• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雷公藤甲素脂肪乳的制備及其體外性質研究

    2015-03-08 05:32:36毛玉玲王淑君
    中國藥劑學雜志(網絡版) 2015年4期
    關鍵詞:脂肪乳甲素油相

    李 雪,毛玉玲,李 凱,程 丹,王淑君*

    (1. 沈陽藥科大學 中藥學院,遼寧 沈陽 110016;2. 沈陽藥科大學 藥學院,遼寧 沈陽 110016)

    雷公藤甲素脂肪乳的制備及其體外性質研究

    李 雪1,毛玉玲1,李 凱2,程 丹2,王淑君2*

    (1. 沈陽藥科大學 中藥學院,遼寧 沈陽 110016;2. 沈陽藥科大學 藥學院,遼寧 沈陽 110016)

    目的確定雷公藤甲素脂肪乳的處方及制備工藝,并對其體外性質進行考察。方法采用高壓勻質法制備雷公藤甲素脂肪乳,單因素和正交設計法考察制備工藝及處方;采用激光粒度測定儀測定其粒徑及電位;采用超濾離心法測定包封率;采用可見分光光度法對其進行體外溶血性評價。結果制備的雷公藤甲素脂肪乳劑外觀呈白色乳狀,粒徑為(154.6±8.3) nm;平均電位為(-0.903±0.024) mV;包封率可達到85%以上;溶血率均小于5%。結論高壓勻質法可用于雷公藤甲素脂肪乳的制備,并且所獲得的脂肪乳劑性質良好。

    藥劑學;脂肪乳;高壓勻質法;雷公藤甲素;包封率;溶血試驗

    雷公藤甲素(triptolide,TP)是從衛(wèi)矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. F. )中分離出的活性最高的環(huán)氧二萜內酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一,具有免疫抑制、抗炎、抗生育及抗腫瘤等多種藥理活性[1]。在臨床上廣泛應用于治療風濕類疾病、器官移植、腎病、哮喘和腫瘤。近年來,廣泛的抗腫瘤作用使雷公藤甲素受到極大關注,其不僅可以抑制體外多種癌細胞的增殖,還能夠抑制體內實體瘤的生長和轉移[2-3]。但是由于雷公藤甲素的低水溶性及其對胃腸道、腎臟、造血系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)的毒性及不良反應使其臨床應用受到限制[4-5]。

    脂肪乳作為一種新型的載藥體系,是脂溶性藥物的良好載體,具有增溶和降低藥物不良反應等特點。同時,藥物被包裹于油相或油水界面層中,避免與體液直接接觸,降低刺激性。脂肪乳中油的種類、乳滴粒徑及表面電荷電性等因素直接影響靜脈乳劑的體內分布,并且具有一定的靶向性,能夠使其更好地發(fā)揮療效,降低藥物的毒性及不良反應[6]。由此可見,脂肪乳劑是雷公藤甲素靜脈給藥的良好載體。

    1 儀器與材料

    高效液相色譜儀(紫外SPD-10A 檢測器, LC-15C液相泵,日本Shimadzu 公司),pH計(上海宇隆儀器有限公司),TGL-18C-C快速離心機(上海安亭科學儀器廠),SCQ2201超聲波清洗器(上海聲彥超聲波儀器有限公司),分析天平(TG328A,上海精密科學儀器有限公司),DF-101S集熱式恒溫磁力攪拌器(鞏義市英峪予華儀器廠),AH100D高壓勻質機(加拿大 ATS公司),Mastersizer-2000-激光粒度電位測定儀(英國Malvern儀器公司),UV-2000紫外可見分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司)。

    雷公藤甲素(triptolide,TP,南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司),大豆磷脂(磷脂酰膽堿含量質量分數≥98%,上海太偉醫(yī)藥科技有限公司),油酸、注射用大豆油(LCT)、中鏈油(MCT)(中航鐵嶺藥業(yè)),F68(德國BASF公司),無水乙醇(分析純,天津富宇精細化工有限公司),甲醇、乙腈(色譜純,天津康科德科技有限公司),其他試劑(分析純,市售)。

    2 方法與結果

    2.1 雷公藤甲素脂肪乳的制備

    將處方量雷公藤甲素和磷脂分散于注射用油、油酸中,于 80 ℃加熱磁力攪拌下溶解均勻,得澄清得含藥油相;將處方量甘油、F68、EDTA分散于適量注射用水中,于80 ℃加熱磁力攪拌使分散均勻得水相。在高速組織搗碎機攪拌下(1×104r·min-1)迅速將水相加入到油相中,高速剪切10 min,制得均勻初乳。初乳冷卻至室溫,以0.1 mol·L-1氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)溶液pH值,注射用水稀釋至全量,轉移至高壓勻質機中,800 bar勻質8次。裝瓶,充氮,密封,121 ℃熱壓蒸汽滅菌10 min,取出后于冷水浴中迅速冷卻。

    2.2 雷公藤甲素脂肪乳制備工藝的考察

    2.2.1 初乳制備溫度的選擇

    磷脂存在相轉化溫度,在其相轉化溫度為70~80 ℃內制備的乳劑粒徑較小,也比較穩(wěn)定[7];而在高溫時油相的黏度較低,外部施加的剪切力所作的功較小,利于乳化。因此采用 80 ℃為水相、油相的制備溫度。

    2.2.2 藥物加入方法的考察

    不同藥物制備載藥型脂肪乳的方法和技術各不相同,一般情況下制備載藥型脂肪乳的方法是將脂溶性藥物與乳化劑直接溶解于油相中,利用兩步乳化法進行制備。但是,在本實驗中,若將藥物與磷脂直接加入到油相中,80 ℃加熱攪拌1 h后仍不能溶解完全,說明藥物與磷脂未完全溶解于油相中,且高溫長時間的溶解對藥物的化學穩(wěn)定性也很不利。因此,本研究中將藥物與磷脂先溶解于適量無水乙醇中,然后揮干乙醇加入油相,藥物與磷脂溶解迅速而完全,能夠得到澄清的載藥油相,避免磷脂和藥物長時間加熱而引起的降解。

    2.2.3 高壓勻質壓力和次數的考察

    脂肪乳的粒徑大小及分布是影響制劑物理穩(wěn)定性的重要因素,而高壓勻質過程對粒徑大小和粒徑分布影響很大,因此,本實驗對高壓勻質操作參數進行了優(yōu)化。勻質壓力的考察范圍為 600~1 000 bar,每個樣品勻質8次,結果見圖1A。在確定最佳勻質壓力后,根據所確定的勻質壓力勻質4~12次,進行勻質次數的考察,結果見圖1B。

    Fig. 1 Influence of different homogenization pressures on particle size of TP-LE(A) and different cycle times on particle size of TP-LE (B)±s, n=3)圖1 不同勻質壓力對雷公藤甲素脂肪乳粒徑的影響(A)和不同勻質次數對雷公藤甲素脂肪乳粒徑的影響(B)

    由圖1A可見,隨著勻質壓力的不斷增加,TP-LE的粒徑逐漸減小,當壓力達到800 bar時,進一步增加壓力,粒徑基本不再降低,而代表粒徑分布的PDI值卻有增大趨勢??紤]到較高的勻質壓力需要更多的能量消耗,同時在較大的勻質壓力下進行高壓勻質易出現制劑過熱而影響制劑的穩(wěn)定性,因此,將制備TP-LE的高壓勻質壓力確定為800 bar。由圖1B可見,在高壓勻質壓力為800 bar時,隨著勻質次數的增加,TP-LE的平均粒徑都逐漸減小,當勻質次數達到8次以后,繼續(xù)增加勻質次數,粒徑不再減小,而代表粒徑分布的PDI值卻有增大趨勢,因此,將制備TP-LE的高壓勻質次數確定為8次。

    2.2.4 pH值的考察

    pH值是影響制劑物理穩(wěn)定性的重要因素之一,臨床常用的脂肪乳注射液pH值多在5~8內,而雷公藤甲素在酸性條件下較穩(wěn)定,堿性條件下降解明顯,在pH值為6時降解最慢。本實驗分別考察了pH值為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0時TP-LE的物理和化學穩(wěn)定性。實驗發(fā)現,pH值在5.0~7.0內乳劑滅菌前后的物理穩(wěn)定性均較好,進一步對制劑的化學穩(wěn)定性進行了考察,不同 pH值的脂肪乳劑滅菌后的藥物含量變化見圖2。結果表明,pH值為6時藥物含量最高,化學穩(wěn)定性最好。考慮到TP-LE的滅菌穩(wěn)定性及人體的耐受性,最終確定滅菌前以0.1 mol·L-1氫氧化鈉將TP-LE的pH值調為5.5~6.0。

    Fig. 2 Influence of pH value on the content of TP-LE圖2 pH值對雷公藤甲素脂肪乳含量的影響

    2.3 正交試驗設計處方優(yōu)化

    油相和乳化劑是脂肪乳處方中重要的組成部分,油相的組成和比例直接影響脂肪乳的溶解性能、外觀和粒徑分布,乳化劑直接影響脂肪乳乳化過程,進而影響制劑的物理化學穩(wěn)定性。本實驗對脂肪乳處方組成中油相比例、磷脂、F68及油酸的用量進行了正交設計優(yōu)化,各因素安排見表1。

    Table 1 Factors and levels of the orthogonal design表1 正交設計試驗表

    采用L9(34)正交設計進行處方篩選,按表2所示制備雷公藤甲素脂肪乳后,以外觀和粒度測定結果為指標進行處方篩選,以粒徑均勻且較小為好。

    Table 2 Investigation on the optimum conditions for preparing TP-LE by orthogonal design表2 雷公藤甲素脂肪乳處方正交設計優(yōu)化

    Continued table 2

    根據表2中極差值(R)可知,各因素對粒徑影響的主次順序是B>C>A>D,說明磷脂和F68的用量對TP-LE影響最為顯著,其次是油相比例和油酸用量。由此得出各因素最佳組合為A3B3C2D2。通過分析正交設計表及綜合因素篩選得最優(yōu)處方為(質量分數):LCT為2.5%、MCT為7.5%、磷脂為2.4%、F68為0.2%和油酸為0.05%。

    2.4 雷公藤甲素脂肪乳穩(wěn)定性研究

    以雷公藤甲素脂肪乳粒徑、含量、包封率、pH值為指標,對雷公藤甲素脂肪乳進行穩(wěn)定性考察。

    2.4.1 滅菌穩(wěn)定性考察

    制備3批雷公藤甲素脂肪乳樣品分別裝瓶、充氮、密封,121 ℃熱壓蒸汽滅菌10 min,取出后于冷水浴中迅速冷卻,滅菌后進行各項理化性質檢查和測定,與滅菌前相比較,結果見表 3。結果表明,雷公藤甲素脂肪乳滅菌穩(wěn)定性良好。

    Table 3 Results of TP-LE autoclave test表3 雷公藤甲素脂肪乳滅菌穩(wěn)定性考察

    2.4.2 凍融穩(wěn)定性考察

    將滅菌后的3批雷公藤甲素脂肪乳樣品于-20 ℃條件下凍融3次循環(huán),凍融后的脂肪乳樣品進行理化性質檢查和測定,與凍融前相比較,結果見表 4。結果表明,雷公藤甲素脂肪乳凍融穩(wěn)定性良好。

    Table 4 Results of freeze-thaw stability表4 雷公藤甲素脂肪乳凍融穩(wěn)定性考察

    2.4.3 加速穩(wěn)定性考察

    將滅菌后的3批雷公藤甲素脂肪乳樣品于 (40±2) ℃加速試驗3個月,進行理化性質檢查和測定,與加速試驗前相比較,結果見表5。結果表明,雷公藤甲素脂肪乳穩(wěn)定性良好。

    Table 5 Results of accelerated stability表5 雷公藤甲素脂肪乳加速穩(wěn)定性考察

    2.5 雷公藤甲素脂肪乳處方工藝的確定

    雷公藤甲素脂肪乳的處方為:雷公藤甲素12.5 mg、油相(LCT-MCT質量分數比為2.5∶7.5)10 g、磷脂2.4 g、油酸50 mg、F68 0.2 g、甘油2.5 g和EDTA50 mg,制成100 mL。

    雷公藤甲素脂肪乳的制備工藝:稱取處方量注射用油(LCT-MCT質量分數比2.5∶7.5)、油酸于80 ℃下攪拌分散均勻得油相,稱取處方量雷公藤甲素、磷脂于適量無水乙醇中,80 ℃下攪拌至完全溶解,揮盡乙醇,加入油相,80 ℃下繼續(xù)攪拌,得澄清含藥油相;稱取處方量甘油、F68、EDTA加至適量注射用水中,80 ℃下磁力攪拌使溶解,分散均勻得水相;在高速組織搗碎機攪拌下(1×104r·min-1)迅速將水相加入到油相中,高速剪切10 min,制得均勻初乳;將初乳冷卻至室溫,以0.1 mol·L-1氫氧化鈉調節(jié)溶液pH值至5.5~6.0,注射用水稀釋至全量,轉移至高壓勻質機中,800 bar勻質8次,制得終乳;將所得終乳裝瓶、充氮、密封,于121 ℃熱壓蒸汽滅菌10 min,取出后于冷水浴中迅速冷卻即得雷公藤甲素脂肪乳。

    2.6 雷公藤甲素脂肪乳粒徑及zeta電位的測定

    將按“2.5”條方法制備的雷公藤甲素脂肪乳過0.22 μm微孔濾膜,注射用水稀釋500倍,采用Mastersizer-2000-激光粒度分析儀測定其粒徑大小及分布。制備的雷公藤甲素脂肪乳劑為均一穩(wěn)定而帶有淡藍色乳光的均勻分散體系,其粒徑分布在(154.6±8.3) nm,PDI值為(9.3±0.8)×10-2;以Mastersizer-2000-激光粒度分析儀測定其電位,平均電位為(-0.903±2.4×10-2) mV。

    2.7 雷公藤甲素脂肪乳的含量及包封率考察

    2.7.1 含量測定

    以雷公藤甲素為指標,采用HPLC法測定雷公藤甲素脂肪乳中雷公藤甲素的含量。

    色譜條件:色譜柱為Kromasil C18柱 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相為乙腈-水(體積比40∶60),流速為1 mL·min-1,檢測波長為220 nm,進樣量為20 μL,柱溫為室溫。

    取0.1 mL雷公藤甲素脂肪乳劑置于10 mL量瓶中,用甲醇破乳稀釋并定容至刻度。用0.22 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液20 μL注入高效液相色譜儀,以外標一點法測定雷公藤甲素脂肪乳中雷公藤甲素含量。HPLC法測定3批雷公藤甲素脂肪乳中雷公藤甲素含量質量分數均在98%以上。

    2.7.2 包封率考察

    采用超濾離心法測定雷公藤甲素脂肪乳包封率,分別測定脂肪乳劑中藥物總量及水相中藥物含量,由以下公式計算包封率(EE%):w(EE) =(ρtotalVtotal-ρwaterVwater)/ρtotalVtotal×100%。

    式中ρtotal為脂肪乳中藥物總質量濃度(g·L-1);Vtotal為脂肪乳總體積(L);ρwater為水相中藥物質量濃度(g·L-1);Vwater為水相體積(L)。

    藥物總量的測定:按“2.7.1”條色譜條件測定脂肪乳劑中藥物總量。

    水相中藥物含量測定:精密吸取雷公藤甲素脂肪乳液2 mL置于截留分子質量為1×104u的超濾離心管中,4 000 r·min-1離心15 min,重復3次,取濾液20 μL注入高效液相色譜儀,測定水相中藥物含量。

    包封率計算:按上式計算3批雷公藤甲素脂肪乳包封率,結果表明雷公藤甲素脂肪乳包封率質量分數均大于85%。

    2.8 雷公藤甲素脂肪乳體外溶血試驗

    紅細胞懸液的配制:取新鮮家兔耳緣靜脈血5 mL,置燒杯中,玻璃棒攪拌除去纖維蛋白原,1 000 r·min-1離心10 min,除去上清液,沉淀的紅細胞用生理鹽水輕輕搖勻,洗滌數次,直至上清液不顯紅色為止,棄去上清液,用生理鹽水配制體積分數為2%的紅細胞懸液。

    溶血試驗:取潔凈試管7支,1~5號管為供試品,按表6依次加入體積分數2%紅細胞懸液、生理鹽水、雷公藤甲素脂肪乳注射夜;6號管為陰性對照;7號管為陽性對照?;靹?~7號管,置(37±0.5)℃恒溫水浴中溫浴。3 h后取樣,1 000 r·min-1離心10 min,取上清液適當稀釋后,以蒸餾水為對照,于波長545 nm處測定吸光度,按下式計算溶血率:HD=(As-An-ATP-LE)/(A0-An)×100%。

    式中:As為供試品吸光度、An為陰性對照品吸光度、Ao為陽性對照品吸光度、ATP-LE為雷公藤甲素脂肪乳樣品吸光度。表6結果表明各管雷公藤甲素脂肪乳的溶血率均小于5%。

    Table 6 Design and results of hemolysis test of TP-LE表6 雷公藤甲素脂肪乳溶血試驗設計及結果

    3 討論

    a. 脂肪乳的制備受到許多因素的影響,其中工藝參數包括藥物加入方法、pH值的調節(jié)、高壓勻質壓力和次數;處方因素包括油相的組成和比例、乳化劑的選擇及用量等。脂肪乳注射液油相最初主要是選擇植物來源的長鏈甘油三酯(LCT),如大豆油、玉米油等。雖然 LCT脂肪乳能夠為患者提供必需的脂肪酸和能量,但LCT進入線粒體代謝需依賴于肉毒堿轉運,氧化代謝速度慢,長期使用可能對機體免疫功能有抑制作用。中鏈甘油三酯(MCT)分子質量較小,有較大的水溶性及較低的 pKa值,不需依賴肉毒堿即可進入線粒體進行快速氧化,在血液循環(huán)中的清除速度較快,不易在肝臟中蓄積。但不足之處是不能提供必需的脂肪酸,應用純MCT可引起代謝性酸中毒和神經系統(tǒng)不良反應。所以根據正交試驗設計結果將LCT與MCT按照質量分數2.5∶7.5比例進行物理混合后所制備的脂肪乳能夠達到揚長避短的效果[8-9]。磷脂是最常用的天然乳化劑,具有良好的乳化性能,無毒且生物相容性好。但對于載藥型脂肪乳來說,單一的乳化劑并不足以維持脂肪乳的穩(wěn)定,通常將磷脂與F68合用,制備載藥脂肪乳注射液以增加制劑的穩(wěn)定性[10]。油酸能夠促進磷脂、F68分子間的相互作用,形成復合膜[11];同時能夠增加分子間作用力及乳滴表面靜電電荷,進而增大界面膜的穩(wěn)定性。作者通過正交設計考察最終確定油相組成為LCT與MCT的質量分數比為2.5∶7.5,磷脂用量的質量分數為2.4%,F68用量的質量分數為0.2%,油酸用量的質量分數為0.05%。

    b. 超濾離心法是常見的藥物測定包封率的方法,本文作者利用該法成功分離出脂肪乳中水相,由于藥物主要包裹于油相和油水界面層中,處方組成中其水相的體積占總體積的90%,通過測定水相中藥物含量和脂肪乳中藥物總量,計算脂肪乳包封率。該法操作簡單、快速、重現性好。

    c. 注射藥物的安全性評價是藥物安全性試驗的一個重要組成部分,溶血試驗結果表明不同濃度的雷公藤甲素脂肪乳并未產生溶血現象,不會導致紅細胞發(fā)生溶血和凝聚反應,為臨床安全用藥提供重要依據。

    參考文獻:

    [1] LIU Qiu-yan. Triptolide and its expanding multiple pharmacological functions [J]. International Immunopharmacology, 2011, 11 (3): 377-83.

    [2] YANG Shan-min, CHEN Jing-uo, GUO Zhen, et al. Triptolide inhibits the growth and metastasis of solid tumors [J]. Mol Cancer Ther, 2003, 2: 65-72.

    [3] CHUGH R, SANGWAN V, PATIL S P, et al. A preclinical evaluation of minnelide as a therapeutic agent against pancreatic cancer [J]. Sci Transl Med, 2012, 4: 139-156.

    [4] SHAMON L A, PEZZUTO J M, GRAVES J M, et al. Evaluation of the mutagenic, cytotoxic, and antitumor potential of triptolide, a highly oxygenated diterpene isolated from Tripterygium wilfordii [J]. Cancer Lett, 1997, 112: 113-117.

    [5] SUN Xin, ZHANG Su-min, TIAN Chun-hua, et al. Safety of Tripterygium wilfordii[J]. Chin J New Drugs, 2001, 10: 539-543.

    [6] 陸斌. 藥物新劑型與新技術[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2002: 53-54.

    [7] YU Ye-ling, LU Yan, TANG Xing, et al. Formulation preparation and evaluation of an intravenous emulsion containing brucea javanica oil and coix seed oil for anti-tumor application [J]. Biol Pharm Bull, 2008, 31: 673-680.

    [8] SMYRNIOTIS V E, KOSTOPANAGIOTOU G G, ARKADOPOULOS N F, et al. Long-chain versus medium-chain lipids in acute pancreatitis complicated by acute respiratory distress syndrome: effects on pulmonary hemodynamics and gad exchange [J]. Clin Nutr, 2001, 20: 139-143.

    [9] 曹新偉. 脂肪乳劑的特點和應用[J]. 腹部外科, 2000, 13(4):206-208.

    [10] GROVES M J, WINEBERG M, BRAIN A P R. The presence of liposomal material in phosphatide stabilized emulsions [J]. J Dispersion Sci Technol, 1985, 6: 237-243.

    [11] LEVY M, SEHUTZE W, FUHRER C, et al. Characterization of diazepam submicron emulsion interface: role of oleic acid [J]. J Microencapsulation, 1994, 11: 79-92.

    Preparation and characterization of triptolide-loaded lipid emulsion

    LI Xue1, MAO Yu-ling1, LI Kai2, CHENG Dan2, WANG Shu-jun2*
    (1. School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China; 2. School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)

    ObjectiveTo optimize the formulation and preparation of triptolide-loaded lipid emulsion (TP-LE) and investigate its characterization in vitro.MethodsTP-LE was prepared by a high-pressure homogenization method. The preparation technology and formulation were investigated by single factor exploration and orthogonal design. The particle size and zeta potential were determined by a laser scattered particle analyzer. The ultrafiltration centrifugation method was used to determine drug entrapmentefficiency (EE%) of triptolide in TP-LE. UV-VIS spectrophotometry was used for in vitro hemolytic evaluation.ResultsThe prepared TP-LE was milky white in appearance, with particle size of (154.6±8.3) nm; zeta potential of (-0.903±0.024) mV; EE% of >85%; hemolysis ratio of <5%.ConclusionsHigh-pressure homogenization method can be used to prepare triptolide-loaded lipid emulsion for i.v. administration, and the character of TP-LE was pretty good.

    Pharmaceutics; Lipid emulsion; High-pressure homogenization method; Triptolide; Entrapment efficiency; Hemolysis test

    R94

    :A

    (本篇責任編輯:趙桂芝)

    (2015)04-0134-10

    10.14146/j.cnki.cjp.2015.04.003

    2015-02-12

    李雪(1990-), 女(漢族), 遼寧沈陽人, 碩士研究生,,E-mail lixuelixue75@163.com; *

    : 王淑君(1972-), 女(漢族), 遼寧沈陽人, 教授, 博士, 博士生導師, 主要從事藥物制劑研究, Tel. 024-23986360, E-mail 1252116911@qq.com。

    猜你喜歡
    脂肪乳甲素油相
    脂肪乳在藥物中毒解救中的應用研究
    改性銨油炸藥油相加注裝置的設計
    煤礦爆破(2020年3期)2020-12-08 04:39:14
    結構脂肪乳對老年直腸癌患者術后營養(yǎng)狀況和免疫球蛋白水平的影響
    燈盞甲素在大鼠腦缺血再灌注損傷模型的PK-PD結合模型研究
    一種對稀釋、鹽度和油相不敏感的低界面張力表面活性劑配方
    儲運油泥中非油相組分對表觀黏度的影響分析
    應用Box-Behnken設計優(yōu)選虎耳草軟膏劑成型工藝
    分析漢防己甲素治療塵肺的療效及對免疫功能的影響
    根本原因分析法在新生兒靜脈輸注脂肪乳外滲不良事件中的應用
    連續(xù)4周口服雷公藤甲素對大鼠血紅素加氧酶的影響
    久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产极品天堂在线| 国产成年人精品一区二区| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产91av在线免费观看| 亚洲欧美日韩东京热| 神马国产精品三级电影在线观看| 精品久久国产蜜桃| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久99热6这里只有精品| 亚洲三级黄色毛片| 国产极品精品免费视频能看的| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 一级毛片久久久久久久久女| 国产中年淑女户外野战色| 欧美一级a爱片免费观看看| 99久久九九国产精品国产免费| 中文欧美无线码| 亚洲无线在线观看| 久久精品久久久久久久性| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产三级中文精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产成人影院久久av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 乱人视频在线观看| 日本黄色片子视频| 日本熟妇午夜| 婷婷六月久久综合丁香| 国产黄片视频在线免费观看| 99热这里只有精品一区| 尾随美女入室| 精华霜和精华液先用哪个| 听说在线观看完整版免费高清| 乱系列少妇在线播放| av黄色大香蕉| 插逼视频在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 秋霞在线观看毛片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久热精品热| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久久久久久久大av| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 中出人妻视频一区二区| 内射极品少妇av片p| 村上凉子中文字幕在线| 久久6这里有精品| 99久国产av精品| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国内揄拍国产精品人妻在线| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品蜜桃在线观看 | 久久久久久久午夜电影| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美人与善性xxx| 久久国产乱子免费精品| а√天堂www在线а√下载| 亚洲欧美精品综合久久99| 伊人久久精品亚洲午夜| www.色视频.com| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国国产精品蜜臀av免费| 可以在线观看的亚洲视频| 久久这里有精品视频免费| 日韩一本色道免费dvd| 一级毛片电影观看 | 成年av动漫网址| 看十八女毛片水多多多| 国产亚洲91精品色在线| 国产真实乱freesex| 99精品在免费线老司机午夜| 久久人人精品亚洲av| 深爱激情五月婷婷| 成人亚洲精品av一区二区| 伦理电影大哥的女人| 99久久精品热视频| 精品人妻熟女av久视频| 中文字幕av在线有码专区| 日韩精品青青久久久久久| 一级毛片电影观看 | 99久久成人亚洲精品观看| 欧美区成人在线视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 春色校园在线视频观看| 久久久久久久久中文| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲不卡免费看| 一个人看的www免费观看视频| 丰满的人妻完整版| 能在线免费观看的黄片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| av天堂在线播放| 免费观看人在逋| 国产精品久久久久久久久免| 在线观看66精品国产| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国内精品宾馆在线| 亚洲国产精品合色在线| 日韩制服骚丝袜av| 可以在线观看的亚洲视频| 久久久欧美国产精品| 欧美日本亚洲视频在线播放| av视频在线观看入口| 别揉我奶头 嗯啊视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 国产乱人偷精品视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 欧美区成人在线视频| 亚洲18禁久久av| 亚洲国产精品成人久久小说 | 岛国在线免费视频观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲国产欧美人成| 午夜精品国产一区二区电影 | а√天堂www在线а√下载| 欧美高清性xxxxhd video| 精品不卡国产一区二区三区| 久久久久久大精品| 国产91av在线免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久久久久久久丰满| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 一进一出抽搐动态| 三级经典国产精品| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 在线观看66精品国产| 国产亚洲91精品色在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 在线a可以看的网站| 日韩欧美三级三区| 国产精品一二三区在线看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久中文看片网| 午夜爱爱视频在线播放| 少妇高潮的动态图| 亚洲内射少妇av| a级毛色黄片| www.av在线官网国产| 精品一区二区免费观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 草草在线视频免费看| 久久国内精品自在自线图片| 国产午夜精品论理片| 热99在线观看视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产精品爽爽va在线观看网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产成人精品久久久久久| 色综合站精品国产| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久久久久久久久免费av| 国产一区二区激情短视频| 美女高潮的动态| 婷婷亚洲欧美| 色哟哟·www| 欧美3d第一页| 人妻夜夜爽99麻豆av| 18禁在线播放成人免费| 国产久久久一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| or卡值多少钱| 丝袜喷水一区| 国产 一区精品| 中国美女看黄片| 免费人成在线观看视频色| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲四区av| 亚洲无线观看免费| 久久久成人免费电影| av女优亚洲男人天堂| 国产伦在线观看视频一区| www.色视频.com| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久鲁丝午夜福利片| 在线免费观看的www视频| 热99re8久久精品国产| 国产毛片a区久久久久| 亚洲av免费在线观看| 日韩一区二区三区影片| 亚洲第一区二区三区不卡| 嫩草影院精品99| 国产久久久一区二区三区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 青青草视频在线视频观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成人三级黄色视频| 可以在线观看的亚洲视频| 婷婷亚洲欧美| 淫秽高清视频在线观看| 中文字幕免费在线视频6| 国产成人精品久久久久久| 观看美女的网站| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产av在哪里看| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲成av人片在线播放无| 久久这里只有精品中国| 久99久视频精品免费| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | av女优亚洲男人天堂| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| av黄色大香蕉| 26uuu在线亚洲综合色| 国产精品一区www在线观看| 日本熟妇午夜| 青春草亚洲视频在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 在线观看av片永久免费下载| 最后的刺客免费高清国语| 中文资源天堂在线| 国产成人福利小说| 日本在线视频免费播放| 最好的美女福利视频网| 国产淫片久久久久久久久| 日韩国内少妇激情av| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 天堂网av新在线| 91av网一区二区| 亚洲欧美日韩高清专用| 免费av不卡在线播放| 国产视频首页在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲成人久久爱视频| av天堂中文字幕网| 天美传媒精品一区二区| 国产激情偷乱视频一区二区| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 亚洲三级黄色毛片| 高清日韩中文字幕在线| 国产爱豆传媒在线观看| 午夜精品在线福利| 99视频精品全部免费 在线| 精品久久久久久久久av| 国产高清三级在线| 久久亚洲精品不卡| 久久草成人影院| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲高清免费不卡视频| 岛国毛片在线播放| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲综合色惰| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日本五十路高清| 春色校园在线视频观看| 欧美最新免费一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 久久这里有精品视频免费| 国产精品久久久久久精品电影| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| 中国美女看黄片| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产高清不卡午夜福利| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 级片在线观看| 草草在线视频免费看| 久久精品久久久久久久性| 两个人的视频大全免费| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品.久久久| 嫩草影院精品99| 国产探花在线观看一区二区| 久久久成人免费电影| 国产一级毛片在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 一本久久中文字幕| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 深爱激情五月婷婷| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品三级大全| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲一区二区三区色噜噜| 午夜福利在线观看吧| 日本熟妇午夜| 最近中文字幕高清免费大全6| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 日日撸夜夜添| 欧美高清性xxxxhd video| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久久国产成人免费| av福利片在线观看| 嫩草影院新地址| 久久久欧美国产精品| 天堂√8在线中文| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产一区二区在线观看日韩| 99久国产av精品| 久久99精品国语久久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产免费一级a男人的天堂| videossex国产| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美日韩国产亚洲二区| 欧美性感艳星| 色5月婷婷丁香| 国产一区二区激情短视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产乱人视频| 久久精品夜色国产| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 麻豆乱淫一区二区| 最好的美女福利视频网| 干丝袜人妻中文字幕| av天堂在线播放| 亚洲人与动物交配视频| 男人舔奶头视频| 亚洲成人久久爱视频| 色哟哟哟哟哟哟| 一本久久中文字幕| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲最大成人中文| 一个人免费在线观看电影| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产成人福利小说| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产视频首页在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲欧洲日产国产| 18+在线观看网站| a级毛片免费高清观看在线播放| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产亚洲91精品色在线| 国产精品野战在线观看| 九九热线精品视视频播放| 久久这里有精品视频免费| 少妇的逼好多水| 日韩大尺度精品在线看网址| 少妇的逼好多水| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品日韩av在线免费观看| 99热精品在线国产| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日韩欧美在线乱码| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲在久久综合| 精品免费久久久久久久清纯| 黄色一级大片看看| 色播亚洲综合网| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲性久久影院| 欧美一区二区亚洲| 国产成人一区二区在线| а√天堂www在线а√下载| 国产成人freesex在线| 日本免费a在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 岛国在线免费视频观看| 波野结衣二区三区在线| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美区成人在线视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产精品成人久久小说 | 亚洲av不卡在线观看| 久久国产乱子免费精品| 亚洲美女搞黄在线观看| 美女黄网站色视频| 欧美潮喷喷水| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩成人伦理影院| 免费看美女性在线毛片视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品久久久久久精品电影| 日韩欧美国产在线观看| 久久精品影院6| a级一级毛片免费在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久中文看片网| 天堂网av新在线| 床上黄色一级片| 人人妻人人看人人澡| 嫩草影院精品99| 久久久久久久久久成人| av卡一久久| 波野结衣二区三区在线| 久久午夜亚洲精品久久| 国产三级中文精品| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品久久久久久精品电影| 最近最新中文字幕大全电影3| 日韩三级伦理在线观看| 赤兔流量卡办理| 成人漫画全彩无遮挡| 搞女人的毛片| 性插视频无遮挡在线免费观看| 99视频精品全部免费 在线| 日本欧美国产在线视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产v大片淫在线免费观看| 久久亚洲精品不卡| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 18+在线观看网站| 日本免费a在线| 色综合色国产| 99久国产av精品国产电影| 日韩欧美 国产精品| 亚洲人与动物交配视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲不卡免费看| 99热只有精品国产| 99久久精品一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产成人freesex在线| 六月丁香七月| 悠悠久久av| 少妇熟女欧美另类| 五月伊人婷婷丁香| 真实男女啪啪啪动态图| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品不卡视频一区二区| 免费人成视频x8x8入口观看| 永久网站在线| 国产视频内射| 国产伦精品一区二区三区视频9| 日本三级黄在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 极品教师在线视频| 天天一区二区日本电影三级| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 天堂影院成人在线观看| 美女大奶头视频| 51国产日韩欧美| av在线蜜桃| 免费观看的影片在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美日本视频| 国产成人福利小说| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品一及| 在线播放国产精品三级| 久久这里只有精品中国| 特大巨黑吊av在线直播| 中文欧美无线码| 麻豆乱淫一区二区| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久网色| 国产精品久久久久久久电影| 精品久久久久久久末码| 看免费成人av毛片| 免费大片18禁| kizo精华| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 九九爱精品视频在线观看| 亚洲18禁久久av| 国产亚洲精品av在线| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲中文字幕日韩| 久久久久性生活片| 日韩制服骚丝袜av| 成人午夜精彩视频在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国内精品美女久久久久久| 久久久久性生活片| www.色视频.com| 久久这里有精品视频免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产麻豆成人av免费视频| av免费观看日本| av在线老鸭窝| 18禁在线播放成人免费| 一级黄片播放器| 精品人妻视频免费看| 国产乱人偷精品视频| 久久精品综合一区二区三区| 国产毛片a区久久久久| 99久国产av精品国产电影| 最好的美女福利视频网| 国产在视频线在精品| 亚洲无线在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品一区www在线观看| av国产免费在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品女同一区二区软件| 在线观看66精品国产| 亚洲人与动物交配视频| 久久亚洲精品不卡| 成人午夜精彩视频在线观看| 夜夜爽天天搞| 国产爱豆传媒在线观看| 99热这里只有精品一区| 床上黄色一级片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲自拍偷在线| 真实男女啪啪啪动态图| 青青草视频在线视频观看| 高清午夜精品一区二区三区 | 国产蜜桃级精品一区二区三区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 三级国产精品欧美在线观看| 久久草成人影院| 精品午夜福利在线看| 成人永久免费在线观看视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 又爽又黄a免费视频| 淫秽高清视频在线观看| 国产老妇女一区| a级毛色黄片| 国产精品,欧美在线| 国产午夜精品论理片| 午夜免费激情av| 久久99精品国语久久久| 真实男女啪啪啪动态图| 午夜亚洲福利在线播放| 国内精品美女久久久久久| 国产v大片淫在线免费观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 国产精品爽爽va在线观看网站| .国产精品久久| 韩国av在线不卡| av免费在线看不卡| 特级一级黄色大片| 久久久色成人| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜视频国产福利| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲真实伦在线观看| 丝袜喷水一区| а√天堂www在线а√下载| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久亚洲精品不卡| 亚洲成av人片在线播放无| 一本久久中文字幕| 日本色播在线视频| 天堂网av新在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 男女啪啪激烈高潮av片| 99久久人妻综合| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 少妇高潮的动态图| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产私拍福利视频在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 欧美日韩精品成人综合77777| 国内精品久久久久精免费| 日日干狠狠操夜夜爽| 大型黄色视频在线免费观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美日韩乱码在线| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产久久久一区二区三区| 成人漫画全彩无遮挡| 精品一区二区三区人妻视频| 九九爱精品视频在线观看| 乱人视频在线观看| 国内精品美女久久久久久| 内地一区二区视频在线| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲电影在线观看av| 欧美极品一区二区三区四区| 久久精品国产清高在天天线| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 国内精品宾馆在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品欧美国产一区二区三| 草草在线视频免费看| 成人永久免费在线观看视频| 简卡轻食公司| 国产私拍福利视频在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 秋霞在线观看毛片| 国产精品一区二区三区四区久久| 网址你懂的国产日韩在线| 桃色一区二区三区在线观看| 长腿黑丝高跟| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| 亚洲无线在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久久久久久久久久丰满|