4的表達[14]。在結(jié)直腸癌抗血管生成治療上，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Notch 1高表達的患者總生存期明顯下降[15]，提示在腫瘤血管形成，Notch 1與VEGF可能存在協(xié)同作用。本研究發(fā)現(xiàn)Notch 1與VEGF在結(jié)直腸癌中的表達存在正相關(guān)，提示它們在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起促進和協(xié)同作用，協(xié)同作用可能體現(xiàn)在腫瘤血管的生成上。深入研究Notch 1信號通路與VEGF的互相作用機制，有助于探索新的抗腫瘤血管生成方法。

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Expression and Clinical Significance of Notch 1 and VEGF in Colorectal Cancer

LU Kui,XU Yan-chao,YAO Jun-xia

(DepartmentofPathology,QingpuBranchofZhongshanHospitalAffiliatedtoFuDanUniversity，QingbuShanghai201700,China)

Objective To investigate the expression of Notch 1 and VEGF in colorectal cancer and their relationship with the clinical pathological features of colorectal cancer,and to analyse correlation between Notch 1and VEGF.Methods The protein expressions of Notch 1 and VEGF of 85 colorectal cancer tissue samples and 41 normal tissue samples adjacent to colorectal cancer were detected by Immunohistochemical method,and the relationship between them and the clinical pathological parameters was analyzed.Results The positive rates of Notch 1 and VEGF protein in colorectal cancer(n=85cases) were 63.5% and 60% respectively,which was significantly higher than that in normal tissues adjacent to colorectal cancer(12.2% and 19.5%)(P=0.000).In colorectal cancer,the positive experssions of Notch 1 and VEGF were relevant to TNM stage and lymphatic metastasis(P<0.05)，and the positive expression of Notch 1 was relevant to differentiation.The protein expressions of Notch 1 and VEGF were positively correlated(r=0.526,P<0.01).Conclusion Notch 1 and VEGF are highly expreesed in colorectal cancer and correlated each other，suggestting the two may have a stimulative and synergetic effect in the occurrence and development of colorectal cancer.

Colorectal cancer;Notch 1;VEGF

,E-mail:jxyao2001@163.com

R735.37

A

2095-4646(2016)05-0381-03

10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.05.0381

2016-03-06)