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    應用鄰二氮雜菲鐵示蹤法研究杜梨對鐵素的轉(zhuǎn)運特征

    2016-11-26 03:55:14吳玉霞趙越覃偉銘何天明
    新疆農(nóng)業(yè)科學 2016年11期
    關(guān)鍵詞:總鐵杜梨樹干

    吳玉霞,趙越, 覃偉銘, 何天明

    (1. 新疆農(nóng)業(yè)大學林學與園藝學院,烏魯木齊 830052;2.新疆巴音郭楞蒙古自治州沙依東園藝場,新疆庫爾勒 841000)

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    應用鄰二氮雜菲鐵示蹤法研究杜梨對鐵素的轉(zhuǎn)運特征

    吳玉霞1,趙越1, 覃偉銘2, 何天明1

    (1. 新疆農(nóng)業(yè)大學林學與園藝學院,烏魯木齊 830052;2.新疆巴音郭楞蒙古自治州沙依東園藝場,新疆庫爾勒 841000)

    【目的】因缺鐵而產(chǎn)生的葉片失綠黃化,是新疆塔里木盆地鈣質(zhì)土壤上栽培的庫爾勒香梨的一種嚴重生理性病害。研究滴注鐵肥治療法,為矯治果樹缺鐵黃化病提供有效措施。【方法】研究以鄰二氮雜菲與硫酸亞鐵生成的桔紅色螯合物為示蹤劑,模擬檢測滴注施鐵后在杜梨樹體根系和樹干部位木質(zhì)部汁液中的鐵素轉(zhuǎn)運速度和濃度分布特點?!窘Y(jié)果】供試樹有紅色鐵液部位,有效鐵含量和總鐵含量分別高于對照供試樹(7.5%~435.1%)和(10.2%~341.9%)。樹干滴注實驗中鐵素在樹干木質(zhì)部的向樹冠上轉(zhuǎn)移速度要大于向根系下移速度(49.00%),且鐵素濃度隨著轉(zhuǎn)移路程的延長,其稀釋效應表現(xiàn)明顯,根系注射也表現(xiàn)出同樣的規(guī)律。【結(jié)論】在樹干和根系滴注中均發(fā)現(xiàn)了滴注鐵肥在木質(zhì)部內(nèi)發(fā)生的鐵素失活現(xiàn)象。與根系滴注相比,樹干滴注在鐵的運輸距離和抗失活方面優(yōu)勢更明顯。選用樹干滴注的方法矯治果樹缺鐵黃化病。

    杜梨;樹干滴注;根系輸液;鄰二氮雜菲鐵

    0 引 言

    【研究意義】由于新疆南疆綠洲地帶土壤鈣質(zhì)化明顯,土壤溶液pH偏高,土壤中的可溶性鐵常被OH-固定而失活。庫爾勒香梨(以下簡稱香梨)是南疆特別是巴州地區(qū)的特色農(nóng)產(chǎn)品,因當?shù)赝寥烙行цF缺乏而產(chǎn)生的葉片失綠黃化是香梨的一種嚴重生理性障礙[1]。多年的防治經(jīng)驗表明,與葉片噴施鐵肥相比,樹干滴注鐵肥對解決這一生產(chǎn)難題更為有效[2-3]。但輸液時期、藥劑種類和濃度還處于經(jīng)驗階段,缺乏充分的理論支持,存在著潛在風險。所以,通過摸索樹干質(zhì)外體汁液的酸堿度和鐵素濃度以及鐵素轉(zhuǎn)運速度作為人工配制鐵肥的技術(shù)參考在生產(chǎn)中有重要意義。【前人研究進展】目前,香梨的主栽砧木品種是杜梨,其樹冠表現(xiàn)出的葉片黃化特征實際上是與其砧木杜梨對鐵素的低效吸收和運轉(zhuǎn)密切相關(guān)的[1-2]。通過鐵素示蹤技術(shù)研究杜梨樹體中的鐵素的運轉(zhuǎn)特征對完善香梨黃化病矯治技術(shù)具有現(xiàn)實意義。薛進軍等[4]通過自制的鄰二氮雜菲鐵和同位素59Fe研究了蘋果黃化病缺鐵失綠癥的矯正途徑和機理。熊志勛等[5]用59Fe同位素研究了鐵鹽在蘋果砧木和接穗部位的運輸特征?!颈狙芯壳腥朦c】59Fe同位素示蹤技術(shù)與鄰二氮雜菲鐵比較而言,雖然在研究鐵在不同部位的分配方面優(yōu)勢明顯,但在定量分析時不及鄰二氮雜菲鐵簡單易行[4]。研究采用鄰二氮雜菲鐵示蹤技術(shù)比較樹干滴注和根系輸液后,鐵素在杜梨樹體木質(zhì)部的移動速度以及濃度變化特征。【擬解決的關(guān)鍵問題】研究以鄰二氮雜菲與硫酸亞鐵生成的桔紅色螯合物為示蹤劑,模擬檢測滴注施鐵后在杜梨樹體根系和樹干部位木質(zhì)部汁液中的鐵素轉(zhuǎn)運速度和濃度分布特點。研究目的在于通過鄰二氮雜菲鐵示蹤技術(shù)優(yōu)化鐵肥樹干滴注技術(shù)參數(shù)以矯治香梨黃化病。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    試材為6年生的杜梨,藥劑為自制的硫酸亞鐵(5.99×103mol/L)+0.1%鄰二氮雜菲反應生成的鄰二氮雜菲鐵,以此作為Fe2+的示蹤劑,調(diào)pH值至4.3左右[4]。

    1.2 方 法

    1.2.1 鄰二氮雜菲鐵示蹤試驗

    共設(shè)2個處理,以單株作為處理小區(qū),每個處理重復兩次。(1)樹干滴注:選取4株生長勢一致的供試杜梨植株,2株為對照,2株作滴注處理。在處理株主干光滑部位(高出地面約40 cm),鉆三個直徑為0.8 cm、深2 cm左右的注射孔,使用滴注袋注入500 mL鄰二氮雜菲鐵示蹤劑[4](圖I-2)。吊袋高度距地面200 cm。(2)根系輸液:試材選取同樹干滴注。2株為對照,2株為處理。在處理株距地面15 cm處的主根部位打孔(圖I-3),注入500 mL鄰二氮雜菲鐵示蹤劑,每20 min通過鉆孔方法探測鄰二氮雜菲鐵溶液上升和下移行程,直至滴注結(jié)束為止。吊袋高度同樹干滴注。在注液處理結(jié)束后整株刨出處理株,對局部扒皮處理,解剖觀察,并分段采集樹干樣品,測定各部位總鐵含量和有效鐵含量。對照株也進行相同部位鐵素的測定。為了比較方便,將干基測定的結(jié)果通過測量含水率折算成鮮基表達。對所有處理和對照總鐵含量和有效鐵含量求平均值并進行統(tǒng)計分析。圖1

    1.2.2 杜梨莖干有效鐵和總鐵含量的測定

    采集樹干樣品后,分別選擇主干、主枝、當年生枝條等不同部位進行標記。分部位將樣品編號,采集后鮮樣稱重、粉碎,供有效鐵含量測量。測定方法為用0.1 mol/L HCl在常溫下提取鮮樣24 h(樣品與提取劑之比為1∶100)。用鄰二氮雜菲鐵顯色,721分光光度計比色檢測各樣品有效鐵。余下樣品稱重后放入75 ℃鼓風烘箱中烘干,24 h后再次稱重,計算含水率。進行全鐵的測定,方法為干灰化法消煮,鄰二氮雜菲鐵溶液顯色,用721分光光度計比色,比色波長為530 nm。同時制備試樣空白并配制標準曲線[6]。

    1.2.3 鐵肥在樹干和根系中的運輸速度

    在樹干和根系滴注時對不同樹干位點進行鉆孔和扒皮觀察,結(jié)合分段的樣品標本,通過木屑樣品的顏色和出現(xiàn)部位測量了鐵肥在樹干中的運輸路程,并結(jié)合輸液時間計算了樹干和根系滴注兩種處理下的鐵肥轉(zhuǎn)運速度。單株小區(qū),重復兩次,計算平均值。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

    對采集的數(shù)據(jù)利用軟件IBM SPSS Statistics 19進行統(tǒng)計分析,采用單因素方差分析LSD多重比較以測驗成組平均數(shù)數(shù)據(jù)的差異顯著性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 杜梨植株樹干滴注處理后木質(zhì)部汁液總鐵和有效鐵含量的測定

    在示蹤劑滴注處理后的樹干縱剖面和橫剖面,鐵肥的運輸部位顯示為紅色(圖I-6、7)。根據(jù)樹干紅色液跡的分布部位和濃度可初步判斷外源鐵素在杜梨樹體內(nèi)的濃度變化。紅色液跡空間分布顯示,鄰二氮雜菲鐵溶液被樹體吸收后,主要在緊靠形成層的木質(zhì)部運輸。

    對樹干不同部位鐵素含量的分析也印證了上述判斷。經(jīng)過滴注處理,在紅色液跡特明顯(++)部位,全鐵、有效鐵含量均極顯著高于對照植株(F≥167.148)。如在紅色明顯(+)部位,除1號位和9號有效鐵含量與對照顯著差異外(1.418>F>3.122),其余部位全鐵和有效鐵含量均為極顯著差異(F≥18.241)。

    研究表明,處理植株在非紅色液跡部位全鐵和有效鐵含量在各樣點(圖I-4)差異均不顯著(F≤0.508),該部位全鐵和有效鐵含量實際為鐵素的本底含量。對比分析了滴注液流經(jīng)各部位的鐵素含量和樹干鐵素的本底含量,發(fā)現(xiàn)隨著注射孔距離越遠,無論總鐵或有效鐵,鐵素含量呈現(xiàn)遞減趨勢,且向上運輸?shù)倪f減趨勢高于向下運輸,即反映出明顯的鐵素稀釋效應。而在不做滴注處理的對照植株中,樹干從下到上,無論總鐵或有效鐵,均呈現(xiàn)遞減趨勢,其總體差異極顯著(F>4.94)。圖1,表1

    2.2 杜梨植株根系輸液處理后總鐵和有效鐵含量的測定

    研究表明,當用鮮基表達時,杜梨植株總鐵和有效鐵本底含量表現(xiàn)為樹干低于根系。樹干部分越向上,總鐵含量和有效鐵含量總體上均呈遞減趨勢,且各樣點差異極顯著(F>4.94)。從解剖結(jié)果看,根系輸液和樹干滴注類似,在注射孔向下向上紅色液跡均有分布。從總鐵含量測定來看,根系注射處理的供試樹與對照比較而言,除部位7外,處理樹紅色液跡部位的全鐵含量(部位2-6)極顯著高于對照樹的相同部位(F≥26.224)。杜梨植株有效鐵本底含量也表現(xiàn)出從根系到樹干遞減的相同趨勢。根系輸液處理后,總鐵和有效鐵含量水平有顯著提高,處理樹紅色的部位的有效鐵含量(部位1-7)均極顯著高于對照樹的相同部位(F≥42.893)。在供測的10個部位,全鐵最大差異值為24.3 mg/kg,高出本底含量37.7%(圖I-5-樣點4)。有效鐵含量最大差異值為14.1 mg/kg,高出本底含量44.6%(圖I-5-樣點2)。說明根系滴注輸鐵和樹干輸鐵一樣,可有效提高樹干組織鐵素含量水平。圖1,表2

    表1 杜梨樹干滴注處理后莖干各部位總鐵和有效鐵含量
    Table 1 Total iron and active iron content of different parts of Duli after trunk injection

    部位編號SamplingNo.總鐵含量Totalironcontent(mg/kg·FW)有效鐵含量Activeironcontent(mg/kg·FW)對照CK滴注處理Treatment對照CK滴注處理Treatment1532±38Ee769±32+Bb246±05Dd271±05+Bb2529±51Ee993±19+Cc299±03De426±22+Cc3485±29Cd1214±02++Dd262±20Dd509±03++Cd4445±35Cd1611±26++Ee230±45Dd601±18++De5408±40Bc1270±20++Dd214±17Cc494±07++Cd6425±19Bc2274±11++Ff227±36Cc1003±01++Ef7372±25Bc734±39+Bb184±20Bb309±02+Bb8226±12Aa235±11-Aa115±21Aa106±09-Aa9277±83Ab301±07+Aa107±16Aa130±10+Aa10279±34Ab274±15-Aa104±11Aa108±06-Aa平均值A(chǔ)verage398±37968±18199±19396±08

    注:+:紅色液跡明顯;++:紅色液跡特明顯;-:無紅色液跡。同列不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01),不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05),相同大寫或小寫表示差異不顯著(P>0.05),下同

    Note: +: red signal; ++: obvious red signal; -: no red signal. Colleague different capital letters at same column indicate the significant difference (P< 0.01), the different small letters indicate significant difference (P< 0.05), same uppercases or lowercases indicate no significant difference (P> 0.05), the same as below

    表2 根系輸液后杜梨莖干各部位總鐵和有效鐵含量
    Table 2 Total iron and active iron content of different parts of Duli after root injection

    部位SamplingNo.總鐵含量Totalironcontent(mg/kg·FW)有效鐵含量Activeironcontent(mg/kg·FW)對照CK處理Treatment對照CK處理Treatment1(根部Root)815±27Ee1008±03+Ef337±23Ee414±03+Eg2(根部Root)814±11Ee994±17++Ef316±08Ee457±19++Eg3(根部Root)783±30Ee903±10++De320±30Ee371±03++Df4645±04Dd888±18++De270±02Dd368±07++Df5416±36Cc500±13++Cd187±11Cc229±22++Ce6258±09Bb323±11++Bc129±26Bb220±06++Ce7267±06Bb287±24+Bb110±41Bb160±07+Bc8190±02Aa191±00-Aa74±05Aa76±12-Aa9165±23Aa178±11-Aa62±07Aa71±03-Aa10253±17Bb284±14-Bb114±31Bb116±14-Ab平均值A(chǔ)verage461±17556±12192±18248±10

    注:1. 以鄰二氮雜菲與二價鐵生成穩(wěn)定的桔紅色配合物紅色物質(zhì)(Fe(phen)3)2+)作為鐵素示蹤劑;2. 樹干滴注;3. 根系輸液;4. 樹干滴注后供鐵素檢測的采樣部位;5. 根系輸液后供鐵素檢測的采樣部位;6. 樹干縱剖面,示蹤劑在樹干中的運行情況;7. 樹干橫剖面,不同針孔下示蹤劑形成的C形環(huán);8. 樹干滴注示蹤劑后通過扒皮檢測示蹤劑在樹干中的運行速度

    Note: 1. With red (Fe(phen)3)2+)as dye-trace which is made from O-phenathroline and Fe2+; 2.Trunk infusion; 3.Root infusion; 4.The scheme indicating different sampling positions after trunk infusion; 5.The scheme indicating different sampling positions after root infusion; 6. Longitudinal section of trunk, indicating marker tracing of Phen-Fe in the trunk; 7. Cross-section of trunk, indicating the C-ring of tracing regent under different injection pores; 8. Detecting the speed of dye transportation in the trunk by delivering peel

    圖1 樹干和根系滴注鄰二氮雜菲鐵后研究杜梨樹體對鐵素的轉(zhuǎn)運特征
    Fig.1 Study on iron translocation in Pyrus betulifolia Bunge using marker tracing of Phen-Fe after stunk and root injection

    2.3 鐵肥在樹干中的運輸速度

    研究表明,樹干滴注處理時間平均為90 min,在樹干縱剖面注射孔上下兩個方向均產(chǎn)生了兩條紅色液跡,其中向上紅色液跡長度平均為112 cm,向下紅道長度平均為75 cm。據(jù)此計算出鐵肥平均每10 min向上和向下運輸距離分別為12.4和8.3 cm,折合成小時,其向上和向下運輸速度分別為74.5和50.0 cm/h,上行速度高于下行速度(49.0%)。

    根系輸液處理的總時間為40 min,期間與樹干滴注一樣有紅色液跡向上和向下延伸,向上長度和向下長度分別為70和50 cm,平均每10 min向上和向下上升高度分別為17.5和12.5 cm,運輸速度分別為106.7和75.8 cm/h,上行速度亦高于下行速度(40.8%)。對比兩種輸液方式,無論向上還是向下, 根系輸液較樹干滴注鐵肥的運輸速度明顯加快。表3

    表3 樹干和根系滴注鐵肥后鐵素在杜梨植株樹干中的移動速度
    Table 3 Speed of dye-trace of iron in the stem fluid when iron fertilizer was injected into the trunk

    滴注類型Infusiontype滴注時間Infusiontime(min)上行長度Lengthabove(cm)下行長度Lengthbelow(cm)平均上行速度UpperSpeed(cm/h)平均下行速度Lowerspeed(cm/h)樹干滴注 Trunkinfusion90±5112±1175±4747±44500±41根系滴注 Rootinfusion40±250±570±41067±54758±35

    3 討 論

    3.1 滴注鐵肥在杜梨樹體中的含量變化

    實驗分別在根系和樹干兩個部位通過滴注方式進行了施鐵。鐵素含量檢測表明,樹體出現(xiàn)紅色液跡的部位,全鐵和有效鐵含量較本底含量均顯著提高。其中,樹干滴注全鐵含量提高8.7%~435.1%,有效鐵含量提高10.2%~341.9%,根系滴注全鐵含量提高7.5%~37.7%,有效鐵含量提高15.9%~70.5%。樹干滴注提高鐵含量遠高于根系輸液。

    滴注鐵素后,與本底含量相比,滴注的外源鐵肥增加了樹體有效鐵和總鐵的份額。同時也表明,一部分外源鐵肥轉(zhuǎn)化成了無效鐵。這表明滴注鐵肥在樹干木質(zhì)部內(nèi)發(fā)生了鐵素失活現(xiàn)象,這一現(xiàn)象在樹干和根系滴注中均存在,且失活比例較大。以樹干滴注為例,鐵失活率約27%~96%。在自然狀態(tài)下,已有的研究表明,鐵素在樹體內(nèi)的運輸主要是以檸檬酸鐵螯合物的形成進行的[7]。崔美香等[8]則認為鐵在莖內(nèi)運輸是二價態(tài)。Brown等[9]的試驗表明,以檸檬酸鹽的形式運輸與有效鐵的供應之間正相關(guān)性很強。所以,目前有效鐵和全鐵的檢測手段是否能真實地反映樹體內(nèi)的鐵素存在狀況,還缺乏足夠的來自實驗室的數(shù)據(jù)支持。因此,在樹體施鐵后對黃化癥的矯治效果的評價中應該引入更多與鐵失活相關(guān)的生理因子。

    3.2 滴注鐵肥在樹體內(nèi)的運輸動力、部位和速度

    滴注的鄰二氮雜菲鐵在莖內(nèi)主要是沿靠近形成層的木質(zhì)部向上向下運輸?shù)?。鐵肥運輸?shù)膭恿Τ巫⒁罕旧碇亓Ξa(chǎn)生的壓力外,蒸騰拉力是其主要的運輸運力,另外根壓也貢獻了部分向上運輸?shù)膭恿?。紅色液跡的水平分布表明滴注鐵肥主要在木質(zhì)部導管中完成的。這與Grusak的研究相吻合[10]。雖然受根壓影響,根系滴注后鐵液的向上運輸速度要遠遠高于樹干滴注。但樹干滴注相對根系滴注而言,其滴注點距需求鐵肥的枝葉部位為短。為了避免或減少鐵肥在根系的累積而發(fā)生鐵中毒,同時減少在這一部位的鐵失活而提高施鐵效率,選用樹干滴注矯治缺鐵黃化病更合理。

    研究只是以杜梨為材料獲得的結(jié)果,在香梨-杜梨嵌合體中進行樹干滴注鐵肥是否存在養(yǎng)分截留效應[11],嫁接口對鐵肥運輸速度影響如何,注射孔周圍是否存在鐵肥集中[5,8],通過滴注鐵肥進行香梨黃化病矯治還必需考慮這些問題,下一步研究應以此為關(guān)鍵切入點。

    4 結(jié) 論

    鄰二氮雜菲鐵是樹體鐵肥較好的示蹤劑,能夠清楚地顯示出鐵素在樹體內(nèi)的運輸動態(tài),據(jù)此可直觀地檢測樹體鐵肥的運輸軌跡和運輸速度。鐵素含量檢測表明,樹干滴注鄰二氮雜菲鐵后,全鐵含量提高8.7%~435.1%,有效鐵含量提高10.2%~341.9%,根系滴注鄰二氮雜菲鐵后,全鐵含量提高7.5%~37.7%,有效鐵含量提高15.9%~70.5%??梢?,根系和樹干通過滴注施鐵后,全鐵和有效鐵含量較本底含量均顯著提高,其中樹干滴注效果更明顯。

    滴注的鄰二氮雜菲鐵在樹干內(nèi)主要是沿靠近形成層的木質(zhì)部向上向下運輸?shù)?,其中向上速度大于向下速?在樹干滴注上行速度高于下行速度49.0%,在根系滴注中上行速度高于下行速度40.8%)。根系滴注后的鐵肥的上行、下行速度(分別為106.7 cm/h和75.8 cm/h)均遠高于樹干滴注(分別為74.5 cm/h和50.0 cm/h)。

    在樹干和根系滴注中均發(fā)現(xiàn)了滴注鐵肥在木質(zhì)部內(nèi)發(fā)生的鐵素失活現(xiàn)象:一部分外源鐵肥轉(zhuǎn)化成了無效鐵。

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    Fund project:Supported by the National Science Foundation of China (31160382)and the key discipline foundation for pomology in Xinjiang Uygur Autonomous Region (201007)

    Study on Iron Translocation in Pyrus betulifolia Bunge Using Marker Tracing of Phen-Fe

    WU Yu-xia1, ZHAO Yue1, QIN Wei-ming2, HE Tian-ming1

    (1. College of Forestry and Horticulture, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China;2.ShayidongHorticultureFarm,BayinguolengMongoliaAutonomousPrefecture,KorlaXinjiang841000,China)

    【Objective】 Iron deficient chlorosis is an important nutritional disorder of Korla Fragrant Pear (PyrusBretschneideriRehd) grown in calcareous soil in Southern Xinjiang, China. Infusion of iron fertilizer treatment method is expected to become an effective means for treatment of chlorosis of fruit trees.【Method】With the orange chelate generated by orthophenanthroline and ferrous sulfate as tracer material, a simulation test on the transport velocity and concentration distribution characteristics of iron on each part ofPyrusbetulifoliaBunge after being instilled with iron was performed in the study.【Result】The result showed that the content of iron of test tree with red iron liquid was much higher than the contrast test tree. Active iron and total iron contents in treatments were much higher than those in the control (7.5%-435.1%) and (10.2%-341.9%), respectively. In trunk infusion experiment, Fe transportation speed to the canopy in the trunk was much greater than that downward in the root (49.00%). Dilution effect of ferrite concentration was observed in the trunk infusion as well as in the root injection.【Conclusion】In the trunk or root infusion, the phenomenon of iron inactivation was observed. Measuring concentration of iron revealed that the trunk infusion was more effective in iron transport and anti-inactivation compared with root infusion. It was suggested to apply trunk infusion to correct iron deficiency chlorosis of fruit trees.

    PyrusbetulifoliaBunge; trunk infusion; root infusion; Phen-Fe

    10.6048/j.issn.1001-4330.2016.11.009

    2016-02-25

    國家自然科學基金項目(31160382);新疆維吾爾自治區(qū)重點學科果樹學建設(shè)項目(201007)

    吳玉霞(1973-),女,河南人,實驗師,研究方向為果樹組織培養(yǎng),(E-mail)wuxiabaijie@163.com

    何天明(1970-),男,甘肅人,教授,研究方向為梨栽培,(E-mail)hetianming@eyou.com

    S661.2

    A

    1001-4330(2016)11-2033-07

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